CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.3 Kết quả tần số phân bố alen và tỷ lệ kiểu gen
Gen NPHS2 mã hóa cho podocin, một protein có vai trò quan trọng trong chức năng lọc của cầu thận, ảnh hưởng đến các dấu hiệu lâm sàng và kết quả cận lâm sàng của bệnh nhân. Vì vậy, ngoài việc theo dõi các chỉ số hóa sinh, các bệnh nhân còn được xác định kiểu gen của SNP rs3738423 (C>T) ở exon 2 của gen NPHS2 để tìm hiểu mối liên quan giữa SNP này và các chỉ số hóa sinh. Sau khi thực hiện quá trình giải trình tự SNP rs3738423 của exon 2 gen NPHS2, chúng tôi thực hiện đọc kết quả bằng phần mềm Bioedit cho các hình ảnh như sau:
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
30
Hình 3.1. Kết quả giải trình tự đa hình thái đơn rs3738423 ( C>T) A. Kiểu gen TT ( bệnh nhân 34). B. Kiểu gen CT ( bệnh nhân 46).
C. Kiểu gen CC ( bệnh nhân 111)
(A: màu xanh lá cây, C: màu xanh da trời, G: màu đen, T: màu đỏ) Sản phẩm giải trình tự rõ nét. Các đỉnh màu tương ứng với các nucleotid rõ ràng và không có tín hiệu nhiễu.
Tỷ lệ kiểu gen, tần số alen rs 3738423 (C>T) của exon 2 ở ba nhóm bệnh nhân được trình bày ở bảng 3.4.
A
B
C
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
31
Bảng 3.4. Tỷ lệ kiểu gen, tần số alen rs3738423 (C>T) của exon 2 ở ba nhóm bệnh nhân.
Phân nhóm rs3738423 (C>T)
NC n (%)
KTS n (%)
KTM n (%)
Kiểu gen
CC 47 (81,03%) 43 (76,79%) 28 (80%) CT 10 (17,24%) 13 (23,21%) 6 (17,14%)
TT 1 (1,73%) 0 (0%) 1 (2,86%)
Xác suất χ2 = 2,131; p = 0,712 Tần số
alen
C 0,9 0,88 0,89
T 0,1 0,12 0,11
Xác suất χ2 = 0,2; p = 0,903
Trong 149 bệnh nhân thể hiện ở bảng 3.4, ở vị trí rs3738423 (C>T) của exon 2 chủ yếu tồn tại kiểu gen CC và TC. Kiểu gen TT chiếm tỉ lệ rất nhỏ, chỉ gặp ở hai bệnh nhân ở nhóm NC và KTM. Tỉ lệ kiểu gen ở cả ba nhóm này không có sự khác biệt với χ2 = 2,131và giá trị p=0,712.
Tần số alen của rs3738423 (C>T) phân bố tuân theo định luật Hardy- Weinberg với tỷ lệ alen C ở nhóm NC:KTS:KTM tương ứng là 0,90: 0,88: 0,89.
Không có sự khác biệt giữa tần số alen được quan sát thấy ở ba nhóm này với χ2
= 0,2 và giá trị p= 0,903.
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
32 3.3.2 Liên quan đến giới tính
Bảng 3.5. Phân bố giới theo alen đột biến rs3738423 của exon 2 Phân nhóm
Giới
rs3738423 (C>T) của exon 2
Tổng (n) Không có alen đột biến
n (%)
Có alen đột biến (alen T)
n (%)
Trẻ trai 85 (72%) 23 (74,2%) 108
Trẻ gái 33 (28%) 8 (25,8%) 41
Tổng 118 (100%) 31 (100%) 149
Xác suất χ2 = 0,57; p = 0,811
Số lượng trẻ trai trong nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến và nhóm bệnh nhân mang alen đột biến luôn cao hơn số lượng trẻ gái. Tỷ lệ phần trăm trẻ trai trong hai nhóm này lần lượt là 72% và 74,2%. Tuy vậy, không có sự khác nhau về sự phân bố giới tính giữa nhóm bệnh nhân mang alen đột biến và nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến với χ2 = 0,57 và giá trị p = 0,811
3.3.3 Liên quan đến tuổi khởi phát
Bảng 3.6. Tuổi khởi phát trung bình theo alen đột biến rs3738423 của exon 2 rs3738423 (C>T) của exon 2
Số lượng (n)
Tuổi khởi phát ( ± SE) Không mang alen đột biến 118 4,1 ± 0,3
Mang alen đột biến 31 4,3 ± 0,5
p 0,779
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
33
Tuổi khởi phát trung bình ở nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến là 4,1 ± 0,3, ở nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến là 4,3 ± 0,5. Không có sự khác biệt về tuổi khởi phát giữa hai nhóm bệnh nhân với giá trị p> 0,05.
3.3.4 Liên quan đến protein máu
Bảng 3.7. Protein máu theo alen đột biến rs3738423 của exon 2 Phân nhóm
Protein máu (g/l) ( ± SE)
rs3738423 (C>T) của exon 2
Không có alen p đột biến
Có alen đột biến (alen T)
Vào viện 42,8 ± 0,8 43,8 ± 3,3 0,682
Ra viện 46,9 ± 0,5 44,5 ± 1,0 0,028
Sau ra viện 1 tháng 53,3 ± 0,6 51,5 ± 1,3 0,188 Sau ra viện 6 tháng 58,9 ± 0,9 55,8 ± 1,7 0,117
Tại thời điểm ra viện, protein máu của nhóm bệnh nhân mang alen đột biến thấp hơn có ý nghĩa so với nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến với giá trị p=0,028. Tại các thời điểm khác thì không có sự khác biệt về chỉ số protein máu giữa hai nhóm.
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
34 3.3.5 Liên quan đến albumin máu
Bảng 3.8. Albumin máu theo alen đột biến rs3738423 của exon 2 Phân nhóm
Albumin máu (g/l) ( ± SE)
rs3738423 (C>T) của exon 2
p Không có alen
đột biến
Có alen đột biến (alen T)
Vào viện 16,5 ± 1,0 17,8 ± 2,2 0,571
Ra viện 19,7 ± 0,4 18,0 ± 0,7 0,031
Sau ra viện 1 tháng 25,3 ± 0,5 22,6 ± 1,2 0,017 Sau ra viện 6 tháng 30,7 ± 0,8 27,9 ± 1,3 0,096
Tại thời điểm ra viện và sau ra viện 1 tháng, albumin máu của nhóm bệnh nhân mang alen đột biến thấp hơn có ý nghĩa so với nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến với giá trị p lần lượt là 0,031 và 0,017. Tại các thời điểm vào viện và sau ra viện 6 tháng thì không có sự khác biệt về chỉ số albumin máu giữa hai nhóm.
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
35 3.3.6 Liên quan đến protein niệu
Bảng 3.9. Protein niệu theo alen đột biến rs3738423 của exon 2 Phân nhóm
Protein niệu (mg/kg/24h) ( ± SE)
rs3738423 (C>T) của exon 2
p Không có alen
đột biến
Có alen đột biến (alen T)
Vào viện 19,4 ± 1,4 18,7 ± 3,3 0,809
Ra viện 9,7 ± 1,1 8,6 ± 2,0 0,630
Sau ra viện 1 tháng 5,0 ± 1,5 4,9 ± 1,3 0,966 Sau ra viện 6 tháng 5,1 ± 1,6 4,0 ± 1,8 0,734
Protein niệu của nhóm bệnh nhân không mang alen đột biến và nhóm bệnh nhân mang alen đột biến đều có xu hướng giảm dần theo thời gian điều trị. Tuy nhiên, không có sự khác biệt về protein niệu giữa hai nhóm bệnh nhân tại các thời điểm xét nghiệm.
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
36
3.3.7 Liên quan đến protein/creatinin niệu
Bảng 3.10. Protein/creatinin theo alen đột biến rs3738423 của exon 2 Phân nhóm
Protein/creatinin
niệu (mg/mmol) ( ± SE)
rs3738423 (C>T) của exon 2
p Không có alen
đột biến
Có alen đột biến (alen T)
Vào viện 2282,0 ± 135,1 2506,8 ± 419,3 0,509 Ra viện 1050,9 ± 64,9 1533,2 ± 390,2 0,232 Sau ra viện 1 tháng 506,6 ± 70,3 990,6 ± 391,7 0,233 Sau ra viện 6 tháng 653,4 ± 126,9 382,1 ± 116,1 0,118
Chỉ số protein/creatinin niệu của nhóm bệnh nhân mang alen đột biến và nhóm bệnh nhân không man alen đột biến có xu hướng giảm dần theo thời gian điều trị, từ lúc vào viện đến sau khi ra viện 6 tháng. Không có sự khác biệt về protein/creatinin niệu giữa hai nhóm bệnh nhân này tại các thời điểm xét nghiệm.
Bàn luận về kết quả phân bố tần số alen và tỷ lệ kiểu gen
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã xác định được 20/91 trường hợp mang alen đột biến rs3738423 của exon 2 gen NPHS2 ở trẻ mắc HCTHTP kháng thuốc.
Tỷ lệ này khá cao so với các nghiên cứu ở quần thể khác trên thế giới. Trong nghiên cứu củ Juli năm 2012 trên 97 bệnh nhi HCTHTP kháng thuốc tại
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
37
Singapore, ông đã phát hiện được 8 trường hợp mang đột biến rs3738423 ( 7 dị hợp và 1 đồng hợp) [32]. Megremis cũng phân tích 14 trường hợp HCTHTP kháng corticosteroid và phát được được 1 trường hợp mang đột biến rs3738423 dạng dị hợp tử [39]. Một nghiên cứu khác của Yu trên 23 bệnh nhân HCTHTP kháng corticosteroid, ông phát hiện được một trường hợp mang đột biến rs3738423 mang kiểu gen dị hợp tử, một trường hợp mang kiểu gen đồng hợp tử. Bên cạnh đó, Yu cũng nhận thấy không có sự khác biệt đáng kể về kiểu gen rs3738423 giữa nhóm bệnh và nhóm chứng, điều này tương đồng với nghiên cứu của chúng tôi [58].
Bên cạnh đó, chúng tôi cũng nhận thấy rằng, alen đột biến rs3738423 có ảnh hưởng đến chỉ số protein máu ra viện và albumin máu ra viện, sau ra viện 1 tháng. Cụ thể, nhóm bệnh nhân mang alen đột biến có các chỉ số này thấp hơn nhóm không mang alen đột biến. Nhưng alen đột biến rs3738423 lại không ảnh hưởng đến chỉ số protein niệu và protein/creatinin niệu. Điều này khá tương đồng với nghiên cứu của Li Zhu trên 214 bệnh nhân mắc HCTH, ông cũng chỉ ra rằng đa hình thái đơn rs3738423 không ảnh hưởng đến chỉ số protein niệu giữa các nhóm bệnh nhân [59]. Nghiên cứu của chúng tôi cũng chỉ ra rằng, alen đột biến rs3738423 không phụ thuộc vào giới tính cũng như không ảnh hưởng đến tuổi khởi phát bệnh của các bệnh nhân.