2.2. Pha dung dịch chuẩn
2.3.4. Thẩm định phương pháp thử . Tính đặc hiệu/chọn lọc
T nh đặc hiệu: Tính đặc hiệu là khả năng phát hiện các chất phân tích khi có mặt các tạp chất khác như các tiền chất, các chất chuyển hóa, các chất tương tự, tạp chất...
Tính chọn lọc: Là khái niệm rộng hơn tính đặc hiệu, liên quan đến việc phân tớch một số hoặc nhiều chất trong một quy trỡnh. Nếu chất cần phõn tớch phõn biệt rừ với các chất khác thì phương pháp phân tích c tính chọn lọc[6].
Nghiên cứu này sử dụng quy định cách tính điểm IP ( điểm nhận dạng – identification) theo hội đồng châu Âu để chắc chắn rằng một chất phân tích có sự xuất hiện của ít nhất hai bước chuyển khối. Kết quả khảo sát tính đặc hiệu và chọn lọc của phương pháp xác định nhóm chất diệt cỏ glyphosate được trình bày chi tiết trong chương tiếp theo ( Chương 3: Kết quả và thảo luận).
2.3.4.2. Độ ổn định của chất chuẩn tại nhiệt độ buồng mẫu và chu kỳ đông đá- rã đông.
Độ ổn định của chất chuẩn phải đƣợc khảo sát qua các chu kỳ đông đá – rã đông hoặc qua 24 giờ khảo sát liên tục. Kết quả khảo sát đƣợc thể hiện qua tỉ lệ diện tích pic chuẩn hóa là một hàm phụ thuộc giữa tỉ lệ pic với nội chuẩn tương ứng vào thời gian bơm mẫu.
Tỉ số diện tích đƣợc tính bằng diện tích píc chất phân tích chia cho diện tích píc nội chuẩn tương ứng. Tỉ số diện tích píc chuẩn hóa là tỉ số diện tích píc chia cho tỉ số diện tích tại thời điểm ban đầu (t = 0 phút). Đường hồi qui biểu diễn tỉ số diện tích píc chuẩn hóa theo thời gian thử nghiệm có hệ số góc âm sẽ thể hiện sự phân huỷ chất theo thời gian[18].
2.3.4.3. Khảo sát khoảng tuyến tính
Xác định khoảng tuyến tính thường được khảo sát bắt đầu từ giới hạn định lượng và kết thúc là giới hạn tuyến tính. Để xác định khoảng tuyến tính này, chúng
tôi chuẩn bị 6 nồng độ khác nhau. Sau khi xác định khoảng tuyến tính, xây dựng đường chuẩn và xác định hệ số hồi quy tương quan.
2.3.4.4. Giới hạn định tính (LOD), giới hạn định ƣợng (LOQ)
Giới hạn phát hiện LOD (limit of detection):Là nồng độ mà tại đ giá trị xác định được lớn hơn độ không đảm bảo đo của phương pháp. Đây là nồng độ thấp nhất của chất phân tích trong mẫu có thể phát hiện đƣợc nhƣng chƣa thể định lƣợng đƣợc.
Giới hạn định lượng LOQ (limit of quantification):là nồng độ tối thiểu của một chất có trong mẫu thử mà ta có thể định lượng bằng phương pháp khảo sát và cho kết quả c độ chụm mong muốn.
Phương pháp xác định LOD, LOQ: Phân tích mẫu (mẫu thực, mẫu thêm chuẩn hoặc mẫu chuẩn) ở nồng độ thấp còn có thể xuất hiện tín hiệu của chất phân tích. Xác định tỷ lệ tín hiệu/nhiễu (S/N), trong đ S là chiều cao tín hiệu của chất phân tích, N là nhiễu đường nền.Nhiễu đường nền được tính về hai phía của đường nền và tốt nhất là tính nhiễu lân cận hai bên của pic, bề rộng mỗi bên tối thiểu gấp 10 lần chiều rộng của pic tại nửa chiều cao.
LOD đƣợc chấp nhận tại nồng đồ mà tại đ tín hiệu lớn gấp 3 lần nhiễu đường nền, thông thường thường lấy S/N=3.
LOQ đƣợc chấp nhận tại nồng độ mà tại đ tín hiệu lớn gấp 10 lần nhiễu đường nền, thông thường thường lấy S/N=10.
Hình 2.3. Xác định LOD, LOQ d a vào S/N[12]
2.3.4.5. Độ chính xác (độ đúng và độ chụm)
- Độ lặp lại: Điều kiện lặp lại là điều kiện mà tại đ các kết quả thử nghiệm độc lập với cùng một phương pháp, trên những mẫu thử giống hệt nhau, trong cùng một phòng thí nghiệm, bởi cùng thao tác và sử dụng cùng một thiết bị, trong khoảng thời gian ngắn [9].
- Độ tái lặp: Điều kiện tái lặp là điều kiện trong đ các kết quả thử nghiệm nhận được bởi cùng một phương pháp, trên các mẫu thử giống hệt nhau trong các phòng thì nghiệm khác nhau, với những người thao tác khác nhau, sử dụng các thiết bị khác nhau [9].
-Độ thu hồi: Thể hiện hiệu suất của quá trình phân tích. Độ thu hồi càng cao càng chứng tỏ quy trình phân tích đạt hiệu quả cao.
CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Tối ƣu các điều kiện của máy khối phổ MS/MS