a. Dụng cụ
1. Dụng cụ thủy tinh (ống nghiệm, cốc thủy tinh, ống đong, bình định mức, bình tam giác, pipette)
2. Micropipette (100 - 1000l) b. Hóa chất Flavourzyme Phế liệu tôm Xác định thành phần hóa học Xây dựng đường
chuẩn cho pp biuret
Thủy phân bằng enzyme Alcalase Dịch thủy phân Xác định độ thủy phân Xác định thành phần axit amin So sánh 2 quy trình thủy phân bằng enzyme
Quy trình thủy phân protein đề xuất
1. NaOH 2. CuSO4.5H20 3. C4H4NaKO6.4H2O
4. BSA (Bovine serum albumin) c. Tiến hành
1. Pha thuốc thử biuret
Hòa tan 2,34375g CuSO4.5H20 và 8,0571g C4H4NaKO6.4H2O
trong 500ml nước cất, khuấy đều và cho thêm 300ml NaOH 10%. Dung dịch trên được khuấy trộn đều rồi làm đầy đến 1000ml bằng nước cất.
2. Pha dung dịch chuẩn BSA.
Hòa tan 1g BSA vào trong 50ml n ước cất rồi khuấy đều đến khi BSA tan hết rồi định mức lên 100ml bằng nước cất (hàm lượng BSA: 10mg/ml).
3. Xây dựng đường chuẩn
Chuẩn bị 6 ống nghiệm sạch, đánh số thứ tự từ 0 - 5 sau đó cho các dung dịch hóa chất vào các ống nghiệm với thể tích và thứ tự nh ư sau:
Bảng 2.1: Thể tích của các dung dịch hóa chất cho vào các ống nghiệm
Ống nghiệm Dung dịch hóa chất 0 1 2 3 4 5 BSA chuẩn(ml) 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 Nước cất(ml) 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Thuốc thử biuret(ml) 4 4 4 4 4 4 Hàm lượng BSA(mg/ml) 0 2 4 6 8 10
Sau khi đã cho đầy đủ các hóa chất ủ các ống nghiệm trên ở nhiệt độ phòng trong thời gian 30 phút.
Sau khi ủ, dung dịch trong các ống nghiệm trên được đo mật độ quang học ở bước sóng 570nm để đọc giá trị OD570 (sử dụng ống 0 làm mẫu blank).