3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.3.2. Phƣơng phỏp lấy mẫu, xột nghiệm và đỏnh giỏ cƣờng độ nhiễm sỏn dõy
Bố trớ lấy mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc. Việc thu thập mẫu đƣợc tiến hành ngẫu nhiờn tại nụng hộ và cỏc trại chăn nuụi gà thả vƣờn. Số gà lấy mẫu phõn bố ở 3 huyện của tỉnh Thỏi Nguyờn gồm: Đồng Hỷ, Định Hoỏ, Phỳ Bỡnh.
Cỏc loại mẫu đƣợc xột nghiệm ngay trong ngày hoặc xột nghiệm sau khi bảo quản theo quy trỡnh bảo quản mẫu trong nghiờn cứu ký sinh trựng học.
2.3.2.1. Phương phỏp thu thập mẫu
- Mẫu phõn: Lấy toàn bộ mẫu phõn trong 1 lần thải của gà, đõy là những mẫu phõn mới thải. Để riờng mỗi mẫu phõn vào một tỳi nilon nhỏ, mỗi mẫu đều cú nhón ghi một số thụng tin để xỏc định tƣơng đối chớnh xỏc nhƣ: thời gian, địa điểm, tuổi, tớnh biệt, giống, trạng thỏi phõn và cỏc biểu hiện lõm sàng của đàn gà (nếu cú).
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Mẫu nền chuồng: Tại mỗi ụ chuồng gà, lấy mẫu ở 4 gúc chuồng và ở giữa chuồng, trộn đều đƣợc một mẫu xột nghiệm (80-100 gam/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riờng trong tỳi nilon cú nhón ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu.
- Khu vực xung quanh chuồng gà: Lấy mẫu đất bề mặt tƣơng tự nhƣ cỏch lấy mẫu nền chuồng (80 - 100 gam/mẫu).
- Mẫu đất bề mặt và mẫu nƣớc đọng ở khu vực chăn thả: Tại mỗi khu vực chăn thả, lấy cỏc mẫu nƣớc và đất. Mỗi mẫu đƣợc để riờng trong tỳi nilon cú nhón ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu (300-500 ml nƣớc đọng/mẫu, 80-100 gam đất bề mặt/mẫu).
Cỏc mẫu đƣợc xột nghiệm ngay trong ngày hoặc xột nghiệm sau khi bảo quản theo quy trỡnh bảo quản mẫu trong nghiờn cứu ký sinh trựng học.
2.3.2.2. Phương phỏp xỏc định tỷ lệ và cường độ nhiễm sỏn dõy
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm sỏn dõy:
Xột nghiệm bằng phƣơng phỏp lắng cặn Benedek (1943): Cho từng mẫu phõn vào cốc thuỷ tinh, thờm 5-10 lần nƣớc, khuấy tan rồi để yờn 15-20 phỳt cho lắng xuống, gạn nƣớc trờn đi, lại cho nƣớc vào, rửa đi rửa lại nhiều lần cho đến khi nƣớc trong suốt, cho cặn vào đĩa petri, đặt trờn tờ giấy màu đen để quan sỏt bằng mắt thƣờng và kớnh lỳp tỡm đốt sỏn dõy. Nếu cú đốt sỏn thỡ dựng bỳt lụng hoặc lụng gà khời ra. Những mẫu phõn tỡm thấy đốt sỏn dõy đƣợc xỏc định là cú nhiễm, ngƣợc lại là khụng nhiễm.
* Phương phỏp xỏc định cường độ nhiễm sỏn dõy: Cƣờng độ nhiễm sỏn dõy đƣợc xỏc định bằng số lƣợng đốt sỏn/lần thải phõn bằng phƣơng phỏp soi kớnh lỳp, đếm tất cả những đốt sỏn cú trong mẫu và quy định cỏc cƣờng độ nhiễm sau:
- Cƣờng độ nhiễm nhẹ: 10 đốt/lần thải phõn.
- Cƣờng độ nhiễm trung bỡnh: 11 - 20 đốt/lần thải phõn. - Cƣờng độ nhiễm nặng: 21 - 40 đốt/lần thải phõn.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.3. Quy định một số yếu tố liờn quan đến cỏc chỉ tiờu nghiờn cứu dịch tễ bệnh sỏn dõy ở gà thả vƣờn
2.3.3.1. Lứa tuổi gà
Tuổi gà đƣợc phõn ra theo 3 lứa tuổi: ≤ 3 thỏng tuổi;
> 3 – 6 thỏng tuổi; > 6 thỏng tuổi.
Để thực hiện nội dung này, chỳng tụi chỉ thu thập mẫu phõn của những đàn gà xỏc định đƣợc một cỏch chớnh xỏc nằm trong lứa tuổi nào. Số mẫu xỏc định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm sỏn dõy theo tuổi gà đó thu thập đƣợc nhƣ sau:
Tuổi gà 3 thỏng tuổi > 3-6 thỏng tuổi > 6 thỏng tuổi Khụng xỏc định đƣợc tuổi Số mẫu kiểm tra (mẫu) 138 223 114 1.862
* Ghi chỳ: Những mẫu khụng xỏc định đƣợc tuổi của gà thỡ chỉ dựng để tớnh tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm sỏn dõy theo xó điều tra, khụng dựng để tớnh tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm sỏn dõy theo lứa tuổi.
2.3.3.2. Vựng địa hỡnh
Căn cứ vào bản đồ địa lý của tỉnh Thỏi Nguyờn để phõn cỏc địa phƣơng nghiờn cứu thành 3 vựng địa hỡnh:
- Vựng nỳi cao - Vựng trung du - Vựng đồng bằng.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.3.3. Mựa vụ trong năm
Theo dừi ở 4 mựa:
- Xuõn : từ thỏng 2 - thỏng 4; - Hố : từ thỏng 5 - thỏng 7; - Thu : từ thỏng 8 - thỏng 10;
- Đụng : từ thỏng 11 - thỏng 1 năm sau.
2.3.3.4. Giống gà
Là cỏc giống đang đƣợc nuụi thả vƣờn phổ biến ở tỉnh Thỏi Nguyờn: Gà địa phƣơng, Lƣơng Phƣợng, Ai cập, Tam Hoàng... Chỳng tụi chỉ xỏc định chỉ tiờu này với những đàn gà xỏc định đƣợc chớnh xỏc là giống gỡ.
Giống gà Ri Tam Hoàng Lƣơng Phƣợng Ai Cập Chọi Khụng xỏc định đƣợc giống Số mẫu kiểm tra (mẫu) 131 87 92 47 56 1.944 ∑ 413 1.944
Việc xỏc định giống gà dựa trờn đặc điểm hỡnh thỏi của giống gà, kết hợp điều tra nguồn gốc nhập gà của hộ chăn nuụi.
* Ghi chỳ: Mẫu phõn của những đàn gà khụng xỏc định chớnh xỏc giống chỉ để tớnh tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm sỏn dõy theo xó điều tra, khụng dựng để tớnh tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm sỏn dõy theo giống.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.4. Phƣơng phỏp nghiờn cứu đốt và trứng sỏn dõy ở ngoại cảnh
2.3.4.1. Phương phỏp xột nghiệm đốt và trứng sỏn dõy ở mẫu chất độn nền chuồng và khu vực chăn thả
Mẫu lấy về đƣợc xột nghiệm ngay trong ngày, những mẫu chƣa xột nghiệm ngay đƣợc bảo quản ở nhiệt độ 2-40
C, khụng quỏ 3 ngày. Xột nghiệm đốt sỏn dõy bằng phƣơng phỏp gạn rửa sa lắng và xột nghiệm trứng sỏn dõy bằng phƣơng phỏp Fullerborn.
2.3.4.2. Phương phỏp xỏc định thời gian phõn huỷ đốt và sức đề khỏng của trứng sỏn dõy trong phõn, trong đất, trong nước
* Phương phỏp thu nhận đốt sỏn từ phõn gà mới thải:
Dựng phƣơng phỏp gạn rửa sa lắng để phõn lập và thu nhận một số lƣợng lớn đốt sỏn từ phõn gà mới thải. Sử dụng những đốt sỏn này để bố trớ cỏc thớ nghiệm.
* Thớ nghiệm 1: Theo dừi thời gian phõn huỷ đốt, giải phúng trứng sỏn và thời gian sống của trứng trong phõn (trường hợp đốt và trứng sỏn lưu cữu trong phõn, chưa gặp ký chủ trung gian)
- Lụ 1: gồm 5 mẫu, mỗi mẫu là hỗn hợp phõn của 30 gà nhiễm sỏn dõy nặng (cú 30 - 50 đốt/lần thải phõn). Mỗi mẫu đƣợc đặt vào một đĩa petri, để mẫu ở điều kiện nhiệt độ và ẩm độ khụng khớ bỡnh thƣờng.
- Lụ 2: Bố trớ nhƣ lụ 1, chỉ khỏc là cỏc mẫu phõn luụn đƣợc duy trỡ trong trạng thỏi ẩm ƣớt.
+ Mỗi ngày lấy 2 gam phõn từ mỗi mẫu, xột nghiệm bằng phƣơng phỏp lắng cặn tỡm đốt sỏn để xỏc định thời gian phõn huỷ đốt sỏn.
+ Sau khi đốt sỏn đó phõn huỷ hết, cứ 3 ngày lấy 2-3 gam phõn từ mỗi mẫu, xột nghiệm trứng sỏn dõy bằng phƣơng phỏp Fullerborn để xỏc định thời gian sống của trứng.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hỡnh 2.1: Ảnh xột nghiệm trứng sỏn dõy bằng phương phỏp Fullerborn
Hỡnh 2.2. Ảnh thớ nghiệm theo dừi thời gian phõn huỷ của đốt sỏn và thời gian sống của trứng trong phõn
* Thớ nghiệm 2: Theo dừi thời gian phõn huỷ đốt, giải phúng trứng sỏn và thời gian sống của trứng trong lớp đất bề mặt (trƣờng hợp đốt và trứng sỏn dõy phỏt tỏn ra đất, chƣa gặp ký chủ trung gian)
Cho đất ở mỗi độ ẩm (<10%; 10 - 20%; 20 - 30%; 30 - 40%) vào 8 khay (kớch thƣớc 30 x 20 x 10 cm) thành một lớp dày khoảng 1,5 - 2 cm (mỗi độ ẩm đƣợc bố trớ trong 2 khay (khay 1 và khay 2). Khay 1 dựng để xỏc định
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
thời gian phõn huỷ đốt, khay 2 để xỏc định thời gian sống của trứng sỏn dõy trong đất). Dựng cỏc thanh gỗ mỏng ngăn thành 32 ụ nhỏ. Mỗi ụ đặt 5 đốt sỏn dõy vào giữa lớp đất. Duy trỡ độ ẩm đất theo từng lụ thớ nghiệm:
Lụ I: Đất cú ẩm độ < 10% Lụ II: Đất cú ẩm độ 10% - 20% Lụ III: Đất cú ẩm độ 20% - 30% Lụ IV: Đất cú ẩm độ 30% - 40%
Mỗi ngày lấy đất cú đốt sỏn ở một ụ trong khay 1 để xỏc định thời gian phõn huỷ đốt sỏn trong đất bằng phƣơng phỏp lắng cặn.
Sau khi toàn bộ số đốt sỏn ở khay 1 đó phõn huỷ hết, cứ 3 ngày lấy đất cú trứng sỏn dõy ở một ụ trong khay 2 để xỏc định thời gian tồn tại của trứng sỏn dõy trong đất bằng phƣơng phỏp Fullerborn.
Thớ nghiệm đƣợc bố trớ trong cỏc mựa: Xuõn, Hố, Thu, Đụng.
Phương phỏp xỏc định và duy trỡ độ ẩm đất: Xỏc định độ ẩm của đất trƣớc khi thớ nghiệm theo tài liệu của Lờ Văn Khoa và cs, 1996 [4]. Độ ẩm của đất đƣợc xỏc định bằng cỏch: lấy 100 gam đất, sấy ở 1050C cho đến khi khối lƣợng giữa cỏc lần cần khụng đổi thỡ dừng lại và tớnh ẩm độ theo cụng thức:
Wt (%) = (a/b) x 100
Trong đú: a: Lƣợng nƣớc mất sau khi sấy b: Khối lƣợng đất trƣớc khi sấy Wt: Độ ẩm của đất (%).
Hàng ngày kiểm tra độ ẩm đất ở cỏc khay bằng phƣơng phỏp cảm quan. Duy trỡ độ ẩm nhƣ vậy trong suốt thời gian thớ nghiệm (dựng bỡnh phun sƣơng bổ sung nƣớc để duy trỡ độ ẩm cần thiết).
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hỡnh 2.3: Ảnh lụ thớ nghiệm theo dừi thời gian phõn huỷ của đốt và thời gian sống của trứng ở lớp đất bề mặt
* Thớ nghiệm 3: Theo dừi thời gian phõn huỷ đốt, giải phúng trứng sỏn và thời gian sống của trứng trong nước (trường hợp đốt và trứng sỏn dõy rơi vào nước ở khu vực chăn thả gà, chưa gặp ký chủ trung gian)
Bố trớ thớ nghiệm gồm 10 đĩa petri chứa cỏc mẫu nƣớc thu thập từ cỏc khu vƣờn chăn thả gà. Mỗi đĩa petri chứa một lớp nƣớc cao khoảng 1cm. Cho vào mỗi đĩa petri 30 đốt sỏn.
- Hàng ngày quan sỏt bằng kớnh lỳp để xỏc định thời gian phõn huỷ đốt. - Sau khi đốt đó phõn huỷ hết, cứ 3 ngày kiểm tra 1 lần bằng cỏch: dựng đũa thuỷ tinh khuấy đều nƣớc trong đĩa petri, dựng cụng tơ hỳt hỳt khoảng 1 ml nƣớc ở mỗi đĩa petri, xột nghiệm tỡm trứng sỏn dõy trong nƣớc bằng phƣơng phỏp Darling.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hỡnh 2.4: Ảnh thớ nghiệm xỏc định thời gian tồn tại của đốt, trứng sỏn dõy trong nước
2.4. PHƢƠNG PHÁP XỬ Lí SỐ LIỆU
Số liệu thu đƣợc đƣợc xử lý bằng phƣơng phỏp thống kờ sinh học (Nguyễn Văn Thiện (2000) [21]), trờn phần mềm Excel 2003.
- Số trung bỡnh cộng: n m P Trong đú: P: Số trung bỡnh cộng
m: số mẫu gà cú đặc điểm nghiờn cứu. n: tổng số mẫu.
- Sai số của số trung bỡnh: mp = mq = n q p. = n p p(1 )
Trong đú: mp và mq: sai số của p và q.
p và q: tỷ lệ % cỏc thành viờn cú và khụng cú đặc điểm nghiờn cứu . n: dung lƣợng mẫu.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Cụ thể hoỏ bằng một số cụng thức tớnh tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm sỏn dõy gà nhƣ sau:
Tỷ lệ nhiễm (%) = Số mẫu nhiễm sỏn dõy gà x 100 Số mẫu kiểm tra
Cƣờng độ nhiễm (%) = Số mẫu nhiễm ở mỗi cƣờng độ x 100 Số mẫu nhiễm
Tỷ lệ nhiễm theo tuổi (%)= Số mẫu nhiễm sỏn dõy ở mỗi lứa tuổi x 100 Số mẫu kiểm tra ở tuổi đú
Tỷ lệ nhiễm theo giống gà (%) = Số mẫu nhiễm sỏn dõy ở mỗi giống x 100 Số mẫu kiểm tra ở giống đú
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
CHƢƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. TèNH HèNH NHIỄM SÁN DÂY Ở GÀ THẢ VƢỜN CỦA TỈNH THÁI NGUYấN THÁI NGUYấN
3.1.1. Cỏc loài sỏn dõy ký sinh ở gà thả vƣờn của một số huyện thuộc tỉnh Thỏi Nguyờn Thỏi Nguyờn
Theo Nguyễn Thị Kỳ (1994) [7], Nguyễn Thị Lờ (1996) [11], cú 12 loài sỏn dõy ký sinh ở gà đó đƣợc tỡm thấy ở Việt Nam : Cotugina digonopora, Davainea proglottina, R. echinobothrida, R. georgiensis, R. penetrans, R. prnetrans nova, R. peradenica, R. tetragona, R. volzi, R. macassariensis, R. tinguiana, R. cesticillus.
Bằng phƣơng phỏp mổ khỏm, thu thập và định loài sỏn dõy ở Viện sinh thỏi và Tài nguyờn sinh vật, chỳng tụi đó xỏc định đƣợc 5 loài sỏn dõy ký sinh ở gà của 3 huyện thuộc tỉnh Thỏi Nguyờn nhƣ sau :
- Huyện Phỳ Bỡnh : Phỏt hiện đƣợc 4 loài sỏn dõy gồm: R. cesticillus, R. volzi, R. tetragona, R. echinobothrida.
- Huyện Đồng Hỷ : Phỏt hiện đƣợc 4 loài sỏn dõy gồm: R. volzi, R. tetragona, R. echinobothrida, Cotugina digonopora.
- Huyện Định Húa : Phỏt hiện đƣợc 3 loài sỏn dõy gồm: R. cesticillus, R. tetragona, R. echinobothrida.
Qua bảng 3.1 cho thấy:
- Gà nuụi ở 3 huyện của tỉnh Thỏi Nguyờn nhiễm 5 loài sỏn dõy, đú là:
R. cesticillus, R. volzi, R. tetragona R. echinobothrida, Cotugnia digonopora. Trong đú, loài Cotugnia digonopora thuộc giống Cotugnia, họ Davaineidae,
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
thuộc phõn giống Raillietina, họ Davaineidae của lớp Cestoda. Đõy là 5 loài sỏn dõy phổ biến và gõy tỏc hại lớn cho gà của nhiều nƣớc trờn thế giới, trong đú cú Việt Nam.
Bảng 3.1: Những loài sỏn dõy ký sinh ở gà thả vƣờn của 3 huyện thuộc tỉnh Thỏi Nguyờn
Thành phần loài sỏn dõy Vị trớ ký sinh Phõn bố (huyện) Tần suất xuất hiện (%) Phỳ Bỡnh Đồng Hỷ Định Hoỏ R. cesticillus (Molin, 1858) Ruột non, ruột già + - + 66,67 R. volzi (Fuhrmann, 1905) Ruột non, ruột già + + - 66,67 R. tetragona (Dolin, 1858) Ruột non, ruột già + + + 100 R. echinobothrida (Megnin, 1881) Ruột non, ruột già + + + 100 Cotugnia digonopora (Pasquale, 1890) Ruột non - + - 33,33 Tổng loài phỏt hiện - 4 4 3 -
* Ghi chỳ: (+): Cú phỏt hiện thấy (-): Khụng phỏt hiện thấy
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hỡnh 3.1: Ảnh đốt và đầu sỏn dõy R. echinobothrida
(tiờu bản nhuộm Carmin, x 400)
Hỡnh 3.2: Ảnh đốt và đầu sỏn dõy R. tetragona
(tiờu bản nhuộm Carmin, x 400)
Hỡnh 3.3: Ảnh đốt và đầu sỏn dõy R. cesticillus
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hỡnh 3.4: Ảnh đốt và đầu sỏn dõy R. volzi
(tiờu bản nhuộm Carmin, x 400)
Hỡnh 3.5: Ảnh đốt và đầu sỏn dõy Cotugnia digonopora
(tiờu bản nhuộm Carmin, x 400)
- 5 loài sỏn dõy trờn ký sinh ở ruột non và ruột già đƣờng tiờu húa, ký sinh nhiều ở 2 vị trớ là hồi tràng (thuộc ruột non) và đoạn đầu manh tràng (thuộc ruột già).
Ruột non là cơ quan hấp thu chớnh của ống tiờu húa, đặc điểm cấu tạo của ruột non thuận lợi cho sự hấp thu cỏc chất dinh dƣỡng. Tại đõy, tất cả cỏc chất dinh dƣỡng đều đƣợc hấp thu ở ruột non nhƣ đƣờng đơn, amino axit đƣợc hấp thu vào mỏu, cỏc axit bộo đƣợc hấp thu vào mạch bạch huyết... (Hoàng Toàn Thắng và cs (2006) [17], ). Nhờ ký sinh tại ruột non mà sỏn dõy
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
cú điều kiện sinh trƣởng, phỏt triển. Phần dƣỡng chấp khụng đƣợc hấp thu sẽ đƣợc chuyển xuống manh tràng qua van hồi manh tràng, vỡ vậy chỳng tụi cho rằng van hồi manh tràng cũng là vị trớ sỏn dõy ký sinh nhiều.
Nhƣ vậy, thành phần loài sỏn dõy ký sinh ở gà thả vƣờn của 3 huyện trờn cũng nằm trong cỏc loài mà một số tỏc giả đó thấy ở Việt Nam. Tuy nhiờn, sự phõn bố của cỏc loài sỏn dõy và ký chủ trung gian của chỳng phụ thuộc vào nhiều yếu tố. Trong đú, cỏc yếu tố tự nhiờn (địa hỡnh, khớ hậu...) cú liờn quan đến sự phõn bố của sỏn dõy.