CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1. Phương pháp bố trí thí nghiệm
2.3.1.3. Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của AgNPs và FeNPs lên
tạo cây con hoàn chỉnh từ chồi trong ni cấy in vitro
Thí nghiệm 3.1. Khảo sát ảnh hưởng của AgNPs và FeNPs lên quá trình tạo cây con hồn chỉnh từ chồi cây salem ni cấy in vitro
Chồi đơn cây salem (1,5 cm) thu nhận từ thí nghiệm 2.2 được cấy chuyền để đảm bảo số lượng và tính đồng nhất; sau đó cấy vào mơi trường MS chứa 0,4 mg/L NAA, 30 g/L sucrose, 8,5 g/L agar [59] và bổ sung AgNPs (0,4; 0,8; 1,2; 1,6; 2,0 mg/L), hoặc thay thế Fe-EDTA bởi FeNPs (0,7; 1,4; 2,8; 5,6; 8,4; 11,2 mg/L). Đối chứng là môi trường không bổ sung hoặc thay thế các nano kim loại. Mỗi nghiệm thức được tiến hành trên 30 bình (250 mL chứa 30 mL mơi trường), mỗi bình cấy 5 mẫu. Tỷ lệ ra rễ (%), chiều cao cây (cm), chiều rộng lá (cm), chiều dài rễ (cm), khối
lượng tươi (g), khối lượng khô (mg), chlorophyll (nmol/cm2), hàm lượng AgNPs hấp thu (µg/kg), khí ethylene tích luỹ được ghi nhận sau 4 tuần ni cấy.
Thí nghiệm 3.2: Khảo sát ảnh hưởng của AgNPs và FeNPs lên quá trình tạo cây con hồn chỉnh từ chồi cây dâu tây nuôi cấy in vitro
Chồi đơn cây dâu tây (1,5 cm) thu nhận từ thí nghiệm 1.2 được cấy chuyền để đảm bảo số lượng và tính đồng nhất; sau đó cấy vào mơi trường MS chứa 0,02 mg/L NAA, 30 g/L sucrose, 1 g/L than hoạt tính, 8,5 g/L agar [69] và bổ sung AgNPs (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg/L) hoặc thay thế Fe-EDTA bởi FeNPs (0,7; 1,4; 2,8; 5,6; 11,2 mg/L). Đối chứng là môi trường không bổ sung hoặc thay thế các nano kim loại. Mỗi nghiệm thức được tiến hành trên 30 bình (250 mL chứa 30 mL mơi trường), mỗi bình cấy 5 mẫu. Tỷ lệ ra rễ (%), chiều cao cây (cm), số rễ/cây, chiều dài rễ (cm), khối lượng tươi (g), khối lượng khô (mg), chlorophyll (nmol/cm2), hàm lượng AgNPs hấp thu (µg/kg), khí ethylene tích luỹ được ghi nhận sau 4 tuần ni cấy.
Thí nghiệm 3.3: Khảo sát ảnh hưởng của AgNPs và FeNPs lên quá trình tạo cây con hồn chỉnh từ chồi cây sâm Ngọc Linh ni cấy in vitro
Chồi đơn cây sâm Ngọc Linh (có kích thước trung bình là 1,5 cm) thu nhận từ thí nghiệm 2.3 được cấy chuyền để đảm bảo số lượng và chất lượng đồng nhất; sau đó được cấy vào mơi trường SH chứa 1 mg/L NAA, 30 g/L sucrose, 8,5 g/L agar [117] và bổ sung AgNPs (0,4; 0,8; 1,2; 1,6; 2,0 mg/L), hoặc thay thế Fe-EDTA bởi FeNPs (0,7; 1,4; 2,8; 5,6; 11,2 mg/L). Đối chứng là môi trường không bổ sung hoặc thay thế các nano kim loại. Mỗi nghiệm thức được tiến hành trên 30 bình (250 mL chứa 30 mL mơi trường), mỗi bình cấy 3 mẫu. Tỷ lệ ra rễ (%), chiều cao cây (cm), số rễ/cây, đường kính củ (cm), chiều dài củ (cm), khối lượng tươi (g), khối lượng khô (g), cholorophyll (nmol/cm2), hàm lượng AgNPs hấp thu (µg/kg), khí ethylene tích luỹ được thu nhận sau 12 tuần ni cấy.