Trong kỹ thuật MS/MS một ion chọn lọc ở chế độ MS lần 1 được phân tích tiếp bằng cách sử dụng năng lượng bẻ gãy, tạo ra một hoặc vài ion con đặc trưng ở chế độ phân tích MS lần 2. Kỹ thuật MS/MS được sử dụng để tăng độ chọn lọc và tăng độ nhạy do làm giảm nhiễu đường nền rất đáng kể.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng kỹ thuật MS/MS để định lượng AZI trong huyết tương.
Chương 2
NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU
2.1.1 Dược phẩm
- Chế phẩm thử (T): Viên nang Azithromycin 250mg do Công ty CPDP X sản xuất. SĐK: VNB-2709-05, Số lô: 08102, hạn sử dụng: 10/2011. - Chế phẩm chuẩn (R): Viên nén bao phim Zitromax∗ 250mg của hãng dược phẩm Pfizer - Bỉ, Số lô: 76418604, hạn sử dụng: 05/2010.
2.1.2. Hoá chất- chất chuẩn
- Azithromycin chuẩn: Chất chuẩn của Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương-Bộ Y tế, hàm lượng 97,27% C38H72N2O12 (khan); nước 4,59%; Số kiểm soát: 0108183.
- Chất nội chuẩn: Chất chuẩn Roxithromycin của Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương-Bộ Y tế, hàm lượng 98,98% C22H23N3O7S (khan); nước: 0,39%; Số kiểm soát: WS 0107219.
- Diethyl Ether, Methanol, Cloroform, Isopropanol, MeCN: loại tinh khiết HPLC- Merck.
- Amoni acetat, Amoniac : Loại tinh khiết phân tích-Merck.
- Các nguyên liệu và hoá chất khác đều đạt tiêu chuẩn do các nguồn tin cậy cung cấp theo yêu cầu của thực nghiệm.
- Huyết tương trắng của Viện Huyết học và Truyền máu Trung ương. Số lô: H1510073147, H1510073184, H1510073185, H1010072056.
2.1.3. Thiết bị
● Dụng cụ thiết bị dùng trong phân tích: Tất cả dụng cụ thiết bị đều được chuẩn hoá theo ISO/IEC 17025-2005 và GLP bao gồm:
- Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ LC-MS/MS Thermo: Bơm 700512 kiểu gradient; Bộ phận tiêm mẫu tự động 750145; Máy sinh khí Nitơ có dung lượng 30L/phút; Detector LC-MS/MS TQUO 2112; Phần mềm điều khiển và xử lý kết quả Software Multi-System Manager.
- Cân phân tích Sartorius CP-224S (d = 0,1mg; e = 0,1mg) - Máy ly tâm lạnh Sartorius Sigma 2-16K.
- Máy ly tâm thường Hermle.
- Tủ lạnh sâu T0 = -400C, Sanyo MDF-236. - Tủ lạnh sâu (T0 = -800C) MDF-192. - Bộ bốc hơi dung mơi sử dụng khí Nitơ.
- Micropipet Eppendorf 1-10µl, 10-100µl, 100-1000µl. - Ống nghiệm lấy máu chứa EDTA.
- Bình định mức, dụng cụ thuỷ tinh đạt tiêu chuẩn (class A) dùng trong phân tích.
● Dụng cụ thiết bị dùng trong lâm sàng (xét nghiệm, lấy mẫu máu
NTN):
- Các xét nghiệm lâm sàng thực hiện tại Bệnh viện Đống Đa-Hà Nội. - Các dụng cụ lấy mẫu: kim luồn, bơm tiêm và kim tiêm vô khuẩn.
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1.Phương pháp phân tích Azithromycin trong huyết tương