2.5 .Phương pháp trong thí nghiệm in vivo
2.5.1 .Phương pháp đo đường huyết cấp tính trên động vật thí nghiệm
Ban đầu chuột được cho nhịn ăn trong vòng 16 giờ (cung cấp nước đầy đủ) trước khi tiến hành thí nghiệm đo đường huyết. Thí nghiệm đo đường huyết cấp tính nhằm xác định sự ảnh hưởng của các thành phần tinh bột đến sự chuyển hóa glucose trong máu. Các thí nghiệm đo chỉ số đường huyết bao gồm hai thí nghiệm:
1) Thí nghiệm đo độ tiêu hóa của tinh bột bắp thơ (H0): mẫu cho ăn là 0,5 ml dung dịch tinh bột bắp đã được hồ hóa hồn tồn (7,5% w/v).
29
2) Thí nghiệm đo độ tiêu hóa của tinh bột bắp đã biến tính (H5A): mẫu cho ăn là 0,5 ml dung dịch tinh bột bắp đã biến tính được hồ hóa hồn tồn (7,5% w/v). Dựng đường chuẩn bằng cách: chuột được cho ăn 0,5 ml dung dịch glucose (7,5%) (Sang Ick Shin, 2007). Đường huyết cấp tính của các nhóm chuột thí nghiệm được đo trước và sau khi tiến hành thí nghiệm ni trong vịng 6 tuần. Nồng độ glucose trong máu được đo bằng máy BeneCheck (Hãng General Life Biotechnology, Đài Loan), phạm vi đo (10-600mg/l hoặc 0,6 đến 33,3 mmol/l).
Cách tiến hành:
Dung dịch được đưa vào dạ dày bằng cách sử dụng dụng cụ bơm đồ uống chuyên dụng như Hình 2.1. Mẫu máu được lấy ở tĩnh mạch đuôi mỗi con chuột vào lúc 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180 và 240 phút. Để quá trình lấy máu diễn ra dễ dàng, chuột được đặt trong ống/hộp nhằm hạn chế sự di chuyển như Hình 2.2. Tuy nhiên, việc sử dụng các ống/hộp tối màu, hạn chế tầm nhìn của chuột, giúp chúng giảm căng thăng và đau đớn. Trước khi lấy máu, dụng cụ lấy máu (kim tiêm) và đuôi chuột cần được khử trùng bởi cồn y tế. Máu được lấy ở gần cuối đuôi, xác định tĩnh mạch rồi thực hiện quá trình rút máu, đẩy nhẹ nhàng để máu đi ra ngoài. Chuột được cầm máu bằng cồn y tế và đưa về chuồng (Rozman, 2015), (NC3Rs)
30
Hình 2.5. Hộp đặt chuột nhằm hạn chế sự di chuyển (Rozman, 2015)
Hình 2.6. Kĩ thuật lấy máu đi (Rozman, 2015) 2.5.2.Phương pháp tính chỉ số đường huyết thực phẩm (GI) 2.5.2.Phương pháp tính chỉ số đường huyết thực phẩm (GI)
Tính tổng năng lượng trong thử nghiệm đo độ tiêu hóa in vivo
Tổng năng lượng thu được sau 240 phút chuột tiêu thụ mẫu glucose (7,5% w/v) được tính theo cơng thức: Eglucose = 4 × G (kcal) (2.1).
Trong đó: 4 là hệ số Atwater (kcal/g) tương ứng 1 g glucose khi được tiêu hóa sẽ giải phóng 4 kcal (Stipanuk & Caudill, 2013).
(G) là khối lượng glucose mà chuột tiêu thụ.
+ Tổng năng lượng thu được sau 240 phút chuột tiêu thụ mẫu dung dịch tinh bột H0 được hồ hóa hồn tồn được tính theo cơng thức:
31 Trong đó:
SH0 (đvdt) là tổng diện tích vùng ABC bên dưới đường cong của mẫu dung dịch tinh bột H0 (7,5% w/v) đã được hồ hóa (0 – 240 phút).
Sglucose (đvdt) là tổng diện tích vùng ABC bên dưới đường cong của mẫu glucose
(7,5% w/v).
+ Tổng năng lượng thu được sau 240 phút chuột tiêu thụ mẫu dung dịch tinh bột H5A (7,5% w/v) đã được hồ hóa được tính theo cơng thức:
(Kcal) (2.3)
Trong đó:
SH5A (đvdt) là tổng diện tích vùng ABC bên dưới đường cong của mẫu dung dịch tinh bột H5A (7,5% w/v) đã được hồ hóa (0 – 240 phút).
Hình 2.7. Hình minh họa cách tính diện tích năng lượng
Sử dụng phần mềm Origin 8.5.1 để tính diện tích các vùng trên.
Sau khi tính được các phần diện tích giới hạn bởi các đường cong nồng độ glucose máu trong khoảng 0-240 phút, sau đó áp dụng vào cơng thức tính GI tương ứng, trong đó GIglucose = 100 (mg/dL)
(2.3) (Wolever T. M., 1986)
(2.4)
32