CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. Các quy trình và kỹ thuật nghiên cứu
2.4.2. Kỹ thuật định lượng dioxin trong sữa
* Quy trình xử lý mẫu và phân tích dioxin trong sữa
51
* Tiến hành
Định lượng dioxin trong mẫu sữa được tiến hành theo quy trình giới thiệu trong tài liệu “Hướng dẫn định lượng nồng độ dioxin trong mẫu sữa” [151].
Mẫu sữa được phân tích dựa theo phương pháp phân tích của tác giả Tawara và Phạm Thế Tài [151],[152]. Sau khi tách thành phần lipid từ 10g sữa mẹ, tiếp tục cho thêm vào 40-80pg của từng đồng đẳng PCDD/PCDF được đánh dấu bằng C13
và sử dụng chúng như là những chất nội chuẩn. Một loạt các bước tách chiết như xà phịng hóa lipid và các cơng đoạn sắc ký qua cột silica gel đa lớp và cột carbon hoạt tính để tách và thu thập các thành phần PCDDs/PSDFs. Mẫu chiết xuất cuối cùng được làm bay hơi hồn tồn bằng khí nitơ, sau đó lại được hịa tan bằng cách thêm 20ml nonane chứa 40pg 13C12-1,2,3,4-TCDD và 13C12-1,2,7,8- TCDF dùng để tính hiệu suất thu hồi. Cuối cùng, việc định lượng các đồng đẳng PCDDs/PCDFs được tiến hành bằng hệ thống sắc ký khí khối phổ độ phân giải cao (GC/HRMS) (GC: HP-6980, Hewlett-Packard, Palo Alto, CA: HRMS: JEOL MS ga-JMS700). Ngoài ra, phương pháp phân tích nhắc lại được sử dụng trong trường hợp số lượng mẫu ít hơn 10g sữa để đảm bảo độ chính xác cao theo phương pháp đã được báo cáo trước đây của tác giả Tawara [151],[152] (Phụ lục 2).
* Kiểm tra chất lượng và đánh giá kết quả
Phân tích dioxin đã được thực hiện ở chế độ rà soát các ion đã được lựa chọn (Selected Ion Monitoring - SIM) ở độ phân giải 10.000. Nồng độ của từng đồng đẳng được chuyển sang độ độc tương đương (TEQ) bằng cách sử dụng bảng đánh giá yếu tố độc tính tương đương (TEFs) của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO 2005). Tổng lượng TEQ cho mỗi mẫu phân tích được tính tốn bằng cách cộng gộp độ độc tương đương TEQ của 17 đồng đằng dioxin đã định lượng [153].
52
Các mẫu dưới ngưỡng phát hiện được gán cho giá trị bằng ½ giới hạn phát hiện để tính tổng lượng TEQ.
Quy trình kiểm sốt chất lượng và đảm bảo chất lượng (QC/QA) được thực hiện theo các hướng dẫn trong tiêu chuẩn công nghiệp Nhật Bản (JIS). Hiệu suất thu hồi thông thường khoảng 60-95% và giới hạn phát hiện được xác định theo tỷ lệ tín hiệu thực cao gấp 3 lần tín hiệu nhiễu (S/N = 3).