3. Vật liệu, nội dung và ph−ơng pháp nghiên cứu
3.4. Ph−ơng pháp nghiên cứu
Tên thí nghiệm: Tìm hiểu đặc điểm sinh trưởng, phát triển, đặc điểm bất dục, hữu dục của các dòng TGMS ở các thời vụ gieo khác nhau.
- Mục tiêu: Đánh giá đặc điểm nông sinh học và đặc điểm bất dục của các dòng TGMS trong điều kiện tự nhiên ở các thời vụ.
- Ph−ơng pháp bố trí thí nghiệm:
+ Vụ mùa 2006 đ2 gieo cấy 12 thời vụ. Thời gian gieo cấy nh− bảng 3.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………41 Bảng 3: Thời gian gieo cấy các thời vụ trong vụ mùa 2006 và xuân 2007
Thời vụ Ngày gieo Ngày cấy
Vụ mùa
1 19/06 07/07
2 26/06 14/07
3 03/07 21/07
4 10/07 28/07
5 17/07 04/08
6 24/07 11/08
7 31/07 18/08
8 10/08 28/08
9 20/08 08/09
10 30/08 18/09
11 10/09 28/09
12 20/09 08/10
Vô Xu©n
1 20/01 23/02
2 27/01 01/03
3 04/2 06/03
4 12/02 10/03
5 28/02 16/03
6 12/03 21/03
7 19/03 25/03
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………42 - ở các thời vụ, các dòng TGMS đ−ợc gieo mạ trong chậu vại và cấy trong ô xây, cấy khi mạ đ−ợc 18 ngày tuổi (vụ mùa), vụ xuân cấy khi mạ đạt 4,5 - 5,0 lá.
- Quy trình kỹ thuật: áp dụng theo quy trình của Phòng Nghiên cứu Lúa lai - Viện sinh học Nông nghiệp - ĐHNNI.
- Các chỉ tiêu theo dõi:
- Đặc điểm nông sinh học của các dòng TGMS + Thời gian từ gieo đến trỗ 10%.
+ Tổng số lá trên thân chính (tính từ lá thật thứ nhất đến lá đòng).
+ Chiều cao của cây (tính từ sát mặt đất đến đầu mút của bông cao nhất, không kể râu) (cm).
+ Chiều dài bông (tính từ đốt cổ bông đến đầu mút bông, không kể râu) (cm) + Chiều dài cổ bông (tính từ gối lá đòng đến đốt cổ bông) (cm).
+ Số nhánh hữu hiệu.
- Đặc điểm hình thái
+ Mầu sắc lá (quan sát toàn bộ quần thể ở thời kỳ đứng cái làm đòng).
+ Mầu sắc bẹ lá ( quan sát ở thời kỳ trước làm đòng).
+ Kiểu đẻ nhánh.
+ Góc lá đòng.
- Đặc điểm bất dục của các dòng TGMS
+ Thời gian mẫn cảm (bắt đầu, kết thúc), số ngày mẫn cảm.
+ Nhiệt độ, độ dài chiếu sáng tới hạn chuyển hoá tính dục.
+ Tỷ lệ phấn bất dục, hữu dục.
+ Kiểu bất dục: Không có hạt phấn, bất dục điển hình (ít hạt phấn, nhiều hạt phấn bất dục).
+ Hình dạng hạt phấn: Hình cầu, hình tam giác, hình thoi - không chuyÓn mÇu xanh khi nhuém trong I - KI 1%.
+ Mầu sắc vòi nhụy, mầu sắc bao phấn (quan sát khi hoa nở).
+ Thời gian hoa nở trong ngày (đ−ợc quan sát ở những ngày trời nắng
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………43 có nhiệt độ và độ ẩm thuận lợi cho lúa trỗ).
+ Tỷ lệ vòi nhụy vươn ra khỏi vỏ trấu (1 phía, 2 phía), đếm tổng số hoa trên bông, số hoa có vòi nhuỵ vươn ra ngoài 1 phía, 2 phía, đếm 5bông/1dòng
- Đánh giá khả năng chống chịu sâu bệnh trong tự nhiên (ph−ơng pháp
đánh giá và cho điểm theo IRRI).
- Đánh giá phản ứng của các dòng TGMS với các nòi vi khuẩn Xanthomonas Oryzeae gây bệnh bạc lá lúa.
3.4.2. Thí nghiệm 2:
Tên thí nghiệm: Xác định ng−ỡng chuyển đổi tính dục của các dòng TGMS nghiên cứu
Phương pháp: Dựa theo biến đổi nhiệt độ ngày đêm trong mùa mát tại vùng Hà Nội chênh lệch nhiệt độ ngày đêm khoảng 7 - 80C, chúng tôi mô
phỏng để xác định 2 thông số cơ bản về nhiệt độ và quang chu kỳ nh− sau:
Thời gian xử lý
nhiệt độ (giờ:phút) Chế độ ánh sáng Cường độ ánh sáng (lux)
Chế độ nhiệt độ (0C)
0 giê 01 – 3 giê 00 Tèi 0 20,0
3 giê 01 – 6 giê 00 Tèi 0 21,0
6 giờ 01 – 9 giờ 00 Sáng 28000 24,0
9 giờ 01 – 12 giờ 00 Sáng 40000 27,0
12 giờ 01 – 15 giờ 00 Sáng 50000 28,0
15 giờ 01 – 18 giờ 00 Sáng 30000 26,0
18 giê 01 – 21 giê 00 Tèi 0 24,0
21 giê 01 – 24 giê 00 Tèi 0 22,0
Tổng: 24 giờ 12 giờ sáng
12 giê tèi Xtb = 24,0
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………44 Các thông số này đ−ợc đặt chế độ tự động trên growth Champer. Mỗi lần xử lý 6 chu kỳ.
Quan sát lúa ở các thời vụ trong thí nghiệm 1 khi nhánh chính kết thúc phân hoá bước 3 thì bứng mỗi dòng 10 cá thể trồng vào khay tôn tưới đủ nước và xếp vào buồng xử lý. Theo dõi th−ờng xuyên các thông số đ−ợc ghi trên máy với giá trị thực bằng cách đặt nhiệt kế ngay tại khay lúa để kiểm tra nhiệt
độ và cường độ chiếu sáng.
Sau khi xử lý xong chuyển cây trồng lại vào ô xây và xử lý lặp lại đúng nh− vậy đối với các dòng gieo ở thời vụ sau đủ 3 lần lặp lại.
- Các chỉ tiêu theo dõi:
- Theo dõi các đặc điểm nông sinh học, hình thái nh− thí nghiệm 1
- Khi lúa bắt đầu trỗ ghi ngày trỗ, lấy mẫu để kiểm tra hạt phấn, cách làm nh− sau: lấy 5 hoa ch−a nở ở đầu bông chính để kiểm tra hạt phấn (nhuộm mầu hạt phấn bằng I- KI 1% và soi d−ới kính hiển vi), mỗi mẫu quan sát 5 quang tr−ờng theo dõi các chỉ tiêu:
+ Đếm số l−ợng phấn bất dục, hữu dục và qui ra tỷ lệ.
+ Mô tả kiểu bất dục: Không có hạt phấn, ít hạt phấn, nhiều hạt phấn bÊt dôc.
+ Hình dạng hạt phấn: Hình cầu, hình tam giác, vỏ hạt nhăn nheo, hình thoi...
- Phân loại:
+ Số cá thể bất dục phấn 100% (đúng ng−ỡng 240C) tiến hành cắt bông các cá thể này, để gốc mọc chét rồi thu hạt cho vụ sau.
+ Số cá thể có phấn hữu dục để nguyên cây sau khi lúa đậu hạt thì đếm tỷ lệ đậu hạt, thu hạt mẩy chín để đánh giá ở lần gieo sau.
3.4.3. Thí nghiệm 3:
Tên thí nghiệm: tìm hiểu nhiệt độ tr−ợt lên của cây có phấn hữu dục khi xử lý ở thí nghiệm 2.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………45 - Ph−ơng pháp: Vì chỉ có một buồng xử lý nhân tạo, thời gian xử lý là 6 ngày nên không thể bố trí nhiều công thức khác nhau để đánh giá chính xác
điểm nhiệt độ tới hạn chuyển đổi tính dục của các cá thể "tr−ợt" nên chúng tôi chỉ thử được với nhiệt độ trung bình ngày 24,50C với 8 grate mô phỏng tương tự với điều kiện tự nhiên nh− sau:
Thời gian xử lý nhiệt độ (giờ:phút)
Chế độ ánh sáng
Cường độ ánh sáng (lux)
Chế độ nhiệt
độ (0C)
0 giê 01 – 3 giê 00 Tèi 0 21,0
3 giê 01 – 6 giê 00 Tèi 0 22,0
6 giờ 01 – 9 giờ 00 Sáng 28000 25,0
9 giờ 01 – 12 giờ 00 Sáng 40000 27,0
12 giờ 01 – 15 giờ 00 Sáng 50000 28,0
15 giờ 01 – 18 giờ 00 Sáng 30000 26,0
18 giê 01 – 21 giê 00 Tèi 0 24,0
21 giê 01 – 1 giê 00 Tèi 0 23,0
Tổng: 24 giờ 12 giờ sáng
12 giê tèi Xtb =24,50C
Sau khi xử lý đủ thời gian (6 chu kỳ) trong Phytotron chuyển cây trồng vào ô xây và theo dõi các chỉ tiêu nh− ở thí nghiệm 2.
- Các chỉ tiêu theo dõi nh− thí nghiệm 2.