quế 5mM 10mM 20mM Trùn (ml) 30 30 30 Dung dịch đệm 0,5M (ml) 2 2 2 NaCl (g) 1 1 1 Rỉ đƣờng Chọn nồng độ từ thí nghiệm trên Khống 0,1M (ml) 1 2 4
Enzyme (µl) Chọn nồng độ từ thí nghiệm trên
H2O Thêm đủ 40ml/phản ứng
Thí nghiệm đƣợc thực hiện ở 37oC, sử dụng máy khuấy từ gia nhiệt với tốc độ 130 rpm.
Đánh giá hiệu suất thủy phân dựa trên sự còn lại của cơ chất sau mỗi 12 giờ. Mẫu thí nghiệm đƣợc hút 1ml, ly tâm 4oC 14000 rpm trong 10 phút, loại ỏ dịch nổi, phần cặn là lƣợng cơ chất protein còn dƣ và phi protein, tiến hành cân phần cặn này. Hiệu suất thủy phân đƣợc tính theo cơng thức sau:
Hiệu suất thủy phân (%) = [(M0 – Mt)/M0 ] × 100% Trong đó: M0: khối lƣợng chất khơ an đầu
37
2.2.2.5 Khảo sát pH
Sau khi lựa chọn đƣợc nồng độ rỉ đƣờng, nồng độ enzyme, cofactor, nồng độ cofactor ổ sung cho hiệu quả thủy phân tối ƣu, thực hiện khảo sát ảnh hƣởng của pH ở các khoảng pH 4 – 5 – 6 – 7 – 8. Thí nghiệm đƣợc thực hiện ở 37oC, sử dụng máy khuấy từ gia nhiệt với tốc độ 130 rpm.
Đánh giá hiệu suất thủy phân dựa trên sự còn lại của cơ chất sau mỗi 12 giờ. Mẫu thí nghiệm đƣợc hút 1ml, ly tâm 4oC 14000 rpm trong 10 phút, loại ỏ dịch nổi, phần cặn là lƣợng cơ chất protein còn dƣ và phi protein, tiến hành cân phần cặn này. Hiệu suất thủy phân đƣợc tính theo cơng thức sau:
Hiệu suất thủy phân (%) = [(M0 – Mt)/M0 ] × 100% Trong đó: M0: khối lƣợng chất khơ an đầu
Mt: khối lƣợng chất khô cân đƣợc theo thời gian phản ứng
2.2.3 Xác định các điều kiện vật lý trong quá trình sấy phun tạo chế phẩm protein ở quy mơ phịng thí nghiệm protein ở quy mơ phịng thí nghiệm
Dịch thuỷ phân trùn quế sau khi đƣợc thu nhận, lọc loại ỏ các thành phần cặn ã và đƣợc trộn đều với chất mang (maltose dextrin – M100), thêm nƣớc để điều chỉnh tỷ lệ chất rắn theo từng điều kiện khảo sát.
Tiến hành phun sấy trên thiết ị sấy phun SD BASIC của hãng Labplant. Các thông số đƣợc tiến hành cài đặt ao gồm nhiệt độ sấy, tốc độ cấp dịch. Hiệu quả của quá trình sấy đƣợc đánh giá trên sản phẩm tạo thành.
38
Hình 2.1 Thiết ị sấy phun SD BASIC của hãng Labplant
Tỷ lệ chất rắn đƣợc xác định ằng Brix kế ATAGO master 53M để đạt đƣợc tỷ lệ 30 và 40%.
Nhiệt độ đầu vào đƣợc thay đổi 120ºC, 130ºC, 140ºC và 150ºC. Tốc độ cấp dịch 20ml/phút, 25ml/phút và 30ml/phút.
2.2.4 Ứng dụng chế phẩm protein từ trùn quế trên heo con trong điều kiện nuôi công nghiệp công nghiệp
Chế phẩm ổ sung ao gồm ột trùn sau khi sấy phun phối trộn với 1% enzyme phytase.
39
2.2.4.1 Bố trí thực nghiệm trên đàn heo con sau cai sữa
Heo đƣợc chia thành 4 lô thực nghiệm. Mỗi lô gồm 36 cá thể heo (26 ngày tuổi), trọng lƣợng khoảng 7±1 kg/cá thể. Mỗi lô đƣợc nuôi trong 4 ô chuồng nuôi riêng iệt, 2 ô chuồng n chung 1 máng và nuôi đến khi heo đƣợc xuất sang chuồng nuôi heo thịt (khoảng 4 tuần).
Bố trí thực nghiệm nhƣ sau:
Lô thực nghiệm A: Đối chứng, chỉ cho n thức n của trại.
Lô thực nghiệm B: Bổ sung 10g chế phẩm ổ sung/kg thức n trộn chung với thức n của trại.
Lô thực nghiệm C: Bổ sung 20g chế phẩm ổ sung/kg thức n trộn chung với thức n của trại.
Lô thực nghiệm D: Bổ sung 30g chế phẩm ổ sung/kg thức n trộn chung với thức n của trại.
2.2.4.2 Phương pháp trộn thức ăn với chế phẩm thu nhận được
Chế phẩm đƣợc trộn đều ằng tay với thức n cho heo theo yêu cầu của thí nghiệm.
2.2.4.3 Phương pháp cho heo ăn và xác định trọng lượng heo
Heo đƣợc cho n thức n đã ổ sung chế phẩm. ƣợng thức n cung cấp trong tuần đầu tiên chỉ ằng 1/2 nhu cầu thực tế của heo (half feed) để heo con tập n đảm ảo chúng n hết, không ỏ thức n thừa và sau đó cung cấp thức n theo nhu cầu thực tế của heo. Thức n đƣợc cung cấp cho heo 2 ngày/lần.
Trọng lƣợng của heo đƣợc xác định 1 tuần/lần và cân chung tổng 2 ô chuồng 18 cá thể.
2.2.4.4 Phương pháp đánh giá tỷ lệ tiêu chảy
Heo đƣợc ghi nhận số lƣợt tiêu chảy theo từng máng n (2 ô chuồng/18 cá thể) trong suốt q trình ni và đƣợc chia làm 4 tuần.
40
2.2.4.5 Phương pháp thu nhận chất thải từ ô chuồng nuôi và định lượng Phospho
Thu nhận chất thải: Vệ sinh sạch chuồng ni, sau đó thả heo vào ni và thu 3 mẫu phân/máng n (2 ô chuồng/18 cá thể) trƣớc khi cho heo n. Tiếp tục thu mẫu phân sau 2 tuần nuôi và trƣớc khi xuất chuồng. Mẫu phân thu đƣợc sẽ phơi 2 ngày và tiến hành xác định hàm lƣợng phospho.
Tiến hành định lƣợng Phospho
Nguyên tắc: Khi cho phosphate tác dụng với ammonium moly date sẽ tạo ra phosphomoly dat có màu vàng. Khi khử phosphomoly dat, màu vàng sẽ chuyển thành màu xanh moly dat. Độ đậm của màu sắc tỉ lệ với hàm lƣợng phosphor trong mẫu. Phản ứng đƣợc minh họa theo phƣơng trình sau:
2(MoO2.4MoO3) + H3PO4 + 4H2O → (MoO2.4MoO3 )2 + H3PO4 + 4H2O
Các chất khử thƣờng sử dụng là SnCl2, hydrazin, axit ascorbic, quinon, oxalat, sulfit. Các chất khử có thể sử dụng đơn độc hay phối hợp với nhau. Ví dụ: phối hợp giữa sulfit và quinon.
Dựng đƣờng chuẩn Phospho
ấy một loạt ống nghiệm sạch, tiến hành pha dung dịch phospho với nồng độ theo ảng sau:
41