2.4.1. Quy trình kích thích buồng trứng
Đối tượng nghiên cứu được chia thành hai nhóm, nhóm 1 và nhóm 2 được dùng hai phác đồ như sau:
•Nhóm 1: Sử dụng phác đồ ngắn.
Bắt đầu tiêm dưới da GnRH agonist (Diphereline, Ipsen, Pháp) 1 ống/ngày vào ngày 2 của vòng kinh. Ngày 3 của vòng kinh tiêm rFSH, liều rFSH tùy theo từng bệnh nhân và GnRH agonist (Diphereline, Ipsen, Pháp) giảm đi một nửa cịn 0,05 mg/ngày, duy trì đến ngày tiêm hCG (Pregnyl, Organon, Hà Lan).
• Nhóm 2: Sử dụng phác đồ dài.
+ Sử dụng GnRH agonirt 0,1 mg ( Diphereline) tiêm dưới da vào ngày 21 vòng kinh 1 ống /ngày trong 12 ngày
+ Định lượng LH, E2 sau khi sử dụng GnRH agonist 0,1mg (Diphereline) 12 ngày.
+ Khi nồng độ LH, 5 IU/l và E2 < 50 pg/ml và khơng có nang cơ năng > 10 mm thì bắt đầu KTBT với r FSH tùy theo từng bệnh nhân và GnRH agonist (Diphereline) giảm đi một nửa cịn 0,05 mg/ngày, duy trì đến ngày tiêm hCG (Pregnyl)
•Theo dõi q trình KTBT.
Đối với phác đồ ngắn và phác đồ dài: Sau khi tiêm rFSH được 7 ngày thì xét nghiệm định lượng E2 và siêu âm theo dõi sự phát triển nang noãn vào ngày thứ 8 nếu thấy nang nỗn > 14 mm thì siêu âm hàng ngày, nếu thấy nang nỗn ≤ 13 mm thì siêu âm sau 2 ngày. Đến khi có 2 nang có đường kính ≥ 18 mm hoặc 1 nang có đường kính ≥ 18 mm và 2 nang có đường kính 17 mm, nồng độ E2 khoảng 150- 200 pg/ml cho một nang trưởng thành thì tiêm hCG (Pregnyl) với liều 10.000 IU giúp tạo đỉnh LH và sự trưởng thành nang noãn, giúp khối OCC tách khỏi lớp tế bào hạt.
2.4.2. Quy trình chọc hút nỗn và ni cấy phôi.
Tinh trùng của bệnh nhân được lấy vào lọ vô trùng không độc trong ngày chọc hút trứng. Bệnh nhân phải kiêng giao hợp trước đó 3 - 5 ngày. Mẫu sau khi xuất tinh để ly giải trong 20 - 30 phút ở 37 0 C. Sau khi ly giải mẫu được đánh giá mật độ tinh trùng và độ di động tinh trùng theo WHO năm 2010. Với mẫu bình thường tinh trùng được xử lý bằng quay ly tâm trong môi trường thang nồng độ SpermGrad, Sau đó rửa lại bằng SpermRinse và cuối cùng bơi lên trong 1,5 ml môi trường IVF (Vitrolife- Thụy Điển). Với mẫu kém (mật độ tinh trùng < 10x106/ ml, khơng có tinh trùng loại A) thì khơng cần rửa lại bằng SpermRinse mà rửa bằng IVF để lấy cặn làm ICSI.
Trứng được đánh giá thụ tinh sau khi sau khi cho tiếp xúc với tinh trùng 12- 14 giờ đối với ICSI và 16 -18 giờ đối với IVF đơn thuần. Đánh giá chất lượng phôi vào ngày thứ 2 (Sau 48 h chọc hút) để giữ lại một số cho chuyển phơi tươi, các phơi cịn dư sẽ được đem đông lạnh.