CHƯƠNG 4. THẢO LUẬN KẾT QUẢ
4.3 Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập từ loài Nhó đông
4.3.16 Hợp chất ML-16: Geniposidic acid
Hợp chất ML-16 thu được dưới dạng bột vô định hình, không màu. Công thức phân tử của hợp chất ML-16 được xác định là C16H22O10. Phổ 1H NMR của hợp chất ML-16 cho thấy tín hiệu của 1 phân tử đường tại [δH 4,74 (d1H, d, 8 Hz, H-1 ), 3,25-3,88 (H-2 -H-6 )], 2 tín hiệu proton olefin [δH 7,53 (s, H-3), và 5,82 (s, H-7)], 2 nhóm metin tại [δH 3,19 (dd, H-5), và 2,74 (t, H-9)], 1 tín hiệu proton acetal [δH 5,18 (d, H-1)], và 2 nhóm metylen [δH 2,86 (m, H-6a), 2,13 (m, H-6b), và 4,34 (br d, H- 10a), 4,21(dd, H-10b)].
Phổ 13C NMR của hợp chất ML-16 cho thấy sự xuất hiện của 16 cacbon bao gồm 6 cacbon [δC 100,32(C-1 ), 62,66-78,37 (C-2 −C-6 )] của 1 phân tử đường, 1 nhóm cacboxylic tại [δC 170,84(COOH)], 4 tín hiệu cacbon thuộc về 2 nhóm olefin tại [δC 153,34 (C-3), 112,73 (C-4), 128,39 (C-7), và 144,82 (C-8], 1 tín hiệu cacbon của nhóm acetal [δC 98,26 (C-1)], 2 tín hiệu cacbon của nhóm metin [δC 47,01 (C- 5), và 36,66 (C-9)], còn lại 2 cacbon của nhóm metylen [δC 39,72 (C-6), và 61,45 (C-10). So sánh với dữ kiện phổ của tài liệu [131], hợp chất ML-16 được xác định là geniposidic acid.
Bảng 4. 32. Số liệu phổ hợp chất ML-16
C δH, ppm (mult., J in Hz) δC, ppm δC, ppm [131]
(500MHz,metanol–d4) (125MHz,metanol– (50MHz,CD3OD/D2O)
d4)
1 5,18 (d, 7,5) 98,26 97,37
3 7,53 (s) 153,34 148,46
4 112,73 118,47
5 3,19 (dd, 8,0, 15,5) 47,01 36,53
6 2,86 (m) 39,72 39,47 2,13 (m)
7 5,82 (br s) 128,39 129,49
8 144,82 143,02
9 2,74 (t, 7,5) 36,66 47,23
10 4,34 (br d, 14,5) 61,45 60,98
4,21 (dd, 2,0, 14,5)
11 170,85 171,40
Glucose
1 4,74 (d, 8,0) 100,32 99,76
2 3,25 (m) 74,87 74,14
3 3,41 (m) 77,85 77,45
4 3,30 (m) 71,54 70,79
5 3,31 (m) 78,37 76,97
6 3,88 (br d, 11,0) 62,66 61,86
3,66 (dd, 1,5, 11,0)
4.3.17 Hợp chất ML-17: 3R)-3-O-[β-D-Xylopyranosyl-(1-6)-β-D-
glucopyranosyl]-l-octen-3-ol
Hợp chất ML-17 thu được dưới dạng bột vô định hình, màu trắng. Công thức phân tử của ML-17 được xác định là C19H33O10. Phổ 1H NMR của hợp chất ML-17 cho thấy có 2 phân tử đường được xác định là β-D-xylopyranosyl [δH 4,36 (H-1 ), 3,23−3,88 (H-2 −H-6 )] liên kết với β-D-glucopyranosyl(δH 4,34 (H-1 ), 3,23−4,07 (H-2 −H-6 )] thông qua liên kết 1→6. Hơn nữa, 5 nhóm methylen [δH5,25 (H-5a), 5,13 (H-5b), 1,70 (H-4a), 1,54 (H-4b), 1,42 (H-5), 1,54 (H-6) và 1,35 (H-7)], 2 nhóm methine [δH5,90 (H-2) và 4,16 (H-3)], và một nhóm methyl [δH0,93 (H-8)
cũng xuất hiện trên phổ 1H NMR. Phổ 13C NMR của hợp chất ML-17 cho thấy sự xuất hiện của 19 cacbon bao gồm 11 cacbon của 2 phân tử đường, còn lại 5 cacbon của nhóm metylen [δC 116,32 (C-1), 35,87 (C-4), 25,79 (C-5), 33,18 (C-6) và 23,79 (C-7)], 2 cacbon của nhóm metine [δC 140,99 (C-2) và 82,85 (C-2)], và 1 cacbon của nhóm metyl [δC 14,54 (C-8)]. Cấu hình của hợp chất ML-17 được xác định là 3R bằng sự so sánh dữ liệu phổ với tài liệu tham khảo đã được công bố [132].
Chúng tôi xác định được hợp chất ML-17 là (3R)-3-O-[β-D-Xylopyranosyl-(1-6)-β- D-glucopyranosyl]-l-octen-3-ol.
Bảng 4. 33. Số liệu phổ hợp chất ML-17
C δH, ppm (mult., J in δH, [127] δC, ppm δC, [132]
Hz) (metanol–d4) (400MHz,metanol–
d4)
1 5,25 (dt, 1,6, 17,2) 5.21 (ddd, 1,2,1,7, 116,32 116,2
5,13 (m) 10,5)
5.10 (ddd, 1,2,1,7, 17,3)
2 5,90 (m) 5,86 (ddd, 6,8,10,5, 140,99 140,9
17,3)
3 4,16 (q, 6,6) 4,13 (dd, 6,8,12,8) 82,85 82,7
4 1,70 (m) 1,52 (m) 35,87 33,0
1,54 (m) 1,31 (m)
5 1,42 (m) 1,66 (m) 25,79 25,7
6 1,32 (m) 1,66 (m) 33,18 35,7
7 1,35 (m) 1,66 (m) 23,79 23,6
8 0,93 (t, 8,0) 0,89 (t, 6.8) 14,54 14,4
Glucose
1 4,34 (d, 7,6) 4.33 (d, 7,3) 103,43 103,3
2 3,23 (m) - 75,39 75,3
3 3,32 (m) 78,17 78,1
4 3,33 (m) 71,58 71,2
5 3,37 (m) 77,11 77,6
6 4,07 (dd, 1,6, 11,6) 69,59 69,5
3,75 (5,2, 11,6)
Xylose
1 4,36 (d, 7,6) 4,31 (d, 7,8) 105,43 105,3
2 3,20 (m) 74.98 74.9
3 3,35 (m) 77,71 77,0
4 3,50 (m ) 71,31 71,5
5 3,88 (dd, 5.2, 11.6) 66,98 66,8
3,23 (m)
4.3.18 Hợp chất ML-18: Acteoside
Hợp chất ML-18 thu được dưới dạng bột màu vàng nhạt, [α]25D− 77,4 (c = 0,31, MeOH). Công thức phân tử của hợp chất ML-18 được xác định là C29H36O15 dựa trên sự xuất hiện của píc ion giả phân tử trên phổ khối lượng EI-MS tại m/z 647 [M + Na]+. Phổ 1H- NMR của hợp chất ML-18 cho thấy tín hiệu của hai vòng thơm thế 1,3,4 ở δH 6,57 (H-6), 6,68 (H-5), 6,70 (H-2), δH 6,79 (H-5 ), 6,95 (H-6 ) và 7,06 (H-2 ). Ngoài ra, trên phổ 1H- NMR của hợp chất ML-18 còn xuất hiện tín hiệu proton đặc trưng một nhóm metyl ở δH1,09 (5 -CH3) và của một proton anomeric ở δH 5,19 (H-1 ) của một phân tử đường rhamnose và một proton anomeric của một phân tử glucose được quan sát thấy ở δH4,37 (H-1 ). Hơn nữa, trên phổ 1H- NMR của hợp chất ML-18 còn tín hiệu proton của hợp phần caffeoyl với tín hiệu vạch đôi của proton olefin trans ở δH 6,27 (H-8 ) và 7,59 (H-7 ) và các tín hiệu proton thơm của 3,4-dihydroxy phenyl ở δH 7,05 (H-2 ) , δH 6,79 (H-5 ) và δH 6,95 (H-6 ). Dạng cấu trúc AA BB của hợp chất ML-18, được chỉ ra trên phổ 1H- NMR với tín hiệu đặc trưng của hợp phần phenyletyl gồm tín hiệu proton của một nhóm etylen ở δH 2,83 (H-7), 3,72 (Hb-8), và 4,05 (Ha-8), và các tín hiệu proton thơm của 3,4- dihydroxy phenyl. Trên phổ 1H- NMR của hợp chất ML-18 xuất hiện các tín hiệu proton của α-L-rhamnopyranosyl gồm tín hiệu nhóm metin ở δH 1,09 (3H, d, 6.4 Hz, 5 -CH3) và proton anome ở δH 5,19 (1H, 1.6 Hz, H-1 ). Ngoài ra, hợp phần D- glucopyranosyl được gắn vào theo hướng β được xác định bằng tín hiệu proton anmome ở δH 4,37 (1H, d, 8 Hz, H-1 ).
Phổ 13C-NMR của hợp chất ML-18 xuất hiện 29 tín hiệu carbon gồm 12 cacbon thơm của hai hợp phần benzen thế 1,3,4 , 2 cacbon nối đôi ở δC 115.5 (C-8 ) và δC 148.1 (C-7 ), 1 cacbon nhóm metin ở δC 168,4 (C-9 ), 02 cacbon của nhóm vicinal-etyl ở δC 36,7 (C-7) và δC 72,5 (C-7 ), 6 cacbon của α-L-rhamnopyranosyl ở khoảng δC 18,6-103,2 và 6 cacbon của β - D-glucopyranosyl ở khoảng δC 62,3- 104,3. Từ các dữ kiện phổ trên và so sánh với tài liệu tham khảo [133], chúng tôi xác định được hợp chất ML-18 là acteoside. Đây là hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ chi Morinda.
Bảng 4. 34. Số liệu phổ hợp chất ML-18
C ML-18 (MeOH) [133] (MeOH)
13C-NMR 1H-NMR 13C-NMR 1H-NMR
Aglycone
1 131,6, s 131,5
2 117,1, d 6,70, d, 2,0 117,1 6,71, d, 2,1
3 146,2, s 146,1
4 144,8, s 144,6
5 116,4, d 6,68, d, 8.0 116,4 6,70, d, 8.4
6 121,4, d 6,57, dd, 8,0; 2 121,3 6,57, dd, 2,1; 8,4
7 36,7, t 2,79, t, 6,8 36,5 2,79, t, 9,6
8 72,5, t 4,05, m 72,33 4,05, m
3,72, m 3,74, m
Caffeoyl
1' 127,8, s 127,7
2' 114,8, d 7,05, d, 2,0 114,7 7,03, d, 2
3' 146,9, d 146,8
4' 149,9, s 149,8
5' 116,6, s 6,79, d, 8,0 116,6 6,79, d, 8,1
6' 123,3, d 6,95, dd, 8.0; 2 123,3 6,89, dd, 2; 8,1
7' 148,1, d 7,59, d, 16 148,1 7,56, d, 15,9
8' 115,3, d 6,27, d, 16 115,3 6,28, d, 15,9
9' 168,4, s 168,4
Glucose
1'' 104,3, d 4,37, d, 8 104,2 4,38, d, 7,8
2'' 76,3, d 3,97, s 76,2 3,40, dd, 7.8; 9,3
3'' 81,7, d 3,82, t, 9,2 81,7 3,82, t, 9,3
4'' 70,6, d 4,93, 9,2 70,4 4,94, t, 9,6
5'' 76,2, d 3,52-3,64, m 76,0 3,50-3,60, m
6'' 62,3, t 3,52-3,64, m 62,3 3,50-3,60, m
Rhamnose
1''' 103,2, d 5,19, d, 1,6 103,0 5,19, d, 1,5
2''' 72,3, d 3,93, dd, 2; 2 72,28 3,93, dd, 1,5; 3,3
3''' 72,2, d 3,52-3,64, m 72,0 3,50-3,60, m
4''' 73,9, d 3,31, m 73,8 3,30, t, 9,6
5''' 70,7, d 3,52-3,64, m 70,6 3,50-3,60, m
6''' 18,60, q 1,09, d, 6,4 18,5 1,09, d, 6,0
4.3.19 Hợp chất ML-19: Cistanoside-E
Hợp chất ML-19 thu được dưới dạng bột màu trắng, với công thức phân tử C21H32O12 dựa trên sự xuất hiện của píc ion giả phân tử trên phổ khối lượng EI-MS tại m/z 476 [M+H]. Phổ 1H và 13C-NMR của hợp chất ML-19 gần giống với hợp chất ML-18. Phổ 1H-NMR của hợp chất ML-19 xuất hiện tín hiệu của một vòng thơm thế 1,3,4 ở δH: 6,52 (H-6), 6,63 (H-5), và 6,65 (H-2). Ngoài ra, trên phổ 1H- NMR của hợp chất còn xuất hiện các tín hiệu proton đặc trưng của của một phân tử đường rhamnose gồm nhóm metin ở δH 1,21 (5 -CH3) và một proton anome ở δH 5,19 (H-1 ); và một phân tử glucose với một proton anome xuất hiện ở δH 4,26 (H- 1 ). Ngoài ra, trên phổ 1H NMR xuất hiện một tín hiệu proton metoxy tại δH 3.94 (3- OCH3) và các tín hiệu proton của hợp phần caffeoyl. Phổ 13C-NMR của hợp chất ML-19 chứa 21 tín hiệu carbon bao gồm tín hiệu ở δC 55.3 của nhóm methoxy, 12 tín hiệu cacbon thơm ở δC 18.0−102.9 và các tín hiệu cacbon của hai đơn vị đường ở δC 62.8.−104.3. Từ dữ kiện phổ và so sánh với tài liệu tham khảo [134], hợp chất
ML-19 được xác định là cistanoside-E. Đây là hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ chi Morinda.
Bảng 4. 35. Số liệu phổ hợp chất ML-19
C ML-19 (MeOH) [134] (MeOH)
13CNMR 1HNMR 13CNMR 1HNMR
Aglycone
1 131,6, s - 131,6
2 116,3, d 6,65, d, 2,0 113,9 6,6-6,9
3 146,2, s - 148,8
3-OCH3 55,3, q 3,94, s 56,6 3,82, s
4 144,7, s - 145,9
5 117,2, d 6,63, d, 8,4 116,2 6,6-6.9
6 121,3, d 6,52, dd, 8,0; 2 122,4 6,6-6,9
7 72,3, t 2,76, m 72,3 2,84
8 36,7, t 3,98, m 36.7 3,65
Glucosyl
1' 104,3, d 4,26, d, 7,6 104,2 4,05, d, 8
2' 75,7, d 3,22-3,48, m 75,5
3' 84,6, d 3,22-3,48, m 84,8
4' 70,2, d 3,22-3,48, m 70,1
5' 78,0, d 3,22-3,48, m 77,7
6' 62,8, t 3,66, m 62,8
3,83, d,14,5 Rhamnose
1'' 102,9, d 5,13, s 102,7 5,15, brs
2'' 72,2, d 3,92, m 71,9
3'' 73,4, d 3,22-3,48, m 72,3
4'' 74,1, d 3,22-3,48, m 74,0
5'' 70,3, d 3,96, m 70,3
5''-CH3 18,0, q 1,21, d, 6,4 17,9 1,25, d, 6 4.3.20 Hợp chất ML-20: Ethyl-β-D-Galatopyranoside
Hợp chất ML-20 thu được dưới dạng bột vô định hình màu trắng, với công thức phân tử C8H16O6. Phổ 1H-NMR của hợp chất ML-20 cho thấy có 1 phân tử đường được xác định là β-D- glucopyranosyl ở [(δH 4,76 (H-1 ), 3,29−3,91 (H-2
−H-6 )] liên kết với một nhóm etyl tại [δH 3,65 (1H,t, 7Hz, H-1a), 3,74 (1H, m, H- 1b), 1,22 (3H,t, 9, H-2)]. Phổ 13C-NMR của hợp chất ML-20 cho thấy sự xuất hiện của 8 cacbon bao gồm 6 cacbon của một phân tử đường ở [δC 99,98 (C-1 ), 73,61 (C-2 ), 73,72 (C-3 ), 71,97 (C-4 ), 75,24 (C-5 ), 62,82 (C-6 )] và 2 cacbon của nhóm etyl [δC 64,51 (C-1), 15,39 (C-2). Từ dữ kiện phổ và so sánh với tài liệu tham khảo [135], chúng tôi xác định được hợp chất ML-20 là Ethyl-β-D-glucopyranoside.
Bảng 4. 36. Số liệu phổ hợp chất ML-20
C δH, ppm [135] δC, ppm [135]
CDCl3 δH, ppm, D2O δC, ppm
1 3,65, t, 7 Hz 3,63, dq, 9,0; 6,5 Hz 15,39, q 16,79 3,74, m 3,96, dq, 9,0; 6,5 Hz
2 1,22, t, 9 Hz 1,25, t, 6.5 Hz 64,51, d 68,48
1' 4,76, d, 4,5 Hz 4,31, d, 7 Hz 99,98, d 104,20
2' 3,54, m 3,43-3,46, overlap 73,61, d 75.47
3' 3,47, dd, 3,5; 8,5 3,43-3,46, overlap 73,72, d 78,23 Hz
4' 3,59, m 3,56, t, 6,0 Hz 71,97, d 72,05
5' 3,23-3,29, m 3,23- 3,28, overlap 75,24, d 78,23
6' 3,61, m 3,79, m 62,82, t 63,33
3,78, m 3,84, m
4.3.21 Hợp chất ML-21: Isoacteoside
Hợp chất ML-21 thu được dưới dạng bột màu vàng nhạt với công thức phân tử C29H36O15, dựa trên sự xuất hiện của píc ion giả phân tử trên phổ khối lượng EI-MS tại m/z 624 [M+H]+. So sánh dữ kiện phổ 1H và 13C-NMR của hợp chất ML-21 và hợp chất ML-18, cho thấy gần giống nhau, tuy nhiên vẫn có sự khác biệt chút ít so với hợp chất ML-18. Cụ thể, hợp chất ML-21 có nhóm caffeoyl được gắn vào vị trí C-6 của phân tử đường glucose. Điều này được xác định bởi tương tác HMBC giữa 2 proton của nhóm metylene tại δH [4,49 (Ha-6 ), và 4,35 (Hb-6 ) và tín hiệu cacbonyl ở δC 169,3 (C-9 ). Dựa dữ kiện phổ trên và so sánh với tài liệu tham khảo [136], hợp chất ML-21 được xác định là isoacteoside. Đây là hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ chi Morinda.
Bảng 4. 37. Số liệu phổ hợp chất ML-21
Position ML-21 (MeOH) [136] (MeOH)
13CNMR 1HNMR 13CNMR 1HNMR
Aglycone
1 131,5, s 131,5
2 117,1, d 6,68, d, 1,6 117,1 6,67, d, 1,8
3 146,9, s 146,8
4 144,7, s 144,7
5 116,5, d 6,64, d, 8,0 116,4 6,63, d, 8,1 6 121,4, d 6,53, dd, 8,0; 1,6 121,3 6.53, dd, 1,8; 8,1
7 36,8, t 2,78, t, 7,6 36,7 2,79, t, 7,2
8 72,4, t 4,03, m 72,4 4,05, m
3,72, m 3,71, m
Caffeoyl
1' 127,8, s 127,8
2' 114,9, d 7,04, d, 1,6 114,9 7,03, d, 2
3' 146,2, s 146,4
4' 149,7, s 149,6
5' 116,6, d 6.77, d, 8,4 116,6 6,76, d, 8,1
6' 123,3, d 6,90, dd, 2; 8,4 123,2 6,89, dd, 2; 8,1
7' 147,4, d 7,56, d, 15.6 147,5 7,56, d, 15,9
8' 115,2, d 6,29, d, 15,6 115,2 6,29, d, 15,9
9' 169,3, s 169,2
Glucose
1'' 104,5, d 4,37, d, 7 104,5 4,33, d, 7.5
2'' 75,8, d 3,31-3,44,, m 75,8
3'' 84,1, d 3,54,, m 84,1
4'' 70,1, d 3,31-3,44,, m 70,1
5'' 75,5, d 3,54, m 75,5
6'' 64,7, t 4,49, d, 10,8 64,7 4.49, dd, 1,9; 11,4
4,35, d, 8,0 4,35, dd, 5,7; 11,4
Rhamnose
1''' 102,8, d 5,19, s 102,8 5,18, d, 1,3
2''' 72,5, d 3,95, m 72,47
3''' 72,3, d 3,31-3,44, m 72,3
4''' 74,1, d 3,31-3,44, m 74,0
5''' 70,5, d 3,99, m 70,5
6''' 18,0, q 1,25, d, 6,0 17,9 1,24, d, 6,0
4.3.22 Hợp chất ML-22: Quercetin.
Hợp chất ML-22 thu được dưới dạng bột màu vàng nhạt. Công thức phân tử của ML-22 được xác định là C15H10O7. Phổ 1H-NMR của hợp chất ML-22 cho thấy có 5 proton ở vòng thơm [δH 6,40 (1H, s, H-8); 6,18 (1H, s, H-6); 7,67 (1H, s, H-2 ), 6,88 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5 ) và 7,54 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-6 )]. Phổ 13C-NMR của hợp chất ML-22 cho thấy sự có mặt của 15 cacbon trong đó có: một nhóm cacbonyl tại δC 175,8 (C-4), 9 cacbon không liên kết với hydro [(δC 163,8 (C-7); 160,6 (C-5);
146,7 (C-2); 156,1 (C-8a); 147,6 (C-4 ); 145,0 (C-3 ); 135,7 (C-3); 122,0 (C-1 ) và 102,9 (C-4a)], 5 cabon thơm ở (δC 120,0 (C-6 ); 115,5 (C-5 ); 115,0 (C-2 ); 98,2 (C-
6) và 93,3 (C-8)]. Từ kết quả phân tích dữ liệu phổ 1H và 13C-NMR ở trên và tài liệu tham khảo [137], hợp chất ML-22 được xác định là quercetin.
Bảng 4. 38. Số liệu phổ hợp chất ML-22
δH, ppm δH [137] δC [137]
C 500MHz, DMSO- δC, ppm 300MHz,
d6 DMSO-d6
1 - - - -
2 - 146,7, s - 147,9
3 - 135,7, s - 137,2
4 - 175,8, s - 177,3
4a - 102,9, s - 104,4
5 - 160,6, s - 162,5
6 6,18, s 98,2, d 6,17, d, 2 Hz 99,3
7 - 163,8, s - 165,7
8 6,40, s 93,3, d 6,37, d, 2 Hz 94,4
8a - 156,1, s - 158,2
1' - 122, s - 124,1
2' 7,67, s 115,0, d 7,73, d, 2,0 Hz 116,0
3' - 145,0, s - 146,2
4' - 147,6, s - 148,7