(con) Hỗn dịch trung hoà ở (40C/120 phút) Vị trắ tiêm Số gà có biểu hiện (con) Số gà không biểu hiện (con) Tỷ lệ biểu hiện (%) 15 ngày 30 1,5mlCP + 100TCID50/50ộl Bắp 1 29 3,33 45 ngày 30 1,5mlCP + 100TCID50/50ộl Bắp 1 29 3,33 60 ngày 30 1,5mlCP + 100TCID50/50ộl Bắp 11 19 36,67 đ/C 10 100TCID50/50ộl Bắp 10 0 100 CP: chế phẩm
Sơ ựồ 3.1: Quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể ựặc hiệu chống Gumboro
Gây tối miễn dịch cho gà ựẻ
(3 lần tiêm vacxin Gumboro vô hoạt nhũ dầu + 3 lần tiêm virus cường ựộc liều 100TCID50/50ộl)
Mổ trứng thu lòng ựỏ, xử lý với dung môi thắch hợp, ly tâm lấy phần dịch chứa kháng thể
Pha với dung môi theo tỷ lệ thắch hợp ựể ựạt hiệu giá ≥ 1/640
Kiểm tra an toàn Kiểm tra vô trùng Kiểm tra hiệu lực
đóng chai
Bảo quản ở 2 - 80C
Kiểm tra sự có mặt của virus cường ựộc (âm tắnh) + Kiểm tra hiệu giá kháng thể
* Thu trứng từ 15 ngày sau khi công cường ựộc lần cuối
3.2. Kết quả kiểm nghiệm chế phẩm kháng thể chống Gumboro
Một chế phẩm kháng thể trước khi ựưa vào sử dụng phải ựảm bảo tất cả các chỉ tiêu: vô trùng, an toàn và hiệu lực. Vì vậy, chúng tôi tiến hành kiểm tra vô trùng, an toàn và hiệu lực của chế phẩm kháng thể Gumboro.
3.2.1. Kết quả kiểm tra vô trùng chế phẩm kháng thể chống Gumboro
Chế phẩm là môi trường thuận lợi cho nhiều loại vi khuẩn, virus và nấm phát triển. Vì vậy, chỉ tiêu vô trùng ựược thường xuyên quan tâm trong suốt quá trình sản xuất chế phẩm.
để kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của 3 lô chế phẩm sản xuất thử chúng tôi tiến hành kiểm tra trên các môi trường nước thịt, thạch thường, thạch máu, thạch nấm, nước thịt gan yếm khắ. Dùng seringe hút 0,2 ml chế phẩm cấy vào các ống môi trường. để tủ ấm 370C, sau 24 - 48 giờ ựem ra kiểm tra. Riêng thạch nấm ựể ở 250C - 270C/5 - 7 ngày mới kiểm tra. Kết quả thu ựược ở bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của chế phẩm kháng thể chống Gumboro
Kết quả kiểm tra các lô chế phẩm
Môi trường
Số lượng
(ống)
điều kiện kiểm tra
I II III
Nước thịt 3 370C/24 - 48 h ─ ─ ─
Nước thịt gan yếm khắ 3 370C/24 - 48 h ─ ─ ─
Thạch thường 3 370C/24 - 48 h ─ ─ ─
Thạch máu 3 370C/24 - 48 h ─ ─ ─
Thạch nấm 3 25 - 270C/5 -7ngày ─ ─ ─
Trong các lô chế phẩm ở tất cả các môi trường: nước thịt, nước thịt gan yếm khắ, thạch thường, thạch máu, thạch nấm sau khi nuôi cấy ựem ra kiểm tra ựều cho kết quả (-) (trên các môi trường thạch không thấy có khuẩn lạc mọc, môi trường nước thịt không ựục, môi trường thạch nấm cũng không có nấm mọc), có nghĩa là không có vi trùng hay nấm trong chế phẩm .
Từ kết quả trên có thể kết luận 3 lô chế phẩm mà chúng tôi sản xuất hoàn toàn ựảm bảo chỉ tiêu vô trùng, cho phép sử dụng nghiên cứu tiếp các chỉ tiêu khác.
3.2.2. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của chế phẩm
An toàn là chỉ tiêu quan trọng ựể ựánh giá mức ựộ vô ựộc của chế phẩm. Cơ thể gà con sau khi nhận ựược chế phẩm không ựược phép có những triệu chứng bệnh tắch của bệnh, không có những thay ựổi các chỉ tiêu sinh lý, sinh hoá bình thường. Chế phẩm kháng thể không ựược gây phản ứng với cơ thể, các chất bổ trợ, dung môi pha loãng không ựược gây ựộc cho gà.
Chế phẩm ựược gọi là an toàn chỉ khi: dùng liều gấp nhiều lần sử dụng mà gà vẫn bình thường.
để kiểm tra chỉ tiêu an toàn của 3 lô chế phẩm kháng thể Gumboro trên thực tế và trong phòng thắ nghiệm, chúng tôi tiến hành như sau:
* Trong phòng thắ nghiệm: với 3 lô gà con 10 - 15 ngày tuổi, mỗi lô chế
phẩm tiến hành trên 1 lô gà con.
Bố trắ thắ nghiệm như phần phương pháp ựã trình bày, chúng tôi thu ựược kết quả ở bảng 3.5. Qua bảng 3.5 chúng tôi nhận thấy:
Ở cả 3 lô chế phẩm: Sau khi tiêm chế phẩm với liều khác nhau vào dưới da cho gà con từ 10 - 15 ngày tuổi, theo dõi sau 24 giờ kiểm tra cục bộ nơi tiêm thấy: ở liều 0,5 - 2ml thấy gà không có vấn ựề gì (không viêm sưng, thuỷ thũng, không tụ huyết...), ở liều 3ml thấy có xuất hiện phản ứng nơi tiêm (viêm sưng, thủy thũng), ựiều này có thể giải thắch ựó là do gà con còn qúa nhỏ, khi ựưa chế phẩm vào cơ thể với một liều lượng lớn (3ml) nên xuất hiện
phản ứng cục bộ ở nơi tiêm. Tiếp tục theo dõi gà trong 10 ngày sau vẫn thấy gà khoẻ mạnh, ăn uống, ựi lại bình thường, không thấy biểu hiện các triệu chứng lâm sàng. Sau ựó, mổ khám kiểm tra bệnh tắch, ựối chiếu với gà ựối chứng, thấy gà không có bệnh tắch (cơ, gan, lách, thận... bình thường), cho tỷ lệ an toàn 100%.
* Tại thực ựịa: để kiểm tra chỉ tiêu an toàn của 3 lô chế phẩm, chúng
tôi tiến hành tại xã Thọ Xuân, đan Phượng, Hà Nội. Chúng tôi sử dụng 90 gà con 21-30 ngày tuổi. Trong ựó có 60 gà thắ nghiệm và 30 gà ựối chứng. Ở 60 gà thắ nghiệm ựược chia làm 3 lô, mỗi lô 20 con, chúng tôi tiến hành sử dụng 3 lô chế phẩm, mỗi lô chế phẩm ựược tiêm cho một lô gà thắ nghiệm khác nhau với các liều 1,5ml/con và 2ml/con. Lô ựối chứng không ựược tiêm chế phẩm.
Toàn bộ gà ựược nuôi dưỡng, chăm sóc chu ựáo. Sau 24 giờ kiểm tra phản ứng cục bộ nơi tiêm, triệu chứng, bệnh tắch của gà.Và sau 30 ngày, tiến hành kiểm tra trọng lượng của gà. Kết quả ựược chúng tôi trình bày ở bảng 3.6.