4.3.1. Kết quả phân tích RT-PCR trên mẫu lúa và rầy vụ xuân.
Để xác định chính xác nguyên nhân gây bệnh, chúng tôi đã thu thập các mẫu cây biểu hiện triệu chứng giống bệnh vi rút lùn sọc đen và tiến hành kiểm tra bằng phương pháp RT-PCR với cặp mồi đặc hiệu được thiết kê trên gen S10 của vi rút lùn sọc đen phương Nam là cặp mồi RB-S10-F2 và RB-S10-R2 để kiểm tra mẫu bệnh trên lúa, rầy. Qúa trình chiết RNA tổng số từ các mẫu bệnh bằng kít TriPure theo hướng dẫn của nhà sản xuất (phương pháp kiểm tra RT-PCR).
Kết quả kiểm tra được thể hiện ở bảng 4.9 cho thấy trên tổng số 15 mẫu thử thì có 5 mẫu dương tính với virus SRBCDV, Khi điện di bằng gel agarose các mẫu này cho sản phẩm rừ nhất. Với phỏt hiện bằng RT-PCR xỏc định được đõy là vi rỳt lúa lùn sọc đen phuơng Nam thuộc chi Fijivirus, họ Reoviridae.
Bảng 4.9. Kết quả phân tích RT-PCR phát hiện vi rút lùn sọc đen trên lúa, rầy tại Tiền Hải – Thái Bình vụ Xuân năm 2010.
TT Ngày thu Giống Giai đoạn Triệu chứng RT-PCR
1 19/3 Khang dân 18 Mạ Cây bình thường, có nhiều vết nhăn ngang trên lá -
2 19/3 Bắc thơm số7 Mạ Cây bình thường, có nhiều vết nhăn ngang trên lá -
3 19/3 Nếp TK 90 Mạ Cây bình thường, có nhiều vết nhăn ngang trên lá -
4 21/3 Nhị ưu 838 Đẻ nhánh Cây lùn, xanh đậm, cứng +
5 21/3 Nếp TK 90 Đẻ nhánh Cây thấp lùn, xoắn ngọn lá, rách mép lá, nhiều vết nhăn ngang -
6 25/3 Bắc thơm số7 Đẻ nhánh Cây lùn, xanh đậm, cứng -
7 25/3 Khang dân 18 Đẻ nhánh Cây lùn, xanh đậm, cứng +
8 19/3 VN10 Đẻ nhánh Cây lùn, xanh đậm, cứng +
9 19/3 Thục hưng Đẻ nhánh Cây lùn, xanh đậm, cứng
10 29/3 Bắc thơm số 7 Đẻ nhánh Cây lùn, xanh đậm, cứng +
11 29/3 Nhị ưu 986 Đẻ nhánh Cây thấp lùn, xoắn ngọn lá, rách mép lá, nhiều vết nhăn ngang -
12 19/3 BC 15 Đẻ nhánh Rách mép lá, trắng mép lá -
13 25/3 Thanh ưu Đẻ nhánh Cây thấp lùn, xoắn ngọn lá, rách mép lá, nhiều vết nhăn ngang -
14 21/3 Nếp cẩm Đẻ nhánh Rách mép lá, trắng mép lá -
15 17/3 Rầy lưng trắng Trưởng thành +
5/15
4.3.2. Kết quả phân tích RT-PCR trên mẫu lúa và rầy vụ mùa.
Trong số các mẫu lấy ngoài đồng ruộng có triệu chứng lùn sọc đen khá điển hình (có sọc trắng trên thân, khi cây lúa già thì chuyển màu đen), cây bệnh được gửi về giám định, dưới dạng tươi để làm nguồn lây nhiễm nhân tạo. Để khẳng định chắc chắn các cây lúa thu thập tại huyện Tiền Hải - Thái Bình bị nhiễm vi rút lùn sọc đen nhằm làm nguồn lây nhiễm nhân tạo cho các thí nghiệm tiếp theo chúng tôi đã tiến hành kiểm tra bằng phương pháp RT-PCR trong vụ mùa năm 2010. Kết quả kiểm tra được thể hiện ở bảng 4.10.
Bảng 4.10. RT-PCR phát hiện vi rút lùn sọc đen trên lúa, rầy tại Tiền Hải - Thái Bình năm 2010.
TT Mã số mẫu Gai đoạn RT-PCR
1 01 Đẻ nhánh +
2 02 Đẻ nhánh +
3 03 Đẻ nhánh +
4 04 Đẻ nhánh +
5 05 Đẻ nhánh +
6 06 Đẻ nhánh +
7 07 Rầy trưởng thành +
Ghi chú: + là dương tính với lùn sọc đen
Kết quả cho thấy cả 7 mẫu đều có phản ứng dương tính với LSD trong đó có 6 mẫu lúa và 1 mẫu rầy. Những kết quả này chúng tôi dùng làm nguồn lây bệnh cho những thí nghiệm tiếp theo.
M 01 02 03 04 05 06 07
Hình 4.26. Kết quả giám định trên mẫu lúa và rầy tại Tiền Hải - Thái Bình vụ mùa 2010.
Như vậy, qua kết quả điều tra diễn biến ngoài đồng ruộng trên lúa, lúa chét và cả lúa được lây bệnh nhân tạo trong nhà lưới đều có triệu chứng giống như bệnh lùn sọc đen. Đồng thời qua kết quả phân tích bằng phương pháp RT - PCR với cặp mồi đặc hiệu được thiết kê trên gen S10 của vi rút lùn sọc đen phương Nam là cặp mồi RB-S10-F2 và RB-S10-R2 để kiểm tra mẫu bệnh trên lúa, rầy trong cả vụ xuân và vụ mùa năm 2010 đều cho phản ứng dương tính với bệnh vi rút lùn sọc đen phương Nam. Điều đó đã đủ căn cứ xác đáng để rút ra kết luận lúa bị lùn lụi ở Tiền Hải - Thái Bình là do vi-rút lùn sọc đen phương Nam gây ra.
4.4. Nghiên cứu khả năng truyền bệnh lùn sọc đen của rầy bằng lây