Hình 3 .2 Dịch chiết các loại Alcohol
Hình 3.7 Kết quả định tính flavonoid trích ly từ lá Diếp Cá
Dựa vào màu sắc phản ứng của Flavonoid qua Bảng 3.7. và Hình 3.7. cho thấy phản ứng flavonoid với FeCl3 và NaOH phản ứng tạo màu xanh đen và phản ứng tạo màu vàng sáng đều là phản ứng dƣơng tính với nhóm Flavonol
3.6. Định tính flavonoid bằng sắc ký lớp mỏng
Việc phân tích thành phần flavonoid bằng sắc ký lớp mỏng đƣợc tiến hành trên mẫu flavonoid trích ly đƣợc từ lá Diếp cá. Để phân tích thành phần flavonoid trên bản mỏng, sử dụng phƣơng pháp sắc ký mỏng một chiều: đƣợc tiến hành trên bản mỏng Silicagel, chạy sắc ký một chiều từ dƣới lên với hệ dung môi (etyl axetat: toluene: formic acid : nƣớc = 7: 3: 1,5: 1). Sau khi chạy sắc ký xong, bản mỏng đƣợc làm khô trong tủ ấm ở nhiệt độ 32⁰ C- 37⁰ C sau đó quan sát dƣới ánh sáng thƣờng và ánh sáng tử ngoại
A B
Hình 3.8. Kết quả chạy sắc ký bản mỏng của flavonoid quan sát dƣới ánh sáng thƣờng (A) và ánh sáng tử ngoại (B)
Quan sát Hình 3.8. nhận thấy q trình trích ly flavonoid từ lá Diếp cá đã thành công, dung môi để chạy sắc ký bản mỏng cho flavonoid tách chiết từ lá Diếp cá là phù hợp. Khi quan sát dƣới ánh thƣờng trên ảnh sắc ký các vết tách ra có màu nâu nhạt mờ và hơi khó quan sát, nhƣng khi quan sát ở ánh sáng tử ngoại các vết tách ra phát quang rất dễ quan sát. Nhƣ đã biết thành phần flavonoid trong lá Diếp cá gồm các flavanol nhƣ (-)-epicatechin gallate (ECG), (-)- epigallocatechin (EGC), (-)- epigallocatechin gallate (EGCG), (-)- epicatechin (EC), (+)- gallocatechin (GC), (+)- catechin (C) và các dẫn xuất; flavonol nhƣ quercetin, kaempferol, và các dẫn xuất glycoside; flavone. Qua hình ảnh chạy sắc ký, thấy có vết tách ra từ flavonoid tách chiết từ lá Diếp cá thu đƣợc có querecetin với một hàm lƣợng nhỏ và bên cạnh đó flavonoid tách chiết từ lá Diếp cá cịn chứa các nhóm flavanol, flavone thể hiện ở các vết tách ra trên ảnh chạy sắc ký.
3.7. Khả năng kháng khuẩn của cao flavonoid chiết xuất từ lá Diếp cá
Trong dân gian, lá Diếp cá thƣờng đƣợc sử dụng để chữa một số bệnh viêm nhiễm nhƣ ghẻ lở,mụn nhọt,…đây là những bệnh liên quan tới các chủng vi khuẩn có khả năng gây viêm nhiễm bên trong và bên ngồi cơ thể. Tiến hành kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn của cao Diếp cá chiết xuất từ lá diếp cá ở nồng độ 100mg/ml 4 chủng vi sinh vật kiểm định: Bacilus creaus, Sigella. Escherichia coli, Salmonella enterica.
A B
C D