III.4.1. ðộc tớnh của một số mẫu vi khuẩn lam ở trạng thỏi tươi và ủụng khô
ðể tỡm hiểu sự khỏc biệt giữa ủộc tớnh chiết từ mẫu tươi và mẫu ủụng khụ, hay núi cỏch khỏc ủộc tố chiết từ mẫu ủụng khụ cú bị biến tớnh khụng, chúng tôi tiến hành phân tích so sánh giá trị LC50 trên một số mẫu nghiên cứu. ðể cú thể phỏt hiện ủược chủng VKL và mẫu nước nở hoa ngoài tự nhiờn cú khả năng gõy ủộc hay khụng, chỳng tụi tiến hành thử ủộc tớnh bằng phương pháp thử sinh học trên Artemia salina.
ðây là một phương pháp mới, chi phí thấp, dễ sử dụng và không vi phạm luật cấm sử dụng ủộng vật thớ nghiệm tại một số nước. ðộc tớnh của cỏc mẫu thớ nghiệm ủược xỏc ủịnh bằng giỏ trị LC50 là nồng ủộ gõy chết 50%
Artemia salina sau 24 giờ. Giỏ trị LC50 ủược xỏc ủịnh trờn cơ sở ủường chuẩn phụ thuộc tỉ lệ chết của Artemia salina vào nồng ủộ dịch chiết của VKL. Từ cỏc ủường chuẩn nhận ủược cú thể thấy giỏ trị LC50 càng cao thỡ ủộc tớnh của mẫu VKL càng thấp và ngược lại, giỏ trị LC50 thấp tương ứng với ủộc tớnh cao của cỏc mẫu thớ nghiệm.
Kết quả phõn tớch ủược trỡnh bày cụ thể trờn bảng 8.
Bảng 8: Giỏ trị LC50 của mẫu tươi và mẫu ủụng khụ TT Mẫu nghiờn cứu ðặc ủiểm LC50
Ma NC ðK Microcystis 5.42 1
Ma NC T Microcystis 5.37 O. limosa ðK Ocillatoria 9.29 2
O. limosa T Ocillatoria 9.14
Spi ðK Spirulina n.d.
3 Spi T Spirulina n.d.
Bloom HK ðK Microcystis 4.35 4 Bloom HK T Microcystis 4.34
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 2 3 4
Mẫu nghiên cứu
L 50 mẫu tươi
mẫu ủụng khụ
Hỡnh 21: Giỏ trị LC50 của mẫu tuơi và mẫu ủó ủụng khụ 1. M.aeruginosa NC 3. Spirulina platensis
2. O. limosa 4. Mẫu nước nở hoa HK
Giỏ trị LC50 của mẫu tươi và mẫu ủụng khụ trờn hỡnh 19 khụng thấy cú sự khác biệt nhiều. Mẫu O. limosa tươi và khô có giá trị LC50 cao nhất so với các mẫu còn lại và có giá trị LC50 xấp xỉ nhau (9.14 và 9.29 mg/mL). Tương tự với mẫu M.aeruginosa NC tươi và khô, mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm ngày 14.04.2009 cũng cú giỏ trị LC50 chờnh lệch nhau khụng ủỏng kể. Riờng với mẫu Spirulina platensis, giỏ trị LC50 ở cả mẫu ủụng khụ và mẫu tươi ủều khụng xỏc ủịnh ủược.
Túm lại, với kết quả trờn cho thấy ủộc tớnh của mẫu ủụng khụ khụng bị biến tớnh so với mẫu tươi. Hơn nữa, ủặc tớnh của mẫu ủụng khụ cú thể bảo
trình bảo quản mẫu và phục vụ những nghiên cứu tiếp theo, chúng tôi sử dụng mẫu ủó ủược ủụng khụ trong cỏc nghiờn cứu của mỡnh.
III.4.2. Nghiờn cứu ủộc tớnh của một số chủng vi khuẩn lam phõn lập và mẫu nước nở hoa ngoài tự nhiên
Trong tổng số 16 mẫu nghiên cứu, có 10 mẫu phân lập và 6 mẫu nước nở hoa. Kết quả nghiên cứu cho thấy, giá trị LC50 của các mẫu này có nhiều khác biệt (bảng 9).
Bảng 9 : Giá trị LC50 của các mẫu nghiên cứu TT Mẫu nghiờn cứu ðặc ủiểm LC50
1 Spi ðK Spirulina n.d.
2 Bloom CG 1 Microcystis 23.04
3 Osp1 Ocillatoria 13.51
4 O. limosa ðK Ocillatoria 9.29
5 Bloom HK 2 Microcystis 9.71
6 Ana HK Anabaena 9.61
7 Bloom TK Microcystis 8.33
8 Bloom HV Microcystis 6.52
9 Ma HK Microcystis 5.51
10 Ma NC ðK Microcystis 5.42
11 Bloom HK 1 Microcystis 4.35
12 Bloom NC1 Microcystis 4.19
13 Bloom NC 2 Microcystis 4.11
14 Bloom CG 2 Microcystis 4.1
15 Osp2 Ocillatoria 2
16 Bloom HK 3 Microcystis 2
0 5 10 15 20 25
Bloom CG 1
Osp1 Bloom
HK 2 Ana HK
Bloom TK Bloom
HV Ma HK
Bloom HK 1
Bloom NC1 Bloom
NC 2 Bloom
CG 2 Osp2 Bloom
HK 3 Mẫu nghiên cứu
Giá trị LC50
Hình 22: Giá trị LC50 của các mẫu nghiên cứu
Bảng 9 và hình 22 cho thấy, dịch chiết từ mẫu Spirulina platensis khụng làm chết Artemia salina thớ nghiệm. Do vậy khụng thể xỏc ủịnh ủược giỏ trị LC50 của mẫu này. Kết quả này phự hợp với cỏc nghiờn cứu ủó cú về Spirulina platensi. ðõy là loài tảo khụng ủộc, ủược sử dụng nhiều làm thực phẩm chức năng và mỹ phẩm trờn thế giới. Việc xỏc ủịnh ủộc tớnh của loài này cũng là một phương thức ủể kiểm chứng, so sỏnh giữa mẫu cú ủộc và mẫu khụng ủộc. Do vậy, giỏ trị LC50 của mẫu này khụng ủược ủề cập trong các phân tích tiếp theo.
Cỏc mẫu cũn lại cú giỏ trị LC50 thay ủổi lớn, dao ủộng từ 2 mg/mL (trong mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm ngày 22.1.2010 và Ocillatoria lemmermannii) ủến 23.04 mg/mL (trong mẫu nước nở hoa ao Chựa Giàn 17.02.2007).
Giá trị LC50 của các mẫu nghiên cứu có xu hướng giảm dần từ mẫu nước nở hoa ao chựa Giàn ngày 17.02.2007 ủến mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm 22.01.2010. Và chia làm 2 nhóm:
Nhóm có giá trị LC50 cao (từ 8,33-23,04 mg/mL), bao gồm 6 mẫu:
mẫu nước nở hoa ao chùa Giàn 22.01.2010, hồ triều khúc 02.02.2007, hồ
mẫu có giá trị LC50 cao nhất là mẫu nước nở hoa ao chùa Giàn 22.01.2007 (23,04 mg/mL), Ocillatoria acuta (13,51 mg/mL), các mẫu còn lại có giá trị LC50 gần tương ủương nhau và xấp xỉ 9,5 mg/mL.
Nhóm thứ 2 là các mẫu có giá trị LC50 thấp (2-6,52 mg/mL) bao gồm 9 mẫu: mẫu nước nở hoa Hồ Văn 18.01.2007, hồ Hoàn Kiếm ngày 14.04.2009, hồ Núi Cốc 12.08.2009, hồ Núi cốc 05.10.2009, ao chùa Giàn 28.03.2007, hồ Hoàn Kiếm 22.01.2010, M.aeruginosa HK, M.aeruginosa NC Ocillatoria lemmermannii. Trong ủú 2 mẫu cú giỏ trị LC50 thấp nhất (2 mg/mL) là mẫu nở hoa hồ Hoàn Kiếm ngày 22.01.2010 và mẫu Ocillatoria lemmermannii, cỏc mẫu cũn lại cú giỏ trị LC50 tương ủương nhau, xấp xỉ 5,5 mg/mL.
Trong nghiờn cứu này, so với Spirulina platensis, cỏc mẫu ủều tiềm ẩn ủộc tớnhvớiArtemia salinaở cỏc mức ủộ LC50 khỏc nhau.