Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Nghiên cứu mô tả cắt ngang, tiến cứu
- Địa điểm nghiên cứu: Bệnh viện ĐKKV Phúc Yên - Thời gian nghiên cứu: từ 08/2018 đến 06/2019 2.2.2. Cỡ mẫu và chọn mẫu
Chọn mẫu có chủ đích.
2.2.3. Các biến số nghiên cứu
- Tuổi: Chia thành các khoảng: <20; 20-29; 30-39; 40-49; 50-59 và ≥60 - Giới: Chia 2 phái nam và nữ.
- Kết quả phân loại tổn thương trên nội soi theo tiêu chuẩn phân loại Kyoto Bảng 2.1: Kết quả tổn thương trên nội soi theo phân loại Kyoto
Tổn thương Điểm
Teo niêm mạc dạ dày
0 Không C0-CI theo phân loại Kimura-Takemoto
1 Vừa CII-CIII
2 Nặng OI-OIII
Dị sản ruột
0 Không Không
1 Vừa Trong hang vị
2 Nặng Lên đến thân vị Phì đại nếp niêm
mạc
0 Âm tính Chiều rộng nếp gấp < 5-mm 1 Dương tính Chiều rộng nếp gấp ≥ 5-mm Nốt sần
0 Âm tính Không
1 Dương tính Nốt nhỏ ở hang vị Ban đỏ lan tỏa
0 Âm tính không
1 Nhẹ Các tĩnh mạch mờ nhẹ 2 Nặng Các tĩnh mạch mờ nặng - Tỷ lệ các típ và đặc điểm MBH của VDD.
- Tỷ lệ DSR qua nhuộm HE, PAS và alcian blue (pH 0,5 và 2,5).
- Tỷ lệ nhiễm HP.
2.2.4. Thiết bị, dụng cụ, hóa chất và vật liệu nghiên cứu
- Dụng cụ nội soi, sinh thiết: sử dụng máy nội soi ống mềm cửa sổ thẳng Olympus CV-170 của Nhật Bản. Kìm sinh thiết cỡ 7k và 9k (phù hợp với kênh sinh thiết của máy), máy hút, nguồn sáng, màn hình, canun ngậm miệng và thuốc thử urease test.
Hình 2.1. Máy nội soi Olympus CV 170 - Các dụng cụ để phẫu tích bệnh phẩm đại thể - Thước chia centimét 2 chiều
- Máy ảnh
- Máy xử lý mô tự động - Máy đúc khối nến
- Máy cắt mảnh mô vi thể (Microtome)
- Kính hiển vi quang học với đủ các loại vật kính 5x, 10x, 20x,40xvà 100x, có camera để chụp ảnh vi thể và kết nối với máy tính.
- Cassette chứa mảnh bệnh phẩm để xử lý
- Dung dịch formol trung tính 10% để cố định bệnh phẩm
- Các loại hóa chất cần thiết để xử lý bệnh phẩm và nhuộm tiêu bản MBH theo phương pháp HE.
- Thuốc thử được sử dụng Ure- Indol của hãng Delta- West do Viện Vệ sinh dịch tễ cung cấp. Kiểm tra lại hạn dùng, màu sắc của test trước khi dung.
2.2.5. Các bước tiến hành nghiên cứu
- Thu thập các dữ liệu về tuổi, giới theo hồ sơ bệnh án hoặc hỏi bệnh.
- Bác sĩ chịu trách nhiệm nội soi phục vụ nghiên cứu đã thành thạo kỹ thuật nội soi này và được tập huấn lại tại Khoa Tiêu hóa- bệnh viện Bạch Mai.
- Thu thập các dữ liệu về nội soi xếp loại theo hệ thống phân loại Kyoto. Học viên đi theo bác sĩ nội soi để lấy số liệu trực tiếp từ khi bắt đầu soi dạ dày.
- Nghiên cứu mô bệnh học: Bệnh phẩm sinh thiết tại 3 vùng, được cố định ngay trong formol trung tính 10%. Thực hiện các bước kỹ thuật nhuộm HE, PAS, Giemsa và BA theo thông lệ (nhuộm BA và Giemsa trên mô tại Bộ môn Giải phẫu bệnh – ĐHYHN, nhuộm HE, PAS tại khoa GPB- BVĐKKV Phúc Yên).
* Đánh giá tổn thương viêm mạn tính
- Ghi nhận tổn thương theo 3 vùng niêm mạc: Thân vị, hang vị và vị trí tổn thương.
- Tiêu chuẩn đánh giá các tổn thương MBH của VDDMT dựa trên những tiêu chuẩn của Hệ thống phân loại “Sydney System” năm 1990 trên cơ sở phân loại Whitehead năm 1985 [32].
a, Xác định mức độ viêm teo
* Viêm mạn tính nông: Tế bào biểu mô bề mặt chỉ loạn dưỡng hoặc bong tróc, các khe tuyến kéo dài, số lượng tuyến không đổi. Các tế bào viêm chỉ xâm nhập giới hạn ở 1/3 trên khe tuyến.
* Viêm teo mạn tính: Có sự phối hợp của các tổn thương biểu mô và của các tuyến. Số lượng tế bào tuyến và tế bào thành giảm, đặc biệt là giảm thể tích các tuyến. Các tế bào viêm (lympho và tương bào) vào toàn bộ chiều dầy của niêm mạc. Chia thành ba mức độ viêm teo mạn tính:
+ Viêm teo mạn tính nhẹ: Số lượng và thể tích các tuyến giảm ít, không có hoặc dị sản ruột ít, có xâm nhập lympho bào.
+ Viêm teo mạn tính vừa: Số lượng và thể tích các tuyến giảm nhiều nhưng chưa mất hoàn toàn. Mô liên kết tăng sinh làm các tuyến xa nhau. Dị sản ruột rộng. Mô đệm xâm nhập nhiều lympho bào, tương bào.
+ Viêm teo mạn tính nặng: Số lượng và thể tích các tuyến giảm rất nhiều hoặc mất hoàn toàn. Các tuyến còn lại phân thành nhóm, chiều dầy niêm mạc giảm rõ rệt. Mô liên kết tăng sinh rõ, xâm nhập viêm rõ rệt hơn, dị sản ruột rộng.
b, Tiêu chuẩn đánh giá mức độ hoạt động của VDDMT
Chủ yếu dựa vào mức độ xâm nhiễm của bạch cầu đa nhân trung tính trên nền viêm mạn tính của niêm mạc dạ dày ở trong mô đệm, các khe tuyến, biểu mô phủ bề mặt (đặc biệt vùng cổ tuyến).
- Hoạt động mạnh: Có > 20 bạch cầu đa nhân trung tính ở các vi trường với độ phóng đại 400 lần hoặc các BCĐNTT xếp thành đám, xâm nhập vào giữa các tế bào biểu mô và các khe tuyến.
- Hoạt động vừa: giữa nhẹ và nặng.
- Hoạt động nhẹ: có <10 BCĐNTT
- Không hoạt động: có rất ít bạch cầu đa nhân, chỉ ở mô đệm, không có trong tuyến.
- Đánh giá mức độ loạn sản
Xác định loạn sản khi các tế bào biểu mô tuyến mất cực tính, nhân không đều, có hạt nhân, tỷ lệ nhân /bào tương thay đổi không nhiều, chất nhiễm sắc hơi thô, không mất cực tính. Dựa trên các thay đổi về hình thái, cấu trúc chia thành ba mức độ: Loạn sản nhẹ, loạn sản vừa và loạn sản nặng.
- Đánh giá mức độ nhiễm HP trên MBH ở vật kính 400 và 1000
Đếm số lượng HP trên 5 vi trường có nhiều HP nhất, chia lấy số trung bình:
Mức độ nặng, HP (+++): Khi có trên 50 VK/1 vi trường.
Mức độ vừa, HP (++): có từ 25- 50VK/1 vi trường Mức độ nhẹ, HP (+): < 25 VK/1 vi trường.
Không nhiễm, HP (-): Khi không thấy vi khuẩn trên tất cả các vi trường.
- Đối chiếu hình ảnh tổn thương trên nội soi dạ dày sau với mô bệnh học:
+ Teo niêm mạc dạ dày + Dị sản ruột
+ Phì đại nếp gấp niêm mạc dạ dày