đỊA đIỂM, THỜI GIAN, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. Phương pháp nghiên cứu
2.4.1. Thiết lập quần thể và ựiều kiện nhân nuôi thắch hợp ựối với sâu ựục quả ựậu Maruca vitrata trong phòng thắ nghiệm quả ựậu Maruca vitrata trong phòng thắ nghiệm
2.4.1.1. Xác ựịnh phổ ký chủ, ký chủ ưa thắch nhất ựối với sâu ựục quả ựậu Maruca vitrata làm công thức thức ăn ựối chứng trong nhân nuôi bằng thức ăn bán công nghiệp
điều tra sâu ựục quả ựậu Maruca vitrata trên nhóm cây thuộc họ ựậu theo phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật của Viện Bảo vệ thực vật (1997).
+ Thu thập các bộ phận bị hại (lá, hoa, quả, ..) của tất cả các cây thuộc họ ựậu tại một số vùng chuyên canh rau thuộc ngoại thành Hà Nội và phụ cận.
+ Mẫu thu ựược bọc ngay bằng giấy ựa năng và làm ẩm giấy bọc ựó rồi ựặt vào hộp nhựa có nắp khoét thủng dán lưới (tránh làm mẫu bị hấp hơi). đặt hộp nhựa ựó vào túi vải, mang về phòng thắ nghiệm Viện Bảo vệ thực vật trong ngày ựể xử lý.
+ Mẫu mang về phòng thắ nghiệm lập tức dỡ ra, gỡ bỏ lớp giấy bọc bên ngoài và ựặt riêng từng mẫu (theo từng ký chủ) vào một khay nhựa. Dưới ựáy khay nhựa rải 2 Ờ 4 lớp giấy thấm mềm (tuỳ theo ựộ dày của loại giấy). Dùng bình xịt xịt nước vào chỉ ựủ làm ẩm giấy và ựặt mẫu lên trên. (Lưu ý: dàn ựều mẫu trên mặt khay, thường xuyên kiểm tra ựộ ẩm của lớp giấy và bổ sung ngay nếu cần).
Hình 2.1. điều tra, thu thập thành phần ký chủ của sâu ựục quả ựậu
Maruca vitrata ngoài ựồng ruộng
(Nguồn ảnh: Vũ Thị Thùy Trang, Viện Bảo vệ thực vật)
+ Hàng ngày kiểm tra khay ựựng mẫu. Nếu thấy có phân ựùn ra nhiều thì dùng bút lông nhẹ nhàng di chuyển sâu non sang khay thức ăn mới ựựng những quả ựậu non, tươi, sạch ựược hái về từ những ruộng không phun thuốc hóa học.
+ Khi sâu non sang tuổi 5, chuyển quả ựậu bị ựục vào khay khác (Lưu ý: nên thu nhộng ựồng loạt theo từng lứa sâu non cùng tuổi).
+ Khi nhộng khoảng 5 ngày tuổi, ựặt khay thu nhộng vào lồng nuôi chờ vũ hóa trưởng thành. Sau vũ hoá, nhận dạng loài Maruca vitrata, từ ựó xác
ựịnh thành phần ký chủ của loài (Việc nhận dạng dựa vào so sánh ựối chiếu với bộ mẫu vật chuẩn của Viện Bảo vệ thực vật).
Tiến hành ựiều tra mức ựộ phổ biến của sâu ựục quả ựậu M. vitrata trên từng loại ký chủ nhằm xác ựịnh ký chủ ưa thắch nhất của loài. đánh giá mức ựộ phổ biến theo các mức như sau:
+: Ít xuất hiện, gây hại không ựáng kể, tần suất bắt gặp 5 Ờ 20%
++: Xuất hiện thường xuyên, ựôi khi gây hại rõ rệt, tần suất bắt gặp 21 Ờ 50% +++: Xuất hiện phổ biến, gây hại nặng, tần suất bắt gặp > 50%
2.4.1.2. Xác ựịnh kiểu lồng nuôi và mật ựộ trưởng thành lây thả phù hợp với loài M. vitrata
Các cá thể trưởng thành sâu ựục quả ựậu M. vitrata thu thập ựược từ ngoài ựồng ruộng (theo trình tự như trên), sau khi vũ hoá thì ghép cặp và thả vào lồng nuôi. Tiến hành thắ nghiệm nuôi với 3 kiểu lồng khác nhau (Hình 2.2):
+/ Kiểu 1: lồng có khung làm bằng thanh thép không gỉ, bên ngoài phủ vải màn, kắch thước 30 x 30 x 30 (cm). Mật ựộ trưởng thành 25 cặp/ lồng nuôi +/ Kiểu 2: lồng có khung làm bằng ống nhựa PVC, bên ngoài phủ vải màn, kắch thước 50 x 50 x 50 (cm). Mật ựộ trưởng thành 25 cặp/ lồng nuôi
+/ Kiểu 3: lồng khung nhôm dán lưới bao xung quanh, kắch thước 60 x 60 x 60 (cm). Mật ựộ trưởng thành 25 cặp/lồng nuôi
Cho trưởng thành M. vitrata ăn thêm bằng mật ong pha loãng 10%. Xác ựịnh tuổi thọ của trưởng thành ở mỗi kiểu lồng nuôi.
Lồng nuôi kiểu 1 Lồng nuôi kiểu 2
Lồng nuôi kiểu 3 Lồng nuôi trưởng thành M. vitrata
Hình 2.2. Các kiểu lồng nuôi sâu ựục quả ựậu Maruca vitrata Fabr.
2.4.1.3. Xác ựịnh ựiều kiện phòng thắ nghiệm thắch hợp ựể phục vụ nhân nuôi quần thể sâu ựục quả ựậu M. vitrata
Quần thể sâu ựục quả ựậu M.vitrata ban ựầu ựược thiết lập thông qua quá trình thu thập từ các cây ký chủ ngoài ựồng ruộng ựem về phòng thắ nghiệm. Khi pha trưởng thành loài sâu hại này xuất hiện, tiến hành ghép cặp, thả vào lồng nuôi phù hợp. đặt cây thức ăn (cây ựậu ăn quả ở giai ựoạn 2 lá thật) vào trong lồng nuôi. Hàng ngày thay cây thức ăn mới. Chuyển cây thức ăn cũ (ựã có trứng) sang lồng khác ựể theo dõi sự phát triển hàng ngày của sâu non cho ựến khi vào nhộng.
Tiến hành nhân nuôi quần thể sâu ựục quả ựậu M. vitrata với các ựiều kiện phòng thắ nghiệm khác nhau:
+/ điều kiện 1: nhiệt ựộ 26 ổ 20C, ẩm ựộ 70 - 80% +/ điều kiện 2: nhiệt ựộ 24 ổ 20C, ẩm ựộ 65 - 75% +/ điều kiện 3: nhiệt ựộ 19 ổ 20C, ẩm ựộ 65 - 75%
Chỉ tiêu theo dõi: tỷ lệ cá thể hoàn thành phát dục ở giai ựoạn sâu non và giai ựoạn nhộng ở các ựiều kiện nuôi khác nhau.