Chuột nhắt trắng (Mus musculus) chủng Swiss, thuần chủng, cả hai giống, khỏe mạnh, trọng lƣợng 18 - 22g do Viện Vệ sinh dịch tễ cung cấp.
Thỏ chủng Newzealand White, cả hai giống, khỏe mạnh, trọng lƣợng 1,8 - 2,2 kg do Trung tâm chăn nuôi và cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phƣợng, Hà Nội cung cấp.
Chuột cống trắng chủng Wistar, trọng lƣợng từ 150 - 180g, khoẻ mạnh, cả hai giống và chuột cống trắng đực, trƣởng thành, khoẻ mạnh, trọng lƣợng 200g - 250g của Học viện Quân Y cung cấp.
Động vật thực nghiệm đƣợc nuôi 7 ngày trƣớc khi nghiên cứu và trong suốt thời gian nghiên cứu bằng thức ăn chuẩn dành riêng cho từng loại (do Công ty liên doanh Guyomarc‟h-VCN và Viện Vệ sinh dịch tễtrung ƣơng sản xuất), uống nƣớc tự do.
* Thuốc và hóa chất dùng trong nghiên cứu:
- Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG của hãng ABX - Diagnostics, định lƣợng trên máy Vet abcTM Animal Blood Counter.
- Kit định lƣợng các enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần, creatinin của hãng Hospitex Diagnostics (Italy) và hãng DIALAB GmbH (Áo), định lƣợng trên máy Screen master của hãng Hospitex Diagnostics (Italy).
- Aspégic (DL-lysine acetyl salicylat) gói bột 100mg của hãng Sanofi Aventis (Pháp), methylprednisolon viên nén 4mg của Pfizer. Các hóa chất
carrageenin, formaldehyd, natricloid và các hóa chất khác để nghiên cứu tác dụng chống viêm trên thực nghiệm.
- Testosteron dạng ống 100 mg/1ml, Bisphenol A tinh khiết (Merck - Đức), dầu ô liu. Thuốc chứng dƣơng: Dutasteride viên nén 0,5mg của Glaxo Smith Kline.
- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học.
- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mơ bệnh học, đủ tiêu chuẩn phịng thí nghiệm - Trƣờng Đại học Y Hà Nội.
Nghiên cứu thực nghiệm đƣợc thực hiện tại phịng thí nghiệm của bộ môn Dƣợc lý, Trƣờng Đại học Y Hà Nội.
* Máy móc và dụng cụ phục vụ nghiên cứu:
- Kim đầu tù cho chuột uống, cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml. - Máy xét nghiệm huyết học Vet abcTM Animal Blood Counter
- Máy xét nghiệm sinh hóa Screen - Master của hãng Hospitex Diagnostic, Italy.
- Phù kế Plethysmometer No 7250 của Hãng Ugo - Basile (Italy). - Cân điện tử của Nhật, độ chính xác 0,001 gam.
- Kính hiển vi quang học, tủ sấy.
2.2.2. Nghiên cứu trên lâm sàng
2.2.2.1. Sốlượng bệnh nhân nghiên cứu
Nghiên cứu lâm sàng gồm 72 bệnh nhân đƣợc chẩn đoán là TSLT-TTL theo YHHĐ chia làm 2 nhóm.
Cỡ mẫu tính theo cơng thức dùng cho thử nghiệm lâm sàng của WHO: n1 = n2 = {[Z1 - α/2√[2P(1-P) + Zα√P1(1-P1) + P2(1-P2)]}2/( P1-P2)2 Trong đó: n1: cỡ mẫu nhóm nghiên cứu
Z1 - α/2: Hệ số tin cậy 95% (= 1,96) Zα: Lực mẫu (= 1,645)
P1: Tỷ lệ bệnh nhân nhóm nghiên cứu đạt tốt: ƣớc lƣợng là 85% P2: Tỷ lệ bệnh nhân nhóm đối chứng đạt tốt: ƣớc lƣợng là 65% P = P1 + P2/2
Kết quả tính cỡ mẫu nhóm n1 = n2 = 34 bệnh nhân và trên thực tế đã nghiên cứu lấy mỗi nhóm là 36 bệnh nhân.
2.2.2.2. Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân vào nghiên cứu
Các bệnh nhân đƣợc chẩn đốn là tăng sinh lành tính tuyến tiền liệt, có các tiêu chuẩn sau:
* Theo YHHĐ
- Bệnh nhân có các rối loạn tiểu tiện: + Theo thang điểm IPSS ≥ 8 + Điểm CLCS ≥ 3.
- Thăm trực tràng tuyến tiền liệt to, mềm, nhẵn, ranh giới rõ, khơng đau. - Lƣu lƣợng dịng tiểu < 15ml/giây.
- Siêu âm: + Thể tích TTL tăng: 25cm3 < thể tích TTL < 60cm3. + Thể tích nƣớc tiểu tồn dƣ < 100ml.
- Xét nghiệm ure, creatinin, mức lọc cầu thận bình thƣờng; ALT, AST máu bình thƣờng.
- Xét nghiệm PSA < 4 ng/ml.
* Theo YHCT
- Chọn bệnh nhân có chứng “long bế”, “lâm chứng” và “di niệu” trên lâm sàng qua tứ chẩn: vọng, văn, vấn, thiết.
- Quy nạp các hội chứng bệnh theo bát cƣơng: biểu, lý, hàn, nhiệt, hƣ, thực, âm, dƣơng.
- Phân loại thể bệnh theo YHCT: thể thận khí hƣ, thể khí trệ huyết ứ, thể thấp nhiệt.
Vì bài thuốc nghiên cứu đƣợc xây dựng trên cơ sở lý luận lấy thận khí hƣ làm chủ nên trong nghiên cứu này chúng tôi chọn bệnh nhân thuộc thể thận khí hƣ vào nghiên cứu:
+ Thể thận khí hƣ với các triệu chứng:
- Tiểu nhiều lần, đặc biệt về đêm, tiểu yếu, phải rặn khi đi tiểu, cảm giác đi tiểu không hết.
- Đau lƣng, đau gối, sợ lạnh, chân tay không ấm, ăn ngủ kém. - Lƣỡi nhợt, rêu trắng, mạch trầm nhƣợc.
* Bệnh nhân tự nguyện tham gia nghiên cứu và tuân thủ đúng những yêu cầu của nghiên cứu.
2.2.2.3. Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân
* Theo YHHĐ
- Nghi ngờ ung thƣ tuyến tiền liệt, PSA 4ng/ml hoặc các bệnh lý khác của tuyến tiền liệt.
- Bí đái hồn tồn.
- Bệnh nhân đang có các bệnh cấp tính kèm theo hoặc có các bệnh lý của đƣờng tiết niệu:
+ Suy thận: ure, creatinin máu tăng, mức lọc cầu thận giảm. + Sỏi thận, viêm đƣờng tiết niệu cấp.
* Theo YHCT
- Bệnh nhân thuộc thể khí trệ huyết ứ: tiểu nhỏ giọt hoặc dịng tiểu nhỏ, tiểu khó hoặc đau. Lƣỡi có nhiều điểm ứ huyết, chất lƣỡi tím, mạch sáp.
- Bệnh nhân thuộc thể thấp nhiệt bàng quang: tiểu nhiều lần, đái khó, đái buốt, đái rắt, nƣớc tiểu ít, màu vàng sẫm hoặc đỏ, đục, cảm giác nóng rát niệu đạo, bụng dƣới đầy chƣớng. Tồn thân có thể sốt, đại tiện táo, chất lƣỡi, đỏ rêu lƣỡi vàng, mạch hoạt sác.
* Bệnh nhân khơng tn theo đúng qui trình nghiên cứu. * Bệnh nhân dị ứng với thuốc nghiên cứu.