CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Nội dung nghiên cứu
2.3.1.1. Phát hiện người lành mang gen bệnh cho các thành viên nữ trong gia đình người bệnh DMD
- Phân tích phả hệ gia đình người bệnh DMD:
Phả hệ gia đình có tiền sử bệnh rõ ràng khi có ít nhất 2 thành viên nam mắc DMD. Người mẹ được xác định là mang gen dị hợp tử bắt buộc khi có một trong các điều kiện sau:
o Có ít nhất hai con trai bị bệnh (hình 2.1c).
o Có một con bị bệnh và một người anh hoặc em trai của người
mẹ bị bệnh (hình 2.1a).
o Có một con bị bệnh và con của chị hoặc em gái mình cũng bị bệnh
(hình 2.1b).
Phả hệ gia đình có tiền sử bệnh không rõ ràng khi trong phả hệ chỉ
có duy nhất một thành viên nam bị bệnh. Mẹ của người bệnh có thể mang gen đột biến hoặc khơng (hình 2.2).
STR Vị trí Mồi xi Mồi ngược
DXS8090 Intron 1 GGGTGAAATTCCATCAAAA ACAAATGCAGATGTACAAAAAATA
DXS9907 Intron 45 CTGTGGTGTAAGGTTCGCTT TAGACTTGACCTCATGGGCT
STR49 Intron 49 CGTTTACCAGCTCAAAATCTCAAC CATATGATACGATTCGTGTTTTGC
DXS1067 Intron 50 TATGTCCTCAGACTATTCAGATGCC CCTCCAGTAACAGATTTGGGTG
STR50 Intron 50 AAGGTTCCTCCAGTAACAGATTTGG TATGCTACATAGTATGTCCTCAGAC
Hình 2.1. Phả hệ có tiền sử bệnh rõ ràng
Hình 2.2. Phả hệ có tiền sử bệnh khơng rõ ràng
- Tách chiết DNA từ mẫu máu của các thành viên nữ trong gia đình
người bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne.
- Xác định người lành mang gen đột biến dị hợp tử bằng kỹ thuật MLPA,
giải trình tự gen.
- Tư vấn di truyền cho các thành viên nữ trong gia đình người bệnh DMD.
2.3.1.2. Chẩn đoán trước sinh bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne bằng kỹ thuật Microsatellite DNA
* Xác định các marker STR dị hợp tử
Xác định các marker STR có tỷ lệ dị hợp tử cao nhất từ 6 marker sử dụng trong nghiên cứu ở bảng 2.1.
* Chẩn đoán trước sinh bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne bằng kỹ thuật
Các thai phụ được chọc hút nước ối để chẩn đoán trước sinh bệnh DMD bằng kỹ thuật Microsatellite DNA và được đối chiếu kết quả bằng kỹ thuật di truyền phân tử khác tuỳ theo dạng đột biến gen dystrophin.
Kỹ thuật nuôi cấy tế bào ối cũng được đồng thời thực hiện trên mẫu ối để chẩn đốn các trường hợp thai có bất thường NST kèm theo.