Định lượng fructosamin

2.3. Phương pháp nghiên cứu

2.3.6. Định lượng fructosamin

2.3.6.1. Hóa chất và trang thiết bị

Xét nghiệm định lượng fructosamin được thực hiện trên hệ thống máy Roche/Hitachi cobas c. và hóa chất đồng bộ.

2.3.6.2. Nguyên lý xét nghiệm

Xét nghiệm so màu bởi phản ứng với tetrazolium nitroblue.

Xét nghiệm so màu đối với fructosamine (protein đã glycosyl hóa) dựa trên khả năng của ketoamines làm giảm tetrazolium nitroblue trong môi trường kiềm. Tốc độ tạo thành formazan tỷ lệ thuận với nồng độ fructosamine và được đo bằng phương pháp đo quang.

2.3.6.3. Thuốc thử - dung dịch tham gia xét nghiệm

R1 Nitroblue tetrazolium: 1.2 mmol/L; pH 7.5; đệm không phản ứng; chất ổn định; chất hoạt động bề mặt

R2 Đệm Carbonate: 1.5 mol/L; pH 10.4

2.3.6.3. Lấy và chuẩn bị mẫu

Chỉ những mẫu được liệt kê dưới đây đã được thử nghiệm và được chấp nhận.

Huyết thanh: Lấy huyết thanh bằng cách sử dụng các ống chuẩn lấy mẫu. Huyết tương: Huyết tương chống đông bằng Li-heparin và K2-EDTA Các loại mẫu phẩm được liệt kê đã được thử nghiệm cùng với bộ các ống nghiệm lấy mẫu chọn lọc, có bán trên thị trường vào thời điểm xét nghiệm, nghĩa là không phải tất cả các ống lấy mẫu của các nhà sản xuất đều được thử nghiệm. Các bộ ống chứa mẫu của các nhà sản xuất khác nhau có thể làm từ những vật liệu khác nhau có khả năng ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm trong một số trường hợp. Khi xử lý mẫu trong các ống chính (ống chứa mẫu), phải tuân theo hướng dẫn của nhà sản xuất ống.

Ly tâm các mẫu có kết tủa trước khi thực hiện xét nghiệm. Độ ổn định: 3 ngày ở 15-25 °C8

2 tuần ở 2-8 °C8

2 tháng ở (-15)-(-25) °C9

2.3.6.4. COBAS INTEGRA 400/400 plus test definition

Measuring mode Absorbance

Chế độ đo: Kinetic (Động Học)

Reaction mode R1-S-SR

Chiều Phản Ứng Tăng dần

Bước sóng đo: Chính/Phụ: 552/652 nm

Điểm đo đầu tiên/cuối cùng: 86/98 ( mỗi điểm đo cách nhau 10.6 giây)

Fructosamine được đo theo chế độ đo kéo dài (thời gian đo xấp xỉ 17 phút) 2.3.6.5. Pipetting parameters Diluent (H2O) R1 60 μL 24 μL Sample 6 μL 12 μL SR 12 μL 12 μL Total volume 126 μL 2.3.6.6. Yếu tố hạn chế – ảnh hưởng

Tiêu chuẩn: Độ phục hồi nằm trong khoảng ± 10 % giá trị ban đầu với nồng độ fructosamine ở 285 μmol/L.

Vàng da:10 Khơng có nhiễu đáng kể với chỉ số I tối đa đến 5 cho bilirubin liên hợp và không liên hợp (nồng độ bilirubin liên hợp và không liên hợp khoảng: 85 μmol/L (5 mg/dL) [25] .

Tán huyết: Khơng có nhiễu đáng kể với chỉ số H tối đa đến 100 (khoảng nồng độ hemoglobin: 62 μmol/L (100 mg/dL).

Lipid máu: Khơng có nhiễu đáng kể với chỉ số L tối đa đến 1800.

Có sự tương quan yếu giữa chỉ số L (tương ứng với độ đục) và nồng độ triglycerides.

Thuốc: Không thấy nhiễu ở nồng độ trị liệu sử dụng nhóm các thuốc thơng thường [10],[26] .

Ngoại lệ: Levodopa có thể làm kết quả fructosamine cao giả. Oxytetracycline có thể làm kết quả fructosamine cao giả.

Khác: Nồng độ acid ascorbic tối đa đến 170 μmol/L (30 mg/L) không gây nhiễu đáng kể đến xét nghiệm.

Trong tình trạng bị phù (ví dụ khi mang thai) có thể tạo tương quan fructosamine với protein sử dụng công thức sau:

Fructosaminecorr = fructosamine đo được × 72 protein tồn phần đo được (g/L)

Tình t rạng loạn protein máu có thể ảnh hưởng đến các giá trị fructosamine.

Trong một số hiếm trường hợp, bệnh gammaglobulin, đặc biệt típ IgM (bệnh tăng macroglobulin Waldenstrưm), có thể cho kết quả khơng đáng tin cậy.[17]

Với mục tiêu chẩn đoán, kết quả xét nghiệm cần được đánh giá kèm theo bệnh sử, thăm khám lâm sàng và các phát hiện khác.

2.3.6.7. Giới hạn đo và khoảng đo

Khoảng đo: 14-1000 μmol/L

Xác định những mẫu có nồng độ cao hơn thông qua chức năng chạy lại mẫu. Pha lỗng mẫu thơng qua chức năng chạy lại mẫu theo tỷ lệ 1:2. Kết quả từ những mẫu được pha loãng bởi chức năng chạy lại sẽ được tự động nhân lên với hệ số 2.

Giới hạn dưới của phương pháp đo

Giới hạn phát hiện dưới của xét nghiệm: 14 μmol/L

Giới hạn phát hiện dưới tương ứng với nồng độ chất phân tích thấp nhất mà máy có thể đo được và phân biệt được với giá trị không. Giá trị này được

tính toán bằng nồng độ chuẩn thấp nhất cộng với ba lần độ lệch chuẩn (chuẩn 1 + 3 SD, độ lặp lại, n = 21).

Giá trị sinh học

Nồng độ fructosamine được xác định ở 555 đối tượng người lớn

khỏe mạnh từ 20 đến 60 tuổi. Khoảng tham chiếu từ 205 đến 285 μmol/L được xác định trong nghiên cứu này dành cho người lớn không mắc bệnh đái tháo đường. Trong quần thể bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường khó kiểm sốt, giá trị fructosamine có ý nghĩa được ghi nhận là 396 μmol/L (trong khoảng 228-563 μmol/L). Nồng độ fructosamine cao hơn giá trị mong muốn đã được thiết lập là một dấu hiệu cho thấy tăng glucose huyết trong 1-3 tuần trước đó hoặc lâu hơn.

Mỗi phịng xét nghiệm nên nghiên cứu tính chuyển đổi của các giá trị sinh học theo quần thể bệnh nhân của mình và nếu cần nên xác định khoảng tham chiếu riêng.

Khung thời gian của phản ứng:

Tổng thời gian: 98 x 10.6 = 1038.8 s = 17 phút 18.8 giây. Điểm đo đầu tiên: 86

Đặc điểm về tuổi, giới