CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.3. Nghiên cứu các hợp chất có hoạt tính sinh học trong thân rễ cây ngải tiên bousigon
3.3.4. Xác định cấu trúc phân tử của các chất phân lập đƣợc
3.3.4.1. Xác định cấu trúc phân tử của hợp chất HB3
Hợp chất HB3, dạng dầu không màu, Rf =0,45 (n- hexan/EtOAc 9/1, v/v), hiện màu xanh đen với FeCl3 1M (pH=4).
Phổ IR của HB3 (xem phụ lục 4) cho thấy phân tử có một vòng -lactone có vị trí , - chƣa no có C=O 1762 cm-1 và C=C 1681 cm-1; nhóm exo- methylene C=C
1641 cm-1 , C-H 954 cm-1 và nhóm ete C –O-C = 1118cm-1 2g cặn H
Phân đoạn 15-45
Phân đoạn 22-26 Phân
đoạn 16-18
Phân đoạn 50-70
Phân đoạn 75-99
Phân đoạn 100-160
Phân đoạn 30-32
HB5 Rf = 0.79
HB1 Rf = 0.73
HB2 Rf = 0.65
HB3 Rf = 0.45
51
Phổ 1HNMR ( phụ lục 6) thấy tín hiệu của các nhóm methyl (H = 0,68 ppm;
0,78ppm; và 0,85ppm) và H của exo-methylene (H = 4,32ppm; 4,37ppm và 4,77ppm).
Quan sát những phổ 13C – NMR (xem phụ lục số 7) cho thấy 8 Cacbon olefin vùng 107 – 147 ppm là 4 cặp đôi cacbon olefin liền kề có cùng cường độ. Tổng số cacbon của hai đồng phân này là 42. Trong đó có 8 nhón CH, 15 nhóm CH2, 8 nhóm CH3 (xem phổ DEPT, phụ lục 8).
Tất cả các dữ kiện trên cho phép nghĩ đến đây là cặp đồng phân epime của metyl coronarin D ete.
Điều này đƣợc khẳng định thêm nhờ trên phổ khối của HB3 (xem phụ lục 5) có pic ion phân tử tại m/z = 331,7 (M+) , cùng với 1 phân mảnh có điểm ion m/z = 300,7 (M+ – CH3OH). Tất cả thỏa mãn với công thức phân tử C21H32O3.
Số liệu phổ của HB3 đƣợc ghi trên bảng 3.8 và công thức cấu tạo của HB3 đƣợc chỉ ra trên hình.
20 O
19 18H
17 O
O 21 1
2
4 5
6 7 9 8 10
11 12
13 14
15 16
Hình 3.1. Công thức cấu tạo của HB3 – metyl coronarin D ete Bảng 3.6. Số liệu phổ 13C của hợp chất HB3
Nguyên tử C
Số liệu phổ 13C của hợp chất HB3
Số liệu phổ 13C của epimer Etyl coronarin D ete[34]
H6/a H6/b 3a 3b
1 39,19 39,35 39,2 39,3
2 19,231 19,231 19,3 19,3
3 41,919 41,919 42,0 42,0
52
4 32,844 32,798 33,6 33,6
5 55,300 55,253 55,3 55,4
6 24,020 23,999 24,1 24,1
7 37,704 37,704 37,8 37,8
8 147,731 147,974 147,8 148,1
9 56,056 56,056 56,1 56,1
10 39,348 39,197 39,4 39,4
11 25,327 25,327 25,4 25,4
12 142,562 142,700 142,9 143,0
13 124,148 124,079 124,1 124,1
14 32,844 32,798 32,9 32,9
15 100,934 100,934 101,0 101,0
16 169,538 169,538 169,8 169,8
17 107,249 107,560 107,3 107,7
18 21,630 21,630 21,7 21,7
19 19.231 19.231 20.1 20.1
20 14,005 14,231 14,3 14,4
21 33,308 33,458 65,1 65,1
22 15,0 15,0
3.3.4.2. Xác định cấu tạo phân tử của hợp chất HB5
Hợp chất HB5 là tinh thể hình kim, màu trắng và Rf= 0,79 ( n- hexan/EtOAc, 3/7,v/v), hiện màu xanh đen với FeCl3 1M (pH = 4) khi đun nóng.
Phổ IR của HB5 (xem phụ lục số 11) cho thấy có vòng - lacton , không no (C=O
1751 cm-1, và liên kết đôi 3 nhóm thế có C=C 1643 cm-1, C-H =829 cm-1); có liên kết đôi 2 nhóm thế dạng E ( exo – metylen) với C=C 1603 cm-1, C-H 900 cm-1.
Trờn phổ 13 C – NMR và DEPT ( xem phụ lục số 14, 15) cho thấy rừ phõn tử HB5 có 20 nguyên tử C, trong đó có 3 nhóm metin olefin vùng trường yếu 120 –
53
145 ppm, 2 nhóm metin của Cacbon bậc 3 no vùng 55 – 65 ppm, 6 nhóm metylen và đặc biệt nhóm exo metylen có C = 108,40 ppm.
Khối phổ của HB5 cho pic M+ = 300,6 (xem phụ lục số 12). Từ các số liệu trên suy ra công thức phân tử của HB5 là C20H28O2 và độ bội liên kết là 7. Vì phân tử hợp chất HB5 có 20 nguyên tử cacbon, có vòng - lacton , không no, nhóm exo – metylen vì 3 nhóm metyl ở vùng trường mạnh nên có thể suy ra đây là diterpen và dựa vào qui luật đầu đuôi và đặc điểm các phổ chúng tôi xây dựng khung labdan. Những dữ kiện trên cho phép khẳng định HB5 là Villosin có công thức nhƣ hình 3.1. Các số liệu phổ 1H và 13C-NMR đƣợc chỉ ra trong bảng 3.6. Số liệu phổ HB5 tương ứng với số liệu phổ của villosin công bố trong tài liệu 26.
Hình 3.2 . Công thức cấu tạo của HB5 - Villosin Bảng 3.7. Số liệu phổ 1H và 13C-NMR của hợp chất HB5 Vị
trí C
C (ppm) của HB5
C (ppm) của villosin [26]
H (ppm) của HB5
Độ bội, J(Hz)
của HB5 H (ppm) của villosin [26]
1 40,83 40,9 1,00; 1,40 m 1,00; 1,45
2 19,11 19,1 1,49; 1,46 m 1,40; 1,51
3 42,30 42,3 1,51; 1,21 m 1,18; 1,40
4 33,57 33,6
54
5 54,75 54,8 1,09 dd(2,68; 2,68) 1,09
6 23,38 23,4 1,71; 1,38 m 1,71; 1,39
7 36,75 36,8 2,45; 2,08 m 2,08; 2,44
8 149,40 149,4
9 62,22 62,2 2,37 m 2,37
10 39,29 39,3
11 136,87 136,9 6,89 dd(10,13; 10,13) 6,90
12 120,66 120,7 6,10 d (15,84) 6,11
13 129,55 129,6
14 142,34 142,3 7,14 br_s 7,15
15 69,56 69,6 4,8 d(1,6) 4,80;
16 172,31 172,3
17 108,40 108,4 4,5; 4,76 d(1,7); d(1,7) 4,51; 4,76
18 33,38 33,6 0,89 s 0,89
19 21,93 22,0 0,84 s 0,84
20 15,05 15,1 0,87 s 0,87
3.3.4.3. Xác định cấu trúc phân tử của hợp chất HB7
Hợp chất HB7 là chất rắn, màu trắng, điểm nóng chảy 164oC và Rf= 0,76 (CH2Cl2/CH3OH, 7/3,v/v), hiện màu xanh đen với Vanilin/H2SO4đ
Phổ IR của HB7 (xem phụ lục 18): OH= 3542.06 cm-1, 3391.40 cm-1 C=O
=1710.80cm-1; liên kết đôi 3 nhóm thế C=C =1640.30 cm-1 ; C-O-C của vòng piran không no 1073.52 cm-1.
Trờn phổ 13 C – NMR và DEPT ( xem phụ lục 21, 22) cho thấy rừ phõn tử HB7 có 17 nguyên tử C, trong đó có 10 nhóm CH, 3 nhóm CH2, 1 nhóm CH3 và có 3C không liên kết trực tiếp với H.
Khối phổ của HB7 cho pic M+ = 387.4 (xem phụ lục 19). Từ các số liệu trên suy ra công thức phân tử của HB7 là C17H24O10.
55
Qua phõn tớch phổ 13 C – NMR của HB7 thấy rừ 4 nguyờn tử C của nhõn pyrano-D-glucose trong vùng dịch chuyển từ 70-77ppm, cacbon anome ở 98.6, H anome có δH=4.53ppm và nhóm etylencacbinol δH=3.06ppm, δC=66.99ppm. Điều này cho thấy HB7 là 1 glucosit. Lấy công thức phân tử của HB7 ( C17H24O10) trừ đi phần glycon C6H11O5 ta đƣợc phần còn lại là C11H13O5. Trong đó có các nhóm chức: OH, C=O, C=C ba nhóm thế, C-O-C của vòng pyran không no, 5 nhóm CH, 2 nhóm CH2, 1 nhóm CH3 và 3 C không liên kết với H. Tổng số vòng và liên kết đôi trong aglycose là 5. Phổ 1 H – NMR của HB7 cho thấy có 2 nhóm proton olefin là δH=7.46ppm δH=5.68ppm và có 2 nhóm metoxyl δH=3.64ppm δC=51.02ppm. Vì có nhóm >C=O nên số vòng và số liên kết đôi còn lại là 4, có 1 vòng piran. Vậy có thể là vòng không no. Từ dự kiện trên chúng tôi xây dựng đƣợc công thức của aglycon nhƣ hình
O COOCH3
O
H H O*
Hình 3.3: Cấu tạo của agycon
Ghép với phần D-glucosit ta đƣợc công thức của HB7 nhƣ hình
1 3 5 4
6 7
8 9 10
11
12
1' 2' 3'
4' 5' 6' O O CH3
O O
H O O
OH
OH OH
OH
Hình 3.4: Cấu tạo của HB7
56
Cấu tạo của HB7 thể hiện rừ trờn phổ: IR, FAB-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC. Ở đõy chỳng ta thấy rừ trước hết là liờn kết glucosit của C1
,
với C1 qua H thể hiện trên phổ HMBC (phụ lục 24b) có tương tác H1
, với C1 và H1 với C1 và hiệu ứng thuận từ của điện tử π và điện tử chƣa chia sẻ của oxi mà cacbon của nhóm >C=O ở trường thấp nhất, còn nhóm CH ở vị trí 3 ở trường cao hơn δH-3=7.46ppm và δC-3=151.58ppm. Dưới ảnh hưởng của điện tử π của liên kết đôi mà nhóm metin ở vị trí 7 cũng ở trường yếu: δH-7=5.68ppm và δC-7=125.55ppm.
Cũng lý luận tương tự δC-4=110.95ppm và δC-8=144.07ppm. Các số liệu 1H-NMR,
13C-NMR của HB7 chỉ ra trong bảng
Bảng 3.8. Số liệu phổ 1H và 13C-NMR của chất HB7 Vị trí
C
13C-NMR δC:ppm
1H-NMR
δH Độ bội Nhóm J.Hz
1 95.76 5.12 dd CH 6.8; 7.2
3 151.59 7.46 br.s CH
4 110.95
5 34.58 3.10 brdd CH 6.3; 7.3
6 37.88 3.70 m CH2
7 125.51 5.68 br,s CH
8 144.07
9 45.88 2.64 t CH 7.3
10 59.35 4.13
3.97
br d br d
CH CH
14.5 14.6
11 166.82
12 51.03 3.64 s CH3
1’ 98.63 4.53 d CH 8.0
2’ 73.31 4.71 t CH 5.4
3’ 76.63 5.03 t CH 5.9
4’ 69.99 4.46 t CH 5.7
5’ 77.24 4.7 m CH
57
6’ 60.99 3.06 dd CH2 4.9; 5.3
Theo công thức này ngoài 5C bất đối trong phần glucose còn có 3C bất đối trong phần aglycon: C-1, C-5, C-9. Nhƣ vậy số đồng phân quang học là rất lớn. Để xét cấu dạng của HB7 chúng ta xét phổ 1H-COSYGP (phụ lục 25a, 25b, 25c, 25d). Phổ này cho thấy rừ tương tỏc của H-5 với H-9 (hỡnh vuụng ABCD) cú J=6.8 Hz và của H-9 với H-1 (hình vuông AEFG) có J=7.3 Hz. Sự tương tác Vicial spin-spin này có hằng số tương tác J lớn nên chúng là tương tác axial-axial. Điều này có nghĩa là các proton ở vị trí axial cả hình 3.4a và 3.4b. Nhƣ thế HB7 có thể ở dạng thuyền (hình 3.4a) và dạng ghế (hình 3.4b). Chúng tôi chƣa có số liệu khẳng định ở dạng nào nhƣng có thể suy đoán HB7 ở dạng 3.4a vì ở dạng này liên đôi ở dạng E, dạng này 2 nhóm thế lớn nằm ở vị trí trans với nhau nên có sự ảnh hưởng hiệu ứng không gian là ít hơn, do đó bền hơn và dễ tồn tại hơn. Vậy HB7 chính là geniposide.
O O OH
H
H H
H O O
C H3
H
O
OH
OH OH
OH 1
2
4 3 5 6 7
8 9
10 1' 2'
3' 4' 5' 6'
Hình 3.4a
O H
H H
H H
O O
C H3
O
O OH
OH OH O
H
OH 6'
5' 3' 4' 2'
1' 1
2 3
4 5
6
7 8
9 10
11
Hình 3.4b
58
3.3.5. Khảo sát hoạt tính chống ung thư của hợp chất HB5(villosin) phân lập được từ thân rễ ngải tiên bousigon.
Nhƣ trên đã trình bày ở trên, chúng tôi đã phân lập đƣợc 5 chất tinh khiết trong thân rễ cây ngải tiên bousigon ở Vĩnh Phúc. Ba trong số đó đã đƣợc xác định cấu trúc phân tử một cách chặt chẽ bằng các phương pháp phổ hiện đại, đó là:
Villosin và epimer của metyl coronarin D ete và geniposide.
Villosin đã có nhiều công trình nghiên cứu hoạt tính chống ung thƣ. Các loại ung thƣ nhƣ: ung thƣ gan Hep-G2, ung thƣ phổi A 549, ung thƣ thần kinh SK – N – SH, ung thƣ vú MCF – 7, ung thƣ cổ tử cung HeLa [18, 33] đã đƣợc thử nghiệm.
Nhƣng các dòng ung thƣ phổi Lu, ung thƣ cơ vân tim RD chƣa đƣợc thử nghiệm.
Chúng tôi khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ của villosin phân lập đƣợc từ thân rễ cây ngải tiên bousigon ở Vĩnh Phúc với 3 dòng tế bào ung thƣ: ung thƣ gan (Hep-G2), ung thư phổi (Lu) và ung thư cơ vân tim (RD) theo phương pháp của Skehan và cộng sự (1993), Likhiwitayawuid và cộng sự (1993); các phương pháp này hiện nay đang đƣợc áp dụng tại viện ung thƣ quốc gia của Mỹ (NCI). Kết quả đƣợc chỉ ra trong bảng 3.9 và bảng 3.10.
Bảng 3.9. Hàm lƣợng tế bào ung thƣ sống sót sau khi thử TT Ký hiệu
mẫu
Các tế bào còn sống sót CS (%)
Kết luận
Hep-G2 Lu RD
1 DMSO 100,0±0,0 100,0±0,0 100,0±0,0 HB5 dương tính tính cả
3 dòng 2 Chứng (+) 2,2±0,0 1,8±0,04 0,30±0,03
3 HB5 0,0±0,0 8,4±0,10 0,00±0,00
Bảng 3.10. Cường độ gây độc tế bào ung thư TT Ký hiệu
mẫu
Nồng độ gây độc IC50 (g/ml)
Kết luận
Hep-G2 Lu RD
1 Chứng (+) 0,257 0,312 0,188 HB5 dương
tính cả 3 dòng
2 HB5 0,325 0,675 0,476
59
Từ kết quả bảng trên cho thấy, mẫu HB5 (villosin) mà chúng tôi phân lập được có tác dụng gây độc tế bào ung thư mạnh đối với cả 3 dòng ung thư người là ung thƣ gan Hep-G2 ( IC50 0,325microgam/ml), ung thƣ phổi Lu(IC50 0,675 microgam/ml) và ung thƣ cơ vân tim RD ( IC50 0,476microgam/ml).
60 KẾT LUẬN
Tài liệu thế giới về nghiên cứu ngải tiên bousigon hầu nhƣ chƣa có, chúng tôi là người đầu tiên nghiên cứu ngải tiên bousigon (Hedychium bousigonianum Pierr ex Gagn) trồng tại Vĩnh Phúc và có kết luận sau:
1. Đã xây dựng quy trình cất tinh dầu thân rễ ngải tiên bousigon cho hiệu suất tốt 0,25% tính theo nguyên lệu khô.
2. Đã phân tích thành phần tinh dầu thân rễ ngải tiên bousigon và nhận biết đƣợc 21 thành phần trong số 45 thành phần của tinh dầu, có 2 thành phần có hàm lƣợng lớn nhất là: Linalool: 22.31% và 37,94-zerubone: 25.15%.
3. Xây dựng quy trình chiết phân lớp các chất trong thân rễ ngải tiên bousigon theo độ phân cực tăng dần của dung môi n-hexan, diclometan và etylaxetac và khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của các cặn chiết. Kết quả cho thấy các cặn chiết đều có tác dụng chống vi khuẩn đường ruột là E.coli và B.subtillis.
4. Đã khảo sát các cặn chiết bằng sắc ký lớp mỏng và đã phân lập đƣợc 5 chất tinh khiết từ cặn chiết n-hexan và diclometan bằng sắc ký cột.
5. Đã xác định đƣợc cấu trúc phân tử của 3 trong 5 chất phân lập đƣợc bằng các phương pháp phổ hiện đại đó là villosin, epimer của ete metyl coronarin D và geniposide. Khảo sát hoạt tính gây độc tế bào của villosin đối với 3 dòng tế bào gây ƣng thƣ gan Hep-G2, ung thƣ phổi Lu và ung thƣ cơ vân tim RD và nhận thấy Villosin có hoạt tính gây độc tế bào mạnh đối với cả 3 dòng ung thƣ trên.
61
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TIẾNG VIỆT
1. Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn et al. (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập I, Nxb KH&KT Hà Nội, tr. 141-143.
2. Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 141.
3. Vừ Văn Chi (1997), Từ điển cõy thuốc Việt Nam, Nxb Y học, TP HCM, tr.
821.
4. Phạm Hoàng Hộ (1993) Cây cỏ Việt Nam, NXB Montreal , tập 3, tr. 558 – 562.
5. Nguyễn Thị Thuỷ, Nguyễn Thị Phương Thảo, Trương Anh Thư, Bùi Văn Thanh (2003)― Thành phần hoá học của tinh dầu Ngải tiên (Hedychium coronarium Koenig)‖, Viện Sinh thái & Tài nguyên Sinh vật, Viện KH&
CNVN.
6. Văn Ngọc Hướng, Nguyễn Thị Mai Phương, Lê Anh Tuấn, Vương Văn Trường (2012) ―Góp phần nghiên cứu các hợp chất labdan ditecpen có hoạt tính gây độc tế bào ƣng thƣ của thân rễ cây ngải tiên (Hedychium coronarium
Koen)‖, Tạp chí dƣợc học 429, tr.37-41.
TIẾNG ANH
7. Aziz M. A., Habib M. R., Karim M. R., (2009) ― Antibacterial and Cytotoxic Activities of Hedychium coronarium J. Koenig‖ , Research Journal of Agriculture and Biological Sciences, 5(6), pp. 969-972.
8. Boukouvalas J., Wang Jian-Xin and Marion O., (2007) ― Expedient synthesis of villosin and its isomer (E)-labda-8(17),12,14-trien-15(16)-olide‖, Tetrahedron Letters,48, pp. 7747–7750.
9. Chimnoi N, Pisutjaroenpong S, Ngiwsara L, Dechtrirut D, Chokchaichamnankit D, Khunnawutmanotham N, Mahidol C,
62
Techasakul S., (2008) ― Labdane diterpenes from the rhizomes of Hedychium coronarium‖, Natural Product Research, 22(14),pp. 1249–
1256.
10. Csurhes, S., Jones M.N, (2008) Pest plant risk assessment, Biosecurity Queensland Department of Primary Industries and Fisheries, Queensland , pp. 8.
11. Itokawa H, Morita H, Katou I, et al. (1987) ― Cytotoxic diterpenes from the rhizomes of Hedychium coronarium‖, Planta Med,54, pp. 311.
12. Itokawa H, Morita H, Takeya K, Motidome M.(1988) ― Diterpenes from rhizomes of Hedychium coronarium‖, Chem Pharm Bull Tokyo,36, pp.
2682–4,54, pp. 311–5.
13. Joshi S, Chanotiya CS, Agarwal G, Prakash O, Pant AK, Mathela CS, (2008) ― Terpenoid Compositions, and Antioxidant and Antimicrobial Properties of the Rhizome Essential Oils of Different Hedychium Species‖, Chemistry & Biodiversity, 5, p. 299.
14. Joy, P. P., Thomas J., Mathew, S., and Skaria, B. P., (1998), Zingiberaceous Medicinal and Aromatic Plants, Aromatic and Medicinal Plants Research
Station, Odakkali, Asamannoor P.O.,Kerala, India, pp. 23 – 24.
15. Joy B, Rajan A, Abraham E., (2007) ― Antimicrobial activity and chemical composition of essential oil from Hedychium coronarium‖, Phytother Res, 21(5), pp. 439 – 443.
16. Phan Van Kiem , Nguyen Thi Kim Thuy , Hoang Le Tuan Anh , Nguyen Xuan Nhiem , Chau Van Minh , Pham Hai Yen , Ninh Khac Ban , Dan Thuy Hang, Bui Huu Tai, Nguyen Van Tuyen , Vivek Bhakta Mathema , Young-Sang Koh , Young Ho Kim, (2011) ― Chemical constituents of the rhizomes of Hedychium coronarium and their inhibitory effect on the pro-inflammatory cytokines production LPS- stimulated in bone marrow- derived dendritic cells‖ , Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,21 pp. 7460–7465
63
17. Kumrit I, Suksamrarn A, Meepawpan P, Songsri S, Nuntawong N., (2010)
―Labdane-type diterpenes from Hedychium gardnerianum with potent cytotoxicity against human small cell lung cancer cells‖, Phytother Res , 24(7), pp. 1009-13.
18. Kunnumakkara AB, Ichikawa H, Anand P, Mohankumar CJ, Hema PS, Nair MS, Aggarwal BB., (2008) ―Coronarin D, a labdane diterpene, inhibits both constitutive and inducible nuclear factor-kappa B pathway activation, leading to potentiation of apoptosis, inhibition of invasion, and suppression of osteoclastogenesis‖, Mol Cancer Ther,7 (10), pp. 3306-17.
19. Li R. and Fan Y., (2011) ―Molecular Cloning and Expression Analysis of a Terpene Synthase Gene, HcTPS2, in Hedychium coronarium‖, Plant Molecular Biology Reporter, 29, pp. 35–42.
20. Liu X.H., Zhao D.B., Yang C.R., Wang H.Q., (2000) ―New Sesquiterpenoids from Hedychium yunnanense Gagne‖,Chinese Chemical Letters,11(11), pp. 1009−1012.
21. Lu Y., Zhong C. X., Wang L., Lu C., Li X. L. and Wang P. J., (2009),
―Anti-inflammation activity and chemical composition of flower essential oil from Hedychium coronarium‖, African Journal of Biotechnology,8 (20), pp 5373-5377.
22. Mabbertey D.J., (1998), The Plant-Book: A Portable Dictionary of the Higher Plants, Cambridge University Press, Cambridge
23. Matsuda H., Morikawa T., Sakamoto Y., Toguchida I. and Yoshikawa M., (2002) ― Labdane-type Diterpenes with Inhibitory Effects on Increase in Vascular Permeability and Nitric Oxide Production from Hedychium coronarium‖, Bioorganic & Medicinal Chemistry,10, pp. 2527–2534.
24. Morikawa T, Matsuda H, Sakamoto Y, Ueda K, Yoshikawa M., (2002)
―New Farnesane-Type Sesquiterpenes, Hedychiols A and B 8,9- Diacetate, and Inhibitors of Degranulation in RBL-2H3 Cells from the
64
Rhizome of Hedychium coronarium‖, Chem. Pharm. Bull,50(8), pp.
1045—1049
25. Nakamura S, Okazaki Y, Ninomiya K, Morikawa T, Matsuda H, Yoshikawa M, (2008) ―Medicinal flowers. XXIV. Chemical structures and hepatoprotective effects of constituents from flowers of Hedychium coronarium‖, Chem. Pharm. Bull,56(12), pp. 1704—1709.
26. Nakatani N., Kikuzaki H., Yamaji H., Yoshio K., Kitora C., Okada K., Padolina W.G., (1994) ―Labdane diterpenes from rhizomes of Hedychium coronarium‖ Phyrochmustry,37(5), pp. 1383-1388.
27. Oh S, Jeong IH, Shin WS, Lee SA.(2003) ―Study on the synthesis of antiangiogenic (+)-coronarin A and congeners from (+)-sclareolide‖, Bioorg Med Chem Lett, 13, pp. 2009 –12.
28. Phillipine Medicinal Plants www.stuartxchange.org/Kamia.html
29. Qing Z., Xin H., Yun S.W, Cheng Z., HAO X.J., (2003) ―Two New Diterpenoids from Hedychium forrestii‖, Chinese Chemical Letters,14(11), pp. 1141 – 1143.
30. Sabulal, B. George, V., Dan, M., Pradeep, N.S. (2007), ―Chemical composition and antimicrobial activities of the essential oils from the rhizomes of four Hedychium species from South India‖, Journal of essential oil research,19, pp. 1-5.
31. Sirirugsa, P. & Larsen K. (1995), ―The genus Hedychium (Zingiberaceae) in Thailand‖ , Nordic Journal of Botany,15(3), pp. 301–304.
32. Shrotriya S, Ali MS, Saha A, Bachar SC, Islam M.S., (2007) ―Anti- inflammatory and analgesic effects of Hedychium coronarium Koen‖, Pak. J. Pharm. Sci., 20(1), pp. 42-47.
33. Suresh G., Reddy P. P., Babu K.S., Shaik T B, Kalivendi S. V., (2010),
―Two new cytotoxic labdane diterpenes from the rhizomes of Hedychium coronarium‖, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20, pp. 7544–
7548
65
34. Taveira F.N., Oliveira1 A.B., Souza Filho J.D., Braga F.C, (2005) ―Epimers of labdane diterpenes from the rhizomes of Hedychium coronarium J.
Koenig‖, Revista Brasileira de Farmacognosia, Brazilian Journal of Pharmacognosy, 15(1), pp. 55-59.
35. Valkenburg J. L. C. H. van & Bunyapraphatsara N,(2002) ―Plant resource of South – east asia‖, Medicinal and poisonous plants ,12(2).
66
PHỤ LỤC
Phụ lục 1. Phổ GC – MS của tinh dầu thân rễ ngải tiên bousigon……….. 67 Phụ lục 2. Kết quả thử hoạt tính kháng VSVKĐ của cặn C, cặn E và cặn H 68 Phụ lục 3. Kết quả thử hoạt tính chống ung thƣ của HB5 (Villosin)………….. 69 Phụ lục 4. Phổ IR của hợp chất HB3……… 70 Phụ lục 5: Phổ khối của hợp chất HB3………. 71 Phụ lục 6. Phổ 1H - NMR của hợp chất HB3………. 72 Phụ lục 7: Phổ 13C - NMR của hợp chất HB3………... 73 Phụ lục 8a. Phổ DEPT của hợp chất HB3……….. 74 Phụ lục 8b. Phổ DEPT của hợp chất HB3……….. 75 Phụ lục 9: Phổ HSQC của hợp chất HB3………... 76 Phụ lục 10. Phổ HMBC của hợp chất HB3……….. 77 Phụ lục 11. Phổ IR của hợp chất HB5……… 78 Phụ lục 12: Phổ khối của hợp chất HB5………. 79 Phụ lục 13. Phổ 1H - NMR của hợp chất HB5……… 80 Phụ lục 14: Phổ 13C - NMR của hợp chất HB5……….. 81 Phụ lục 15. Phổ DEPT của hợp chất HB5………. 82 Phụ lục 16: Phổ HSQC của hợp chất HB5………. 82 Phụ lục 17. Phổ HMBC của hợp chất HB5……… 84 Phụ lục 18. Phổ IR của hợp chất HB7………….……….. 85 Phụ lục 19: Phổ khối của hợp chất HB7………. 86 Phụ lục 20. Phổ 1H - NMR của hợp chất HB7………... 87 Phụ lục 21: Phổ 13C - NMR của hợp chất HB7………. 88 Phụ lục 22. Phổ DEPT của hợp chất HB7………. 89 Phụ lục 23a: Phổ HSQC của hợp chất HB7……… 90 Phụ lục 23b: Phổ HSQC của hợp chất HB7………... 91 Phụ lục 24a: Phổ HMBC của hợp chất HB7……….. 92 Phụ lục 24b: Phổ HMBC của hợp chất HB7………. 93
67
Phụ lục 25a: Phổ COSY của hợp chất HB7……… 94 Phụ lục 25b: Phổ COSY của hợp chất HB7………... 95 Phụ lục 25c: Phổ COSY của hợp chất HB7……… 96 Phụ lục 25d: Phổ COSY của hợp chất HB7………... 97
68
Phụ lục 1: Phổ GC-MS của tinh dầu thân rễ cây ngải tiên Bousigon
69
Phụ lục 2: Kết quả thử hoạt tính VSVKĐ
70
Phụ lục 3: Kết quả thử hoạt tính chống ƣng thƣ của HB5 (Villosin)
KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM STT Ký hiệu
mẫu
Dòng tế bào Cell survival (%)
Kết luận
Hep-G2 Lu RD
1 DMSO 100,0±0,0 100,0±0,0 100,0±0,0
2 Chứng (+) 0,2±0,0 1,8±0,04 0,3±0,03 Dương tính 3 HB5 0,0±0,0 19,4±0,1
8,4±0,1 0,0±0,0 Dương tính cả 3 dòng
STT Ký hiệu mẫu
IC50(àg/ml)
Kết luận
Hep-G2 Lu RD
1 Chứng (+) 0,257 0,312 0,188 Dương tính
2 HB5 3,24 0,675 0,476 Dương tính cả 3
dòng
71
Phụ lục 4: Phổ IR của hợp chất HB3
72
Phụ lục 5: Phổ khối của hợp chất HB3
73
Phụ lục 6: Phổ 1H-NMR của hợp chất HB3
74
Phụ lục 7: Phổ 13C-NMR của hợp chất HB3