2.1. Nguyên vật liệu nghiên cứu
2.1.1. Nguyên liệu
Lá cây Sanchezia nobilis Hook.f. (Xăng xê) họ Ơ Rơ (Acanthaceae) được thu hái vào tháng 1/2018 tại Cổ Lễ, Trực Ninh, Nam Định, được phơi sấy, bảo quản trong túi nilon kín, để tiến hành các nghiên cứu về thành phần hóa học, độc tính và tác dụng sinh học. Mẫu nghiên cứu được giám định tên khoa học bởi Thạc sĩ Nguyễn Quỳnh Nga, Viện Dược Liệu, Bộ Y tế (Phiếu giám định ngày 28/03/2018 của Viện Dược liệu - Phụ lục 1). Mẫu dược liệu được lưu tại phòng tiêu bản, Khoa Tài Nguyên Cây Thuốc, Viện Dược liệu (số hiệu DL-150118) và được lưu tại Trường ĐH Y Dược, Đại Học Quốc Gia Hà Nội với số hiệu 190DV18 SMP-VNU.
2.1.2. Hóa chất – dụng cụ
*Hóa chất, dụng cụ sử dụng trong nghiên cứu thực vật, hóa học
-Dung môi được sử dụng cho quá trình chiết là các dung môi công nghiệp được sử dụng mà không cần tinh chế, dung môi sử dụng cho phương pháp sắc kí cột là các
dung mơi cơng nghiệp được cất lại trước khi sử dụng.
- Dung môi sử dụng cho quá trình tinh chế bằng phương pháp HPLC là các dung môi của hãng Merck đạt tiêu chuẩn HPLC. Các hóa chất và thuốc thử đạt tiêu chuẩn phân tích theo quy định của Dược điển Việt Nam V.
-Kính lúp soi nổi: Krussoptroni (Đức).
-Máy ảnh kỹ thuật số Canon (Nhật Bản).
-Dụng cụ cắt vi phẫu cầm tay.
-Sắc ký bản mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng trắng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1.05715) và silica gel 60 RP-18 F₂₅₄s 20x20 cm của Merck.
-Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là silica gel pha thường của Merck kích thước silica gel 60 (40-63 µm), Sephadex LH-20 (Sigma–Aldrich, Hoa Kỳ).
-Sắc kí cột pha đảo được tiến hành với chất hấp phụ YMC RP- 18 (Fuji Silysia Chemical Ltd, Kasugai, Aichi, Nhật Bản).
- Sắc kí lỏng điều chế (Preparative High-performance liquid chromatography)
được triển khai trên hệ thống Shimadzu Preparative High-performance liquid
chromatography (LC-20AP pump, đầu dò SPD-M20A PDA, cột HS C18 column (cỡ hạt 10 μm, 25 cm x 21,2 mm), tại Phịng Thí Nghiệm Trung Tâm Viện Dược Liệu, Bộ Y Tế.
- Điểm nóng chảy được đo trên máy Buchi B-545 (Thụy sĩ), tại Phòng Thí Nghiệm Trung Tâm Viện Dược Liệu, Bộ Y Tế.
- Góc quay cực ([α]D) được đo trên máy JASCO DIP-1000 KUY polarimeter. tại Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
-Phổ khối phân giải cao (HR-ESI-MS) được đo trên máy Agilent 1290 LC (Q- TOF) 6530 (Agilent Ted của Mỹ) tại Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
-Phổ khối phun mù điện tử ESI-MS được đo trên máy LC/MS-8045 Shimadzu (Nhật bản) tại Viện Hóa Học, Viện Hàn Lâm Khoa Học Việt Nam.
- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1D (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) và 2D (HSQC, HMBC, COSY, NOESY) được đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer và máy Bruker Avance NEO 600 NMR spectrometers (Thụy sĩ) tại Viện Hoá học, Viện Hàn Lâm Khoa học và Khoa Hóa Học Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Đại Học Quốc Gia Hà Nội.
- Dung môi được sử dụng để do NMR là DMSO-d6, MeOH-d4, CDCl3 và aceton-d6, sử dụng TMS làm chất nội chuẩn.
*Hóa chất, thuốc và dụng cụ dùng trong đánh giá tác dụng chống viêm loét dạ dày tá tràng tại Trường ĐH Y Hà Nội
- Ranitidin viên nén 300 mg (Domesco – Việt Nam).
- Nước muối sinh lý NaCl 0,9% (HD Pharma – Việt Nam).
- Phenolphtalein, NaOH, Topfer của Merck đạt tiêu chuẩn thí nghiệm.
- Cloral hydrat của Merck đạt tiêu chuẩn thí nghiệm.
- Formaldehyd 5% (TraceCERT®.), các hóa chất làm giải phẫu bệnh.
- Vật tư tiêu hao dùng trong nghiên cứu (bơng, gạc...).
- Bộ dụng cụ phẫu thuật, kính lúp, dụng cụ cho chuột cống uống thuốc.
- Máy đo pH, Burette (SI Analytics (Schott) - Đức) .
- Chỉ khâu loại 4.0, dao mổ.
- Máy chụp hình (Canon, Nhật Bản).
- Kính hiển vi đọc giải phẫu bệnh.
*Hóa chất, dụng cụ dùng trong đánh giá tác dụng giảm đau tại Trường ĐH Y Hà Nội
- Codein phosphat của Viện Kiểm nghiệm Trung ương (Số lô 5020117B)
- Kim chuyên dụng cho chuột nhắt uống thuốc.
- Máy Hot plate model - DS37 của hãng Ugo-Basile (Ý).
- Máy đo phản ứng đau Dynamic Plantar Aesthesiometer 37450 của hãng Ugo-Basile (Ý).
*Hóa chất, dụng cụ dùng trong đánh giá độc tính cấp và độc tính bán trường diễn tại Trường ĐH Y Dược - ĐHQGHN và Trường ĐH Y Hà Nội
- Kít định lượng các enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần, và creatinin của hãng Erba (Đức).
-Các dung dịch xét nghiệm máu của hãng Horiba Medical (Pháp).
-Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học.
-Kim chuyên dụng cho chuột nhắt và chuột cống uống thuốc.
-Vật tư tiêu hao dùng trong nghiên cứu (bơng, gạc,...).
-Máy chụp hình (Canon, Nhật Bản)
-Kính hiển vi đọc giải phẫu bệnh
2.1.3. Động vật thí nghiệm
Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 20 ± 2 g do viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp.
Chuột cống trắng chủng Wistar, cả hai giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 180 – 250 g do trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng – Hà Nội cung cấp.
Động vật thí nghiệm được ni 7 ngày trước khi nghiên cứu và trong suốt thời gian nghiên cứu trong điều kiện phịng thí nghiệm với đầy đủ thức ăn và nước uống tại Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội.