- Là nghiên cứu mô tả cắt ngang tiến cứu
2.3.8. Kỹ thuật nuôi cấy BACTEC – MGIT 960:
2.3.8.1. Nguyên lý:
Là kỹ thuật nuôi cấy sử dụng môi trường lỏng MGIT ( Mycobacterium growth indicator tube ). Trong môi trường nuôi cấy khi vi khuẩn thực hiện quá trình trao đổi chất và nhân lên sẽ tiêu thụ oxy hòa tan trong môi trường và làm nồng độ oxy hòa tan trong môi trường giảm đi. Sự giảm nồng độ oxy này sẽ giải phóng ra môi trường chất chỉ thị huỳnh quang ( được gắn ở đáy ống bằng hợp chất silicon chịu nhiệt) khỏi ức chế. Chất này sẽ phát quang màu vàng nhạt dưới ánh sáng tử ngoại có thể thấy bằng mắt thường. Môi trường nuôi cấy thường sử dụng là Middlebrook 7H9. Ngoài ra còn sử dụng OADC là hỗn hợp chất kích thích sự phát triển của vi khuẩn.
2.3.8.2. Kỹ thuật:
- Bệnh phẩm được lấy như bệnh phẩm để soi kính hiển vi bình thường, sau đó bệnh phẩm được loại bỏ tạp nhiễm bằng dung dịch Natrihydroxyl 4%
- Sau đó bệnh phẩm này được đưa vào lọ 50ml và ly tâm trong vòng 15 phút và bỏ phần nổi ở trên ống ly tâm.
- Sau khi đã loại bỏ phần nổi cao ở ống đã ly tâm, đưa dung dịch còn lại vào lọ 50ml có chứa PBS pH 6,4 và tiếp tục ly tâm loại bỏ phần nổi cao.
- Tiếp tục thêm 0,5ml PHS pH6,8 vào lọ bệnh phẩm đã ly tâm ở trên Bactec – MGIT 960 và quan sát các mẫu dương tính, nếu không chờ tối đa 8 tuần sau.
- Những mẫu có khả năng dương tính thường cho kết quả sau 8- 14 ngày, khi đó sẽ xác định loại AFB và thử độ nhậy của loại AFB này.
- Ống nuôi cấy MGIT có chứa 7ml Middlebrook 7H9 và 0,8 ml PANTA.
2.4.Xử lý số liệu:
Số liệu thu được sử lý trên máy vi tính, sử dụng các thuật toán X², T Student Tính toán các giá trị triệu chứng trong nhóm nghiên cứu: Độ nhậy (Se), độ đặc hiệu (Sp), trị số dự đoán dương (PPV), trị số dự đoán âm (NPV), độ chính xác( AC) theo Tamura M 1989/187 ( dương tính thật bệnh nhân lao có triệu chứng, nuôi cấy dương tính, âm tính giả bệnh nhân lao không có triệu chứng, nuôi cấy dương tính, âm tính thật là bệnh không phải lao, nuôi cấy âm tính, dương tính giả là bệnh nhân không lao, nuôi cấy âm tính)[7].
Se = Âm tính giả + Dương tính thậtDương tính thật %
Sp = Âm tính thật % Âm tính thật + Dương tính giả PPV = Dương tính thật % Dương tính thật + Dương tính giả
NPV = Âm tính thật + Âm tính giảÂm tính thật %
AC =
Dương tính thật + Âm tính
thật %
SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU
Nhóm chứng (30 bệnh nhân)
Lâm sàng, Cận
lâm sàng Soi rửa phế quản Nhóm nghiên cứu ( 60 bệnh nhân) PCR-lao dịch rửa phế quản Tính Se, PPV, NPV, AC Tính Sp, PPV, NPV Kết luận Lâm sàng, Cận lâm sàng, PCR-
lao(dịch phế quản), Bactec- MGIT 960 dương tính
Chương 3
DỰ KIẾN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. Đặc điểm của đối tượng nghiên cứu:
Bảng 3.1. Tuổi và giới của nhóm nghiên cứu
Giới Tuổi Nam Nữ Tổng số (%) 18-24 25-34 35-44 45-54 55-65 >65
Bảng 3.2. Tuổi và giới của nhóm lao phổi có PCR dương tính, PCR âm tính Kết quả Tuổi Dương tính Tỷ lệ % Âm tính Tỷ lệ % Nam Nữ Nam Nữ 18-24 25-34 35-44 45-54 55-65
3.2. Đặc điểm lâm sàng của nhóm lao phổi AFB (-) nuôi cấyBactec dương tính. Bactec dương tính.
PCR Thời gian Dương tính Âm tính P n % n % > 2tuần < 2tuần Bảng 3.4 Khởi phát bệnh Kết quả
Khởi phát Dương tính Âm tính Se Sp
Cấp tính Bán cấp Lặng lẽ
Bảng 3.5. Tiền sử bệnh tật và các yếu tố nguy cơ
PCR Tiền sử
Dương tính Âm tính
n % n %
Nghiện thuốc lá, lào Đái tháo đường Bệnh Goutte Cắt đoạn dạ dày
Uống corticoid kéo dài Gia đình bị lao
Bảng 3.6. Các bệnh phối hợp với bệnh khác
PCR Tiền sử
Dương tính Âm tính
n % n %
Đái tháo đường Viêm gan mạn Bệnh Goutte Lao hạch Lao màng bụng Lao màng phổi Lao cột sống
Bảng 3.7. Triệu chứng toàn thân
Kết quả Triệu chứng PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC Sốt nhẹ về chiều Sốt cao Mệt mỏi Chán ăn Gày sút cân Ra mồ hôi trộm
Bảng 3.8.Triệu chứng cơ năng và thực thể Kết quả Triệu chứng PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC Ho khan Ho có đờm Ho có máu Đau ngực Khó thở Ral nổ,ẩm Ral rit, ngáy HC 3 giảm RRFN giảm
3.3.Đặc điểm Xquang chuẩn và xét nghiệm máu thường qui.
Bảng 3.9.Tổn thương cơ bản trên Xquang phổi chuẩn
Kết quả Triệu chứng PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC Thâm nhiễm Nốt Hang Xơ vôi Đông đặc
Bảng 3.10. Vị trí tổn thương Kết quả Triệu chứng PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC Thùy trên Thùy giữa Thùy dưới Phổi phải Phổi trái Hai bên Bảng 3.11. Tổn thương phối hợp PCR Tổn thương Dương tính Âm tính n % n % Tổn thương riêng rẽ Tổn thương nốt
Tổn thương thâm nhiễm Tổn thương phối hợp Thâm nhiễm+Nốt+Hang
Thâm nhiễm + Nốt + Hang + Xơ Nốt+Hang Nốt+Xơ Thâm nhiễm+Nốt Nốt + Vôi Nốt + Vôi xơ Xơ+Hang
Bảng 3.12.Giá trị tổn thương phối hợp
Kết quả Tổn thương
PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC
Riêng rẽ Phối hợp
Bảng 3.13. Tổn thương lan tràn trên Xquang chuẩn Kết quả Tổn thương Đỉnh Hạ đòn Thùy dưới n % n % n % Thâm nhiễm Nốt Phá hủy
3.14.Mức độ tổn thương trên Xquang
PCR
Mức độ PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC
Nhẹ Vừa Nặng
Bảng 3.15.Tổn thương phối hợp trên Xquang phổi chuẩn
PCR Tổn thương PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC Tràn dịch MP Dầy dính MP Co kéo rốn phổi Viêm rãnh LT Giãn phế nang
Bảng 3.16. Xét nghiệm hồng cầu máu ngoại vi
PCR Hồng cầu
PCR (+) PCR (-)
P
> 4 triệu 3-4 triệu <3 triệu
Bảng 3.17. Xét nghiệm bạch cầu máu ngoại vi
PCR Bạch cầu PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC 5000-<7000 7000-10000 1000-<15000 >15000 3.4. Hình ảnh nội soi
Bảng 3.18. Giá trị của các triệu chứng nội soi
PCR
Hình ảnh nội soi PCR(+) PCR(-) Se Sp PPV NPV AC
Viêm mưng mủ Hẹp phế quản Vặn xoắn phế quản Xung huyết niêm mạc Sần sùi niêm mạc U sùi pq
Bình thường
Bảng 3.19. Kết quản PCR tương ứng với hình ảnh nội soi
PCR mưng mủ phế quản xoắn phế quản huyết niêm mạc niêm mạc phế quản thường Dương tính Âm tính
3.5. Hiệu quả chuẩn đoán của xét nghiệm PCR dịch phế quả
Bảng 3.20. Kết quả xét nghiệm PCR so với xét nghiệm Bactec
PCR
Kết quả Dương tính thật Âm tính thật Dương tính giả Âm tính giả n
%
Bảng 3.21. Giá trị xét nghiệm PCR dịch phế quản
Kết quả
PCR Se Sp PPV NPV AC
PCR (+) PCR(-)
Chương 4
DỰ KIẾN BÀN LUẬN
4.1.Bàn về đặc điểm của đối tượng nghiên cứu
4.2. Bàn về đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng của bệnh nhân lao phổi AFBâm tính có PCR (-), PCR(+) và Bactec dương tính âm tính có PCR (-), PCR(+) và Bactec dương tính
4.3. Bàn về giá trị chẩn đoán lao phổi của xét nghiệm PCR dịch phế quản4.4.Bàn về hình ảnh nội soi phế quản ở bệnh nhân lao phổi có nuôi cấy 4.4.Bàn về hình ảnh nội soi phế quản ở bệnh nhân lao phổi có nuôi cấy Bactec - MGIT dương tính, PCR (-), PCR(+) trong dịch phế quản
4.5.Bàn về giá trị tổ hợp các triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng chẩn đoán lao phổi AFB âm tính(nuôi cấy Bactec - MGIT dương tính).
DỰ KIẾN KẾT LUẬN
5.1. Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng của lao phổi AFB âm tính
5.2.Giá trị của xét nghiệm PCR dịch phế quản trong chẩn đoán lao phổi AFB âm tính.
1. Vũ Văn Biên (1995) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng và bước đầu tìm hiểu một số yếu tố nguy cơ lao phổi mới phát hiện ở người lớn. Luận văn thạc sỹ y học, Học viện quân y
2. Chương trình chống lao quốc gia ( 2007) Báo cáo tổng kết hoạt động CTCLQG năm 2006, phương hướng hoạt động năm 2007. Hà nội tháng 1, tr3.
3. Đỗ Đức Hiển (1994) Góp phần tiêu chuẩn hóa Xquang lao phổi AFB âm tính ở người lớn. Luận án tiến sỹ y học. Học viện quân y.
4. Hoàng Văn Huấn (2001). Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, Xquang chuẩn, cắt lớp vi tính và ELISA trong chẩn đoán lao thâm nhiễm ở người lớn. Luận án tiến sỹ y học. Học viện quân y.
5. Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (1999). Xét nghiệm sử dụng lâm sàng. Nhà xuất bản y học.
6. Hoàng Minh (1998). Bệnh lao và nhiễm HIV/ADIS. Nhà xuất bản y học: 108,111,114.
7. Nguyễn Thanh Liêm, Đặng Phương Kiệt(2002). Cách tiến hành công trình nghiên cứu Y học. Nhà xuất bản y học.
8. Trần Văn Ngọc (2005). Vai trò soi phế quản ống mềm trong chẩn đoán lao phổi AFB âm tính. Y học hực hành số 513:164-168.
9. Hoàng Thị Phượng (1999). Nghiên cứu vai trò PCR trong chẩn đoán TDMP do lao. Luận văn thạc sỹ y học. ĐHY Hà Nội.
10. Phạm Khắc Quảng (1994). Sinh bệnh học lao trong bệnh học lao và bệnh phổi. Nhà xuất bản y học:84-88.
11. Trần Văn Sáng(1994). Vi khuẩn lao trong bệnh học lao và bệnh phổi.
bệnh phổi :51-61.
13. Trần Văn Sáu (2000). Đặc điểm vi khuẩn trong dịch phế quản qua soi phế quản ống mềm bệnh viện 198. Y học thực hành :15-18.
14. Trần Văn Sáu (2007). Nghiên cứu vai trò soi phế quản ống mềm trong bệnh lý hô hấp tại bệnh viện 198. Hội nghị nội soi phế quản và lồng ngực toàn quốc lần thứ nhất:60-65.
15. Bùi Xuân Tám (1998) Các phương pháp chẩn đoán bệnh lao phổi trong bệnh lao hiện nay. Nhà xuất bản y học:53-109.
16. Bùi Thương Thương (1996). Soi phế quản ống mềm, rửa phế quản, phế nang chẩn đoán những trường hợp nghi lao phổi hoạt động. Hội nghị khoa học về lao, bệnh phổi, Hà nội:19-20.
17. Doãn Trọng Tiên (1996). Nghiên cứu một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng và khả năng đáp ứng miễn dịch ở người già lao phổi. Luận án tiến sỹ y học, ĐHY Hà Nội.
18. Nguyễn Đình Tiến (2006). Giá trị nội soi phế quản ống mềm và một số xét nghiệm liên quan trong chẩn đoán lao phổi AFB âm tính trong đờm.
Hội nghị nội soi phế quản và lồng ngực toàn quốc lần thứ nhất:60-65. 19. Nguyễn Chí Trung, Nguyễn Đình Tiến (2008). Xác định một số xét
nghiệm AFB đờm sau nội soi phế quản và cấy trực khuẩn hệ thống MGIT 960 dịch rửa phế quản ở bệnh nhân lao phổi AFB âm tính. Tạp chí y học quân sự số 33: 56-62.
TIẾNG ANH
20. Abe C, Hiramo, Wad M et al (1993) Detection of M. Tuberculosis clinical specimens by PCR and Gen Probe Ampilified M Tuberculosis ditect test. J.Clin. Microbiol, 31:3231-3270.
22. Aleksandrov AA, Vladimisrky MA, Shipina LK et al (2006) Use of PCR of diagonosis and valuation of chemotherapy for pulmonary tuberculosis. Probe tuberk bolezn Legk, (1):52-5.
23. Alenova AKH, Rakishev GB, Esmailova AT et al (2002).
Informative vulue of PCR in the diagnosis process. Probl Tuberk (1): 45-6
24. American Thoracic Society (2000). Diagnosis standar and classification of tuberculosis in adults and children. Am J Respir, Crit care Med, 161 (4): 1376-95.
25. Andreu J, Caceres J, Pallisa E et al (2004). Radiological manifestation of pulmonary tuberculosis. Eur J Radiol, 51 (2):139-49. 26. Basgoz N (2001). Clinical manifestation of pulmonary tuberculosis. Br
J Ophthalmol, 85:130-133.
27. Behr MA, Warpen SA, Salonnon H et al (1999) Transmisssion of M.Tuberculosis from patients smear negative for acid fast bacilli.
Cancet,353:444-9.
28. Bonington A (1998). Use of roche amplicor M.tuberculosis PCR in early diagnosis of tuberculosis meningitis. J . Clin. Microbiol vol 36, 5:1251-1254.
29. Campbell IA, Bah SO (2006) Pulmonary tuberculosis : Diagnosis and treatment. BMJ,332:1194-97 .
30. Chgaroenretanakul S, Chaipnaset A, Longchatales A et al (1993) Clinical study of tuberculosis pleural effusion and diagnosis value of pleural fluid for PCR, the 17th Eastern regionral conference on tuberculosis and respiratory diasease. November 1-4, Bangkok Thailand.
32. Christopher KB, Ide MO, Joseph HK et al (1996). Tuberculosis epidemilogy united American in tuberculosis : First ED, Little Brown company, New york: 85-95
33. Crofton J, Horn N, Miller F et al (1999). Clinical tuberculosis.
UIATLD, Second Edition :29-99.
34. Dannenberg AM (1999). Pathophysiology basis aspects tuberculosis and non-tuberculosis mycobacterium infections. Ed: Schoolbag D, ed 4th WB Saundres company philadelphia:17-47.
35. Dannenberg AM (1991). Delayed type hypersensitivity and cell mediated immunity in the pathogennesis of tuberculosis. Immunol today, 12:228-233.
36. Diperri G, Cructamo M, Dazi MC et al (1989). Nosocomial epidemic of activetuberculosis among HIV-infected patients.
Lancet (2):1502-1504
37. Donald AF, John FM (1996) Global epidernilogyl of tuberculosis.
Medical clinics of North American (Vol 776): 1235-1251.
38. Dutt AK, Stead WW (1994). Smear – negative pulmonary tuberculosis. Smin Resoir infect, 9(4):261
39. Fraser RS, Pare JAP, Praser RG (1994). Mycobacterium tuberculosis. Diagnosis of disease of the chest 2nd Ed, WB, Sauders company, Philadelphia : 315-329
40. Fraser RS, Pare JAP (1990). Diagnosis of disease of the chest 2nd Ed, WB, Sauders company, Philadelphia : 614-640.
Med 24(4): 16-20.
43. Garay SM(1996). Pulmonary tuberculosis. Tuberculosis Eds: Room WN, Little Brown and New York: 373-432.
44. Gen JF, Zheng ZQ, Hong XC et al (1993). The diagnostic advantage of fbreoptic bronchoscope for suspected pulmpnary tuberculosis.
45. Gomes M (2003) Pulmonary tuberculosis: Relationship between sputum bacilloscopy and radiogical lesions. Rev Int Med Trop,45 (5):275-281.
46. Harissn AC (2003). Clinical features and early diagnosis of tuberculosis. Guideline for tuberculosis control in New Zealand, Chapter,13:8-26
47. Hopewell PC (1995) A clinical view of tuberculosis. Radol Clin North Am,33:641-653.
48. Huong ND, Duong BD, Linh NN (2006) Evaluation of sputum smear microscopy in the national tuberculosis control programme in the North of Viet Nam. Int J Tuberc Lung Dis, 10 (3): 277-82.
49. Ito K, Aono A, Yoshiyama T et al (2006). Number of sputum cultures by MGIT system needed to diagnosis pulmonary tuberculosis. Kekkaku , 81:511-8.
50. Jajari C, Ernst M, Kalssdory B et al (2006) Rapid diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis by brochoalveolar lavage enzyme linked immunospot. Am J Respir Crit Care Med,174 (9):1048-54.
51. Jalled HD, Kuppusamy I, Yeow CS et al(1993). Fibeoptic bronchoscopy in diagnosis of pulmonary tuberculosis a Malaysian experience. Singapore Med J,34: 55-57.
Lung Dis, 7(8):764-770.
53. Kuaban C, Fotsin JG, Ekomo Mr et al (1996). Lower lung field tuberculosis in Yaounda, Cameroon. Cent Afr J Med, 42(3):62-5.
54. Lazic Z, Octrovic V, Radovanovic S (1995). Atypical localization of pulmonary in conference on global lung health and the 1995 annual meeting of UIATLD/UICTMR Paris (9-12 sept 1995) Tubercle and lung disease (Sep 2)(10): 534
55. Lin C(2000). Analysis of clinical features of 59 elder patients with pulmonary tuberculosis. Journal of the 4 th minitary Medical University,21(7):872-4.
56. Maekura R, Okuda Y, Nakagawa M et al (2001) Clinical evaluation of anti tuberculosis glycolipid immunoglobin G antibody assay for rapid serodiagnosis of pulmonary tuberculosis. J Clin Microbiol , 39(10):3603-3608.
57. Morris CD, Bird AK, Mell H et al (1989) The haematological and biochemical changesin severe pulmonary tuberculosis. Q J Med,73( 273):1151-9.
58. Nadia AK,(2003) Pulmonary tuberculosis in adults. Tuberculosis : A manual for medical students IUATLO Paris, WHO, chaper 2:44.
59. Nicol MW, Campbell IA, Jenkins PA et al (1995) Tuberculosis : clinical feature and management. Respir Med, 2th Ed, Saunders, Philadelphia (1):805-832.
60. Pant K, Chawla R, Mann PS et al (1981) Fibreoptic bronchoscopy in smear negative miniary tuberculosis. Chest: 1451-2.
62. Protille-Gomez L, Merris SL, Panduzo A et al(2000). Rapid and efficient detection of extra – pulmonary mycpbacterium tuberculosis by PCR analysis. Int J tuberc lung dis, 4(4): 361-370
63. Raja A (2004) Immunology of tuberculosis Indian J Med Res,120: 213-232.
64. Raviglione MC, Obriel RJ (1998) “ Tuberculosis” Harrison ‘ Principles of international medicine, Eds: fauci A, Braunwall E et al, Ed 14th Mcgraw Hill, New York , vol(1):1004-1013.
65. Rieder HL (1998) Epidemiological basic of tuberculosis control.
International Union tuberculosis Lung disease, Paris :87-119.
66. Rimmer J, Gibson P, Bryant DH et al (1998) Extension of pulmonary tuberculosis after fibreoptic bronchoscopy. Tubercle:57-61 67. Rossman MD, Mayok RL (1999) “ pulmonary tuberculosis”
Tuberculosis and non – tuberculous mycobacterial infection, Ed Scholossberg D, 4 th WB Saundrers Company Philadelphia:143-153.
68. Salia TIU, Morazova TI (2004) Interferon – Gamma and IgG antibodies to M. Tuberculosis in the serum of patients with active pulmonary tuberculosis. Probl Tuberk Bolezn Legk (11):43-5
69. Santos RM, Ogusku MM, Miranda M et al (2006) Evaluation of PCR in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in indigenous and non- indigenous patient. J Brac Pneumol,32(3):234-40.
70. Schein MF, Huenbner RE (1995) Tuberculin skin testing
Tuberculosis, clinical management and new challenges Eds: Rossman MD, Mc Graynor RR, McGrawhill, New York: 73-75.
with low HIV prevalence. Trop Med Health, 11(3):323-31.