Không như Aeromonas spp kết quả đã tìm thấy sự kháng thuốc của E. ictaluri trên cả ba loại kháng sinh làm MIC và chiếm tỷ lệ khá cao. Có tới 75% (6/8) số vi khuẩn kháng với chloramphenicol và đối với oxytetracycline thì con số này là 62,5% (5/8), kết quả này giống với nghiên cứu của Crumlish
et al (2006) có 61,5% chủng E. ictaluri kháng với oxytetracycline. Theo nghiên cứu gần đây của Từ Thanh Dung (2008) thì có tới 81,3% E. ictaluri
kháng với oxytetracycline số còn lại là nhạy nhưng nhạy ở mức thấp (≤ 2 µg/ml) còn trong nghiên cứu này thì đã nhạy ở mức cao hơn (4 µg/ml). Ngoài ra, cũng theo nghiên cứu của Stock and Wiedemann (2001) và Từ Thanh Dung (2008) thì không tìm thấy sự kháng thuốc của E. ictaluri đối với
chloramphenicol và tất cả đều nhạy ở mức rất thấp (≤0,5 µg/ml) ngược lại thì trong nghiên cứu này vi khuẩn đã kháng với số lượng chủng khá cao (75%).
Theo nghiên cứu sự kháng thuốc của Stock and Wiedemann (2001) trong số 102 chủng thuộc 3 loài E. ictaluri, E. tarda và E. hoshinae thì chỉ có 2 chủng (1,96%) kháng với streptomycin. Còn trong nghiên cứu này thì 100% vi khuẩn E. ictaluri đã kháng với streptomycin.
Bảng 4.4. Giá trị MIC của thuốc kháng sinh trên 8 chủng vi khuẩn E. ictaluri
Thuốc kháng sinh
Khoảng giá trị MIC (µg/ml) Số
chủng kháng ≤0,5 1 2 4 8 16 32 64 ≥128 Chloramphenicol 1 1 6 5 Oxytetracycline 3 2 2 1 5 Streptomicine 1 7 7
Hình 4.13: Kết quả MIC của Aeromonas spp ở nồng độ 2 µg/ml không có vi khuẩn phát triển sau 24 giờủở 28-30oC (mũi tên trên hình)
PHẦN V
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận
Người dân sử dụng nhiều loại kháng sinh để trị bệnh cho cá trong đó có ba loại được dùng nhiều là enrofloxacin (70,97%), florfenicol (61,29%), doxycycline (41,94%).
Kết quả kháng sinh đồ tìm ra 100% Aeromonas spp kháng với cefazoline, 100% nhạy với florfenicol và chloramphenicol. Và 87,5% nhạy với tetracycline, doxycycline.
Đa số chủng vi khuẩn E. ictaluri đã kháng với streptomycine (83%), chloramphenicol (58%), florfenicol (50%) các và tetracycline (42%). Kết quả cho thấy 100% số chủng nhạy với ampicilline và cefazoline.
Đặc biệt, hiện tượng đa kháng được tìm thấy với tỉ lệ cao, Aeromonas
spp (62,5% số chủng), E. ictaluri (58,3%).
Kết quả MIC đã tìm thấy E. ictaluri kháng với chloramphenicol ở mức cao 75%.
Thuốc kháng sinh oxytetracycline có giá trị MIC nhạy nhưng ở mức cao với vi khuẩn E. ictaluri là 4 (µg/ml) và Aeromonas spp là từ 4-8 (µg/ml)
5.2 Đề xuất
Cần thu thêm nhiều nơi nuôi cá tra ở vùng nước lợ khác ở ĐBSCL và thời gian nghiên cứu kéo dài để có cách đánh giá một cách toàn diện hơn.
Cần có thêm nhiều nghiên cứu sâu về cơ chế và những biến đổi về tính kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh trên cá tra nuôi ở vùng nước lợ ở ĐBSCL.
Cần có những nghiên cứu song song về sự kháng thuốc của vi khuẩn gây bệnh trên cá tra nuôi ở vùng nước ngọt và nước lợ để có sự so sánh, từ đó giúp cho việc quản lý và sử dụng kháng sinh hợp lý hơn.
PHẦN VI
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Adanir. D.O.R, and Hulya Turutoglu, 2007. Isolation and antibiotic susceptibility of Aeromonas hydrophila in a carp (Cyprinus carpio)
hatchery farm. Bull Vet Inst Pulawy 51,pp. 361-364.
2. Akinbowale,. O. L., H. Peng and Barton, 2006. Antimicrobial resistnce in bacteria isolated from aquaculture sources in Australia. Journal of Applied Microbiology 100 (2006) pp 1103-1113.
3. Austin B. , Dawn A. Austin, 1993`. Bacterial fish pathogens: disease of farmed and wild fish. p, 218-219 (552 pages).
4. Bauer, A.W., and W.M.M. Kirby., 1966. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. American Journal of Clinical Pathology, 45: pp: 493-496.
5. Bùi Kim Tùng, 2001. Thuốc kháng sinh, sở Khoa Học Công Nghệ và Môi Trường tỉnh Bà Rịa - Vũng Tàu, 225 trang. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
6. Bùi Quang Tề, 2006. Bệnh học thủy sản. Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I. NXB nông nghiệp. 439 trang.
7. Bùi Thị Tho, 2003. Thuốc Kháng sinh và nguyên tắc sử dụng trong chăn nuôi. Nhà xuất bản Hà Nội, 3023 trang.
8. Châu Hồng Thúy, 2008. Khảo sát tình hình xuất hiện bệnh mủ gan do vi khuẩn Edwarsiella ictaluri trên cá tra nuôi thâm canh ở tỉnh Trà Vinh. Luận văn cao học 2008, Khoa Thủy Sản, Đại Học Cần Thơ, 75 trang. 9. Clinical and Laboratory Standards Institure (CLSI), 2006a. Performance
standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests of bacteria isolate from aquatic animals; approve standard, third edition, M31-A3. Clinical and Laboratory Standards Institure, Wayne, NJ.
10.Clinical and Laboratory Standards Institure (CLSI), 2006b. Methods for broth dilution susceptibility testing of bacteria isolate from aquatic animals; informational supplement, M49-A. Clinical and Laboratory Standards Institure, Wayne, NJ.
11.Crumlish, M., Thành, P. C., Koesling, J., Tung, V., T. and Gravningen, K., 2006. Antibiotic sensitivity profles for bacteria from natural outbreaks of
Edwardsiellosis and motile Aeromonas septicaemia in Vietnamese
Pangasius hypophthalmus. www.pharmaq.no/Posters/DAAVI_2008- _poster.
12.Crumlish, M., Tu Thanh Dung, J.F. Turnbull, Nguyen Thi Nhu Ngoc, and H.W. Fugerson, 2002. Indentification of E. ictaluri from diseased freshwater catfish, Pangasius hypophthalmus cultured in the Mekong delta Vietnam, 25, p.733-736.
13.Depaola, A., James T. Peeler and Gary E. Rodrick., 1995. Effect of Oxytetraxycline-Medicated Feed on Antibiotic Resistance of Gram-
Negative Bacteria in Catfish Ponds. Applied and Environmental Microbiology, June 1995, p. 2335-2340.
14.Depaola, A., Pauline A. Flynn, R. Merrill McPhearson and Stuart B. Levy, 1988. Phenotypic and Genotypic Characterization of Tetracycline and Oxytetraxycline Resistance Aeromonas hydrophila from Cultured Channel Catfish (Ictalurus punctatus) and their Environments. Applied and Environmental Microbiology, July 1988, p. 1861-1863.
15.Eleonor, T.. A and Leobert D. dela pena, 2001. Antibiotic Resistance of bacteria from shrimp ponds. Aquculture 195 (2001) p. 193-204
16.Frerichs. R. M and R.F. Millar, 1993. Mannual for the isolate and indentification of fish bacterial pathogent. Institure of aquaculture, University of Sterling, Scotland. 107 pp.
17.Fugerson H.W., et al., 2001. Bacillary necrosis in farmed Pangasius hypophthalmus (Sauvage) from the Mekong Delta, VietNam. Journal of fish Disease, 2001, p. 509-513.
18.Furones .M.D.,2001. Sampling for antimicrobial sensitivity testing: a practical consideration. Aquacuture 169 (2001). 303-309.
19.Hatha1. A.M. and G. Vivekanandan, 2005. Antibiotic resistance of aeromonas hydrophila from farmed fish and wild caught fish. Antibiotic Resistance in Asian Aquaculture Environments Prooceedings Index (ISBN N° 88-901344-3-7).
20.Hawke J.P., 1979. A bacterium associated with pond cultured channel catfish, Ictalurus punctatus.J. Fish. Res. Board Can. 36: p. 1508 – 1512.
21.Hawke J.P., Durborow R.M., Thune R.L., and Camus A.C., 1998. ESC – Enteric septicemia of catfish. Southern Regional Aquaculture Center. No. 47.
22.Huỳnh Thị Tú, Nguyễn Thanh Phương, Frédéric Silvestre, Caroline Douny, Châu Tài Tảo, Guy Maghuin-Rogister và Patrick Kestemont, 2006. Khảo sát tình hình sử dụng thuốc hóa chất trong nuôi tôm và sự tồn lưu của enroflooxacin và furazonlidone trong tom su (Penaeus monodon). Tạp chí khoa học Đại học Cần Thơ, 2006. trang 70-78.
23.Lê Anh Tuấn, 2008. Nước cho nuôi trồng thủy sản trong chiến lược quy hoạch thủy lợi đa mục tiêu ở Đồng Bằng Sông Cửu Long. Tạp chí khoa học – Đại Học Cần Thơ, trang 205-209.
24.Mai Văn Tài, Tống Hoài Nam, Lý Thị Thanh Loan, phạm Văn Tình…,2004. Điều tra đánh giá hiện trạng các loại thuốc, hóa chất và chế phẩm sinh học dùng trong nuôi trồng thủy sản nhằm đề xuất các giải pháp quản lý. Báo cáo đề tài khoa học, Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản I. 24 trang.
25.Marja-liisa Hänninen, Pekka Oivanen and Varpu Hirvelä-koski, 1997.
26.Matyar F., S. Di·nçer, A. Kaya, and Ö. Çolak, 2004. Prevalence and resistance to antibiotics in Gram negative bacteria isolated from retail fish in Turkey, Annals of Microbiology, 54 (2), p.151-160.
27.Mcnicol. L.A, K. M. S. Aziz, Imdadul Huq, James B. Kaper, Hank A. Lockman,Lt Elaine F. Remmers, William M. Spira, Mary J. Voll, and Rita R. Colwell, 1980. Isolation of Drug-Resistant Aeromonas hydrophila from Aquatic Environments. Antimicrobial Agents And Chemotherapy, Mar. 1980, P. 477-483
28.Miranda Claudio D., Corinna Kehrenberg, Catherine Ulep, Stefan Schwarz, and Marilyn C. Roberts., 2003. Diversity of Tetracycline Resistance Genes in Bacteria from Chilean Salmon Farms. Agents and chemotherapy, Mar. 2003, p. 883–888
29.Mohamed Nawaz, Kindon Sung, Saeed A. Khan, Ashraf A. Khan, and Roger Steele, 2006. Biochemical and Molecular Characterization of Tetracycline-Resistance Aeromonas veronii Isolates from Catfish. Applied and Environmental Microbiology, Oct 2006, p. 6461-6466.
30.Nguyễn Chính, 2005. Đánh giá tình hình sử dụng thuốc kháng sinh trong nuôi cá tra Pangasianodon hypophthamus thâm canh tại An Giang và Can Thơ Luận văn cao học 2005, Khoa Thủy Sản, Đại Học Cần Thơ. 75 trang. 31.Nguyễn Hữu Thịnh và Trương Thanh Loan., 2007. Phân lập và khảo sát
đặc điểm kháng sinh của Edwardsiella ictaluri gây bệnh gan thận mủ trên cá tra (Pangasius hypophthamus) nuôi thâm canh. Tạp chí Khoa Học Kỹ Thuật Nông Lâm Nghiệp số 1&2/2007. Trang 175-179.
32.Nguyễn Quốc Thịnh, Từ Thanh Dung và Fugerson H.W, 2004. Nghiên Cứu mô bệnh học cá tra (Pangasius hypophthalmus) bị bệnh trắng gan, tạp chí khoa học – Đại Học Cần Thơ 2004. trang 120-125. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
33.Nguyễn Tấn Duy Phong, 2008. Điều tra hiện trạng nuôi, bệnh và tình hình sử dụng thuốc hóa chất trong nuôi thâm canh cá tra ao (Pangasianodon hypophthamu) Luận văn đại học 2008, Khoa Thủy Sản, Đại Học Cần Thơ, 84 trang.
34.Nguyễn Thanh Phương, Đặng Thị Hoàng Oanh, Từ Thanh Dung, và Lê Xuân Sinh, 2005. Bacterial Resistance to Antimicrobials Use in Shrimp and Fish Farms in the Mekong delta, Vietnam. Journal: Proceeding of the international workshop on: Antibiotic Resistance in Asian Aquaculture Environments.
35.Pender J. and E.E. Stobberingh., 2007. Antibiotic Resistaceof motile Aeromonads in indoor catfish and farms in the southern part of the Nethelands. International journal of Antimicrobial Agents, March 2008, p.261-265.
36.Phạm Minh Thành, 2008. Giáo trình sản xuất giống cá nước ngọt, Khoa Thủy Sản- Trường Đại Học Cần Thơ.
37.Popovic T.N. , R. Coz-Rakovac, I. Strunjak-Perovic, 2007. Commercial phenotypic tests (API 20E) in diagnosis of fish bacteria: a review. Veterinarni Medicina, 52, 2007 (2 p): 49–53.
38.Prescott, J.F., 2000. Antimicrobial drug resistane and its epidemiology. In Antimicrobial therapy in veterinary medicine. Lowa State University press/Ame pp 27-48 (796 p)
39.Samira Sarter, Hoang Nam Kha Nguyen, Le Thanh Hung, Jérôme Lazard, and Didier montet., 2007. Antibiotic Resistace in Gram-negative bacteria isolated from farmed catfish. Food Control 18 (2007) p.1391-1396
40.Stock, I., and Bernd Wiedemann, 2001. Natural Antibiotic susceptibilities of Edwardsiella tarda, E. ictaluri and E. hoshinac. Antibiomicrobial Agenrs and chemotherapy, Aug, 2001, P.2245-2255
41.Tangtrongpiros,. J, 2005. Antibiotic Resistance Problem in Thailand. Antibiotic Resistance in Asian Aquaculture Environments Prooceedings Index (ISBN N° 88-901344-3-7).
42.Trần Anh Dũng, 2005. Khảo sát tác nhân gây bệnh trong nuôi cá tra
Pangasianodon hypophthalmus thâm canh ở An Giang. Luận văn cao học 2005, Khoa Thủy Sản, Đại Học Cần Thơ, 66 trang.
43.Từ Thanh Dung, 2008. Bài giảng Bệnh Vi khuẩn Trên Động Vật Thủy Sinh. Khoa Thủy Sản- Trường Đại Học Cần Thơ.
44.Tu Thanh Dung, Freddy Haesebrouck, Nguyen Anh Tuan, Patrick sorgeloos, Margo Baele, and Annemie Decostere, 2008. Antimicrobial susceptibility pattern of Edwarsiella ictaluri isolate from natural outbreaks of bacillary necrosis of Pangasianodon hypophthalmus in Vietnam. Microbial Drug Resistance. December 2008, 14(4) p: 311-316.
45.Từ Thanh Dung, M. Cramlish, H.W. Fugerson, Nguyễn Thị Như Ngọc, Nguyễn Quốc Thịnh và Đặng Thị Mai Thy., 2004. Xác định vi khuẩn gây bệnh trắng gan trên cá tra (Pangasius hypophthalmus) nuôi thâm canh ở Đồng Bằng Sông Cửu Long. Tạp chí Khoa Học Đại Học Cần Thơ. Trang 137-142.
46.Võ Văn Ninh, 2001. Kháng sinh trong thú y. Nhà Xuất Bản Trẻ, 2001. 141 trang.
47.Waltman W.D. and E.B. Shotts, 1986. Antibiomicrobial susceptibility of
Edwardsiella ictaluri, Journal of U’ildife Disrasrs.21 (21.1986),pp173- 177.
Các trang wedsite:
www.fistenest.gov.vn cập nhật ngày 31/10/2008
PHỤ LỤC Phụ lục 1:
PHIẾU THU THẬP THÔNG TIN VỀ TÌNH HÌNH BỆNH TRÊN CÁ TRA NUÔI
Thông Tin Chung
Họ và tên chủ hộ (người được phỏng vấn): ...
Địa chỉ: ...
Số điện thoại: ...
Diện tích nuôi: ...
Độ sâu: ...
Số ao nuôi: ...
Năm bắt đầu nuôi cá (kinh nghiệm): ...
Mô hình nuôi: ... (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Số vụ nuôi/năm: ...
Thông Tin Về Kỹ Thuật Nuôi Cải tạo ao: ...
Hóa chất sử dụng cải tạo, liều lượng: ...
Nguồn con giống: ...
Mật độ thả (con/m2 ): ...
Mùa vụ thả: ...
Kích cỡ con giống lúc thả: ...
Xử lý con giống khi thả: ...
...
Loại thức ăn: ...
Cách cho ăn: ...
Số lần cho ăn: ...
Quản lý các yếu tố môi trường: ...
... Nguồn nước: ... Thay nước (lần/tháng): ... Các biện pháp xử lý khác: ... ... Tình hình bệnh
Các bệnh xuất hiện ở các vụ nuôi trước: ...
Bệnh xuất hiện ở vụ nuôi gần đây nhất: ...
Cách xử lý: ...
...
Các bệnh thường gặp Bệnh do ký sinh trùng: Loại ký sinh hay dấu hiệu bệnh: ...
...
...
Giai đoạn cá mắc bệnh: ...
Mùa vụ thường xảy ra: ...
Mức độ thiệt hại: ...
...
Bệnh do vi khuẩn Loại vi khuẩn hay dấu hiệu bệnh: ...
...
...
Giai đoạn cá mắc bệnh: ...
Mùa vụ thường xảy ra: ... (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Mức độ thiệt hại: ...
...
Bệnh khác Loại bệnh hay dấu hiệu bệnh: ...
...
...
Giai đoạn cá mắc bệnh: ...
Mùa vụ thường xảy ra: ...
Mức độ thiệt hại: ...
...
Xử Lý Bệnh Điều chỉnh môi trường: ...
Điều chỉnh thức ăn: ...
Người (cơ quan) tư vấn dùng thuốc/hóa chất: ...
Loại thuốc/hóa chất: ... Liều lượng: ...
Thời gian điều trị: ... Hiệu quả: ...
Loại thuốc/hóa chất: ... Liều lượng: ...
Thời gian điều trị: ... Hiệu quả: ...
Chủ hộ Người thu thập thông tin ……….. ………
Phụ lục 2:
PHIẾU THU MẪU CÁ TRA BỆNH
Số TT:…….
Ngày thu mẫu: ...
Họ và tên người nuôi: ...
Địa chỉ: ...
Điện thoại: ...
Loài cá: ...
Tuổi hay cỡ cá: ...
Trọng lượng (g): ...
Chiều dài (cm): ... Chiều Cao (cm): ...
Kích thước ao: Dài (m): ... Rộng (m): ... Sâu (m): ...
Kích thước bè: Dài (m): ... Rộng (m): ... Sâu (m): ... (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Số lượng cá thả trong ao hay bè: ...
Mật độ cá thả (con/m2, con/m3): ...
Ngày thả cá: ...
Nguồn giống: ...
Vệ sinh, cải tạo ao/bè (có/không): ...
Hóa chất đã sử dụng, liều lượng:...
Vôi: ...
Thuốc tím: ...
Các loại khác: ...
...
Loại thức ăn: ...
Ngày mua thức ăn: ...
Thức ăn tươi sống: ...
% thức ăn/trọng lượng cơ thể: ...
Tần số cho ăn: ...
Thức ăn chế biến: ...
% thức ăn/trọng lượng cơ thể: ...
Tần số cho ăn: ...
Nguồn nước: ...
Các chỉ tiêu môi trường: ...
pH: ... NH4+: ... Độ kiềm: ...
Màu nước trong ao hay bè: ...
Có thay nước hay không: ...
Thời giant hay nước: ...
Ngày xuất hiện bệnh: ...
Số cá chết hàng ngày: Tăng/giảm: ...
Dấu hiệu bệnh lý: ...
v Bên ngoài: Hoạt động bơi lội: ...
Màu sắc cơ thể: ...
Vết thương trên da: ... (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tập tính bắt mồi (bình thường, giảm, bỏ ăn) (%): ...
Hoạt động của mang: ...
Triệu chứng khác: ...
...
...
v Bên trong: Có dịch nhầy trong xoang cơ thể: ...
Có dịch nhầy trong ruột: ...
Màu sắc và hình dạng của gan, thận, tỳ tạng: ...
Màu sắc và hình dạng các cơ quan khác: ...
Triệu chứng khác: ...
...
...
Ngày bắt đầu dung thuốc: ...
Các loại thuốc đã sử dụng, liều lượng: ...
Loại thuốc sử dụng có hiệu quả không: ...
Hướng chẩn đoán: ...
Đề nghị: ... Tên người thu mẫu
Phụ lục 3
Các bước thực hiện kiểm tra các chỉ tiêu cơ bản
Ghi nhận các dấu hiệu bên ngoài của cá
Mổ cá ghi nhận biểu hiện của các cơ quan nội tạng.
Phân lập vi khuẩn từ gan, thận, tỳ tạng lên môi trường thạch TSA. Áp dụng các biện pháp vô trùng để tránh trường hợp bị tạp nhiễm.
Ủ các đĩa môi trường ở nhiệt độ 28-30oC. Sau 18-24 giờ quan sát và ghi nhận hình thái của khuẩn lạc (48 giờ với nhóm Edwardsiella). Tiếp tục tách ròng, theo dõi để đạt đĩa cấy thuần. Sau đó tiến hành test các chỉ tiêu cơ bản:
v Nhuộm Gram:
Cho một giọt nước muối sinh lý lên lame.
Dùng que cấy triệt trùng lấy một ít khuẩn lạc trãi đều lên lame. Để lame khô tự nhiên.
Hơ lướt lame lên ngọn đèn cồn, để cố địnhvi khuẩn, để nguội. Nhuộm Crystal violet (dd1) khoảng 1 phút, rữa lame bằng nước. Nhuộm iodine (dd2) trong 1 phút, rửa lame bằng nước.
Rửa lame bằng dung dịch alcohol/acetone (dd3) từ 2-3 giây. Rửa lame lại bằng nước sạch.
Nhuộm safranin (dd4) khoảng 2 phút, rửa lại bằng nước sạch và để khô. Quan sát lame trên kính hiển vi quang học (40X và 100X)
Vi khuẩn Gram (+): màu xanh / tím. Vi khuẩn Gram (-): màu hồng v Tính di động: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cho Vaseline lên 4 góc của lamelle và đặt ngữa lamelle lên bàn. Dung pipet tiệt trùng nhỏ một giọt nước muối sinh lý lên lamelle.
Tiệt trùng que cấy, lấy một ít khuẩn lạc hòa tan vào giọt nước muối trên lamelle.
Dùng lame đặt nhẹ nhàng lên lamelle sao cho lame không chạm vào giọt nước muối sinh lý chứa vi khuẩn.
Cẩn thận lật nhanh lame để giọt nước được treo ngược trên lamelle
Đặt lame lên kính hiển vi, quan sát tính di động của vi khuẩn ở vật kính 40X v Phản ứng Oxidase