3.3.2 Nội dung 1: Nghiên cứu thủy phân phụ phẩm thịt dè cá tra
3.3.2.2 Thí nghiệm 2: Xác định các thông số động học v max và k m thủy phân thịt dè cá bằng 3 enzyme ngoại bào
a) Thí nghiệm: Xác định các thông số động học vmax và km thủy phân thịt dè cá bằng enzyme bromelain
* Mục đích: Xác định thông số động học vmax, km của enzyme bromelain thủy phân cơ chất phụ phẩm cá tra đã tách béo bằng dung dịch NaHCO3 ở nồng độ tối ưu của thí nghiệm tách béo (cơ chất thủy phân).
* Bố trí thí nghiệm
- Thí nghiệm một nhân tố.
- Cố định pH=6,5 và nhiệt độ 55oC tối ưu của enzyme.
- Cố định nồng độ enzyme bromelain (1,5 mg) và thời gian thủy phân 30 phút.
- Nhân tố B: Nồng độ cơ chất (g thịt phụ phẩm cá tra xay đã tách béo bằng dung dịch NaHCO3).
B1: 0,1 B7: 2,0
- Nghiệm thức: 11 x 1 = 11.
- Số lần lập lại: 3 lần.
- Tổng số đơn vị thí nghiệm: 11 x 3 = 33.
* Tiến hành thí nghiệm
Cơ chất thủy phân được cân khối lượng như trên, sau đó pha trộn với 10 mL dung dịch đệm phosphate pH = 6,5, enzyme bromelain cũng được pha với nồng độ như đã nêu. Enzyme và cơ chất được ủ trên bể điều nhiệt ở 55oC trong thời gian 30 phút trước khi tiến hành thủy phân. Sau khi ủ 30 phút, hút 0,5 mL (1,5 mg) dung dịch enzyme cho vào các bình dung dịch cơ chất và tiến hành thủy phân trong 30 phút. Bất hoạt enzyme để kết thúc quá trình phản ứng
bằng TCA 5%, ổn định dung dịch trong 30 phút, sau đó đem lọc. Lấy dịch lọc và tiến hành các bước xác định hàm lượng tyrosine sinh ra theo phương pháp Anson cải tiến.
Mẫu đối chứng cũng được tiến hành tương tự nhưng dung dịch TCA 5%
được thêm vào ngay trước khi bổ sung enzyme vào cơ chất.
* Chỉ tiêu theo dõi
Xác định hàm lượng tyrosine sinh ra sau khi thủy phân theo phương pháp Anson cải tiến, xác định các thông số động học vmax, km bằng phần mềm SAS 9.1.3 Portable.
b) Thí nghiệm: Xác định các thông số động học vmax và km thủy phân thịt dè cá bằng enzyme papain
* Mục đích: Xác định các thông số động học vmax, km của enzyme papain thủy phân cơ chất phụ phẩm cá tra đã tách béo bằng dung dịch NaHCO3 ở nồng độ tối ưu của thí nghiệm tách béo.
* Bố trí thí nghiệm
- Thí nghiệm một nhân tố.
- Cố định pH 7,5 và nhiệt độ 55oC.
- Cố định nồng độ enzyme papain (1 mg) và thời gian thủy phân 30 phút.
- Nhân tố C: Nồng độ cơ chất (g thịt phụ phẩm cá tra xay đã tách béo bằng dung dịch NaHCO3).
C1: 0,1 C7: 2,0
- Nghiệm thức: 11 x 1 = 11.
- Số lần lập lại: 3 lần.
- Tổng số đơn vị thí nghiệm: 11 x 3 = 33.
* Tiến hành thí nghiệm: Cơ chất thủy phân được cân khối lượng như trên, sau đó pha trộn với 10 mL dung dịch đệm phosphate pH 7,5, enzyme papain cũng được pha với nồng độ như đã nêu. Enzyme và cơ chất được ủ trên bể điều nhiệt ở 55oC trong thời gian 30 phút trước khi tiến hành thủy phân.
Sau khi ủ 30 phút, hút 0,5 mL (1 mg) dung dịch enzyme cho vào các bình dung dịch cơ chất và tiến hành thủy phân trong 30 phút. Bất hoạt enzyme để kết thúc quá trình phản ứng bằng TCA 5%, ổn định dung dịch trong 30 phút,
sau đó đem lọc. Lấy dịch lọc và tiến hành các bước xác định hàm lượng tyrosine sinh ra bằng phương pháp Anson cải tiến.
Mẫu đối chứng cũng được tiến hành tương tự nhưng dung dịch TCA 5%
được thêm vào ngay trước khi bổ sung enzyme vào cơ chất thủy phân.
* Chỉ tiêu theo dõi: Xác định hàm lượng tyrosine sinh ra sau khi thủy
phân theo phương pháp Anson cải tiến, xác định các thông số động học vmax, km bằng phần mềm SAS 9.1.3 Portable.
c) Thí nghiệm: Xác định các thông số động học vmax và km thủy phân thịt dè cá bằng enzyme neutrase
* Mục đích
Xác định các thông số động học vmax, km của enzyme neutrase thủy phân cơ chất phụ phẩm cá tra đã tách béo bằng dung dịch NaHCO3 ở nồng độ tối ưu của thí nghiệm tách béo.
* Bố trí thí nghiệm
- Thí nghiệm một nhân tố.
- Cố định pH 6,5 và nhiệt độ 50oC.
- Cố định nồng độ enzyme neutrase (0,5 mg) và thời gian thủy phân 30 phút.
- Nhân tố D: Nồng độ cơ chất (g thịt phụ phẩm cá tra xay đã tách béo bằng dung dịch NaHCO3).
D1: 0,1 D7: 2,0
- Nghiệm thức: 11 x 1 = 11.
- Số lần lập lại: 3 lần.
- Tổng số đơn vị thí nghiệm: 11 x 3 = 33.
* Tiến hành thí nghiệm
Cơ chất thịt dè cá thủy phân được cân khối lượng từ 0,1 đến 4g, sau đó pha trộn với 10 mL dung dịch đệm phosphate pH 6,5, enzyme neutrase cũng được pha với nồng độ như cơ chất. Enzyme và cơ chất được ủ trên bể điều nhiệt ở 50oC trong thời gian 30 phút trước khi tiến hành thủy phân. Sau khi ủ 30 phút, hút 0,5 mL (0,5 mg) dung dịch enzyme cho vào các bình dung dịch cơ chất và tiến hành thủy phân trong 30 phút. Bất hoạt enzyme để kết thúc quá
trình phản ứng bằng TCA 5%, ổn định dung dịch trong 30 phút, sau đó đem lọc. Lấy dịch lọc và tiến hành các bước xác định hàm lượng tyrosine sinh ra bằng phương pháp Anson cải tiến.
Mẫu đối chứng cũng được tiến hành tương tự nhưng dung dịch TCA 5%
được thêm vào ngay trước khi bổ sung enzyme vào cơ chất.
* Chỉ tiêu theo dõi
Xác định hàm lượng tyrosine sinh ra sau khi thủy phân theo phương pháp Anson cải tiến, xác định các thông số động học vmax, km bằng phần mềm SAS 9.1.3 Portable.