Chƣơng 3 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Kết quả phân tích đa hình kiểu gen TP53
3.2.5. Kết quả phân tích kiểu gen của SNP G360A
Thực hiện phản ứng PCR khuếch đại đoạn gen exon 10 của TP53, có chứa codon 360 để phân tích. Sản phẩm khuếch đại tương ứng có kích thước 433bp, được kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1,5%.
H nh 3.11. H nh ảnh PCR khuếch đại exon 10 chứa vùng SNP G360A của gen TP53.
MK: Marker 100-1000bp; (-) nước cất làm chứng âm.
Nhận xét:
Hình ảnh điện di cho thấy, đã khuếch đại được đoạn gen đặc hiệu kích thước 433bp. Sản phẩm PCR sau đó được tinh sạch, giải trình tự bằng máy
ABI-3100 và được phân tích bằng phần mềm CLC Main Workbench. Kết quả giải trình tự được so sánh với trình tự chuẩn của gen TP53 trên GeneBank.
433bp
MK (-) K1 K2 K3 K4 K5 B1 B2 B3 B4 B5
Hình 3.12. Hình ảnh giải trình tựđại diện các kiểu gen của SNP G360A gen TP53
a) Mẫu đại diện bệnh nhân ung thư gan mã số K4; b) mẫu đại diện cho nhóm chứng mã số B4
Nhận xét:
Hình ảnh giải trình tự cho thấy mẫu bệnh nhân ung thư gan và mẫu chứng đều có kiểu gen G360G (GG), khi so với trình tự gốc. Khơng có sự thay đổi trình tự nucleotid G thành C tại vị trí số 2 của codon 360. Kết quả tương tự khi phân tích ở các đối tượng nghiên cứu khác trong nhóm chứng và nhóm bệnh nhân.
Bảng 3.6. Bảng tổng hợp kiểu gen của các SNP tại codon 21, 34, 36, 47, 72, 217, 360 gen TP53 Thay thế nucleotid của các SNP Kiểu gen đ ng hợp
nguyên thuỷ Kiểu gen dị hợp Kiểu gen đ ng hợp đột biến
n % n % n %
D21D(C>T) C/C C/T T/T 547 100 0 0 0 0 P34P(C>A) C/C C/A A/A
547 100 0 0 0 0 P36P(G>A) G/G G/A A/A
547 100 0 0 0 0 P47S(C>T) C/C (P47P)* C/T (P47S)* T/T (S47S)* 547 100 0 0 0 0 V217M(G>A) G/G (V217V)* G/A (V217M)* A/A (M217M)*
547 100 0 0 0 0 G360A(G>C) G/G (G360G)
* G/C (G360A)* C/C (A360A)* 547 100 0 0 0 0
( )* Kiểu gen theo acid amin được mã hố ở những SNP có thay đổi trình tự
acid amin.
Nhận xét:
Kết quả bảng 3.6 cho thấy, tất cả các SNP này đều khơng xuất hiện trên
nhóm đối tượng nghiên cứu và khơng có liên quan với ung thư tế bào gan
nguyên phát.