Hỡnh 2.3. Mẫu răng thỏ dài 2mm sau khi cắt bỏ phần thõn răng phớa trờn và chõn răng phớa dưới.
Nghiờn cứu mụ tả đặc điểm mụ học của tủy răng thỏ sau chiếu laser Nghiờn cứu được tiến hành qua cỏc bước sau
- Bước 1: Gõy mờ thỏ
Sử dụng thuốc ketamine tiờm tĩnh mạch, liều 100 mg/ 1kg cõn nặng. - Bước 2: Bộc lộ vựng cổ răng dưới lợi
Đỏnh dấu vị trớ cổ răng sỏt lợi của hai răng cửa trờn bằng một mũi khoan trụ nhỏ.
Bộc lộ cổ răng dưới lợi ở mặt trước (mặt mụi) hai răng cửa trờn bằng hai đường rạch song song ở phớa xa hai răng cửa (đường rạch hướng về phớa chõn răng, hơi mở rộng về phớa trờn để vạt được nuụi dưỡng tốt). Búc tỏch vạt toàn phần.
Dựng mũi khoan xương mài thấp phần mào xương ổ răng ở mặt trước (mặt mụi) hai răng cửa hàm trờn để phần mào xương cỏch đường đỏnh dấu vị trớ cổ răng 2 mm.
- Bước 3: Tạo “cửa sổ Cỏc răng cửu trờn của
nghiờn cứu tỡm liều chiếu
men” (hỡnh 2.4)
mỗi con thỏ được tạo một “cửa sổ men” tương tự
- Bước 4: Chiếu laser (hỡnh 2.5)
Hai răng cửa trờn của mỗi con thỏ được chia thành 2 nhúm gồm nhúm TN5 và nhúm TN6 nhận liều chiếu laser với 2 phương thức chiếu tia khỏc nhau tại vị trớ “cửa sổ men”.
Nhúm TN5 bao gồm cỏc răng cửa trờn bờn phải của mỗi con thỏ nhận
liều chiếu tia tối ƣu: chiếu 10 giõy liờn tục- nghỉ 10 giõy tại một điểm bề
mặt, tổng thời gian chiếu 20 giõy/mm2 tương đương liều 10J/ mm2.
Nhúm TN6 bao gồm cỏc răng cửa trờn bờn trỏi của mỗi con thỏ: chiếu liờn tục 20 giõy/mm2 (khụng cú khoảng nghỉ nhiệt) tương đương liều 10J/ mm2.
Sử dụng mỏy laser diode với mức cụng suất và cỏc chế độ cài đặt tương tự
nghiờn cứu tỡm liều chiếu tia tối ưu. Một lỏ chắn thộp được đặt giữa hai răng để
ỏnh sỏng laser khụng tỏc động đến răng cũn lại trong quỏ trỡnh chiếu tia.
Mỗi chiếc răng được chiếu laser 3 lần với cựng một phương thức, khoảng cỏch giữa cỏc lần chiếu tia là 7 ngày.
- Bước 5: Cố định hai răng cửa của thỏ (hỡnh 2.6)
Sau lần chiếu tia thứ 3, lấy mẫu hai răng cửa trờn của thỏ, đổ mẫu và gửi xưởng đỳc hai chiếc chụp thộp (liền nhau) theo thiết kế.
Gắn chụp thộp lờn hai răng cửa của thỏ bằng Fuji Plus.
Cắm hai mini vis vào hai bờn sống hàm hàm trờn của thỏ cỏch vị trớ răng cửa 1 – 2 cm.
Buộc chỉ thộp từ hai chiếc múc của chụp thộp đến mini vis để hạn chế sự mọc dài ra của răng.
- Bước 6: Hậu phẫu
Thỏ được chăm súc kỹ bằng chế độ ăn mềm, tiờm khỏng sinh 1ml/ ngày/ 1 con thỏ trong 3 ngày, bụi Chlohexidine 0,12% hàng ngày tại vựng phẫu thuật trong 7 ngày.
- Bước 7: Thu hoạch mẫu
Sau ba thỏng tớnh từ lần chiếu laser thứ ba, thỏ được gõy mờ và nhổ 2 răng cửa hàm trờn. Cỏc răng được nhổ bằng bẩy rất nhẹ nhàng để khụng làm tổn thương mẫu. Khi răng đó lung lay dựng kỡm lắc nhẹ từ từ rỳt răng ra.
Răng sau khi nhổ được rửa sạch bằng nước muối sinh lý. Cắt bỏ phần thõn răng phớa trờn và chõn răng phớa dưới tại vị trớ cỏch “cửa sổ men” đó tạo 1mm.
- Bước 8: Xử lý mẫu
Ngõm mẫu trong dung dịch, cố định Bouin ớt nhất 24 giờ. Khử khoỏng bằng dung dịch axit nitric, sau đú mẫu được đỳc trong khối sỏp.
Cắt lỏt ngang cỏc mẫu răng, độ dày mỗi lỏt 3 – 5 àm. Cỏc lỏt cắt được gắn trờn lam kớnh và nhuộm màu bằng Hematoxylin và Eosin.
- Bước 9: Soi mẫu
Mẫu được soi bằng kớnh hiển vi quang học ở cỏc độ phúng đại 250, 500 và 1000 lần để đỏnh giỏ sự thay đổi của mụ tủy và lớp nguyờn bào tạo ngà sau chiếu tia laser với cỏc phương thức khỏc nhau.
- Bước 10: Ghi nhận kết quả
Nghiờn cứu này chỉ nhằm mục đớch mụ tả đặc điểm mụ tủy và lớp nguyờn bào tạo ngà sau chiếu laser (định tớnh) mà khụng tớnh khối lượng lớp nguyờn bào tạo ngà (định lượng).