Nhận xét:
Kết quả 52/85 thành viên được chẩn đoán là người lành mang gen bệnh, chiếm 61%; 33/85 thành viên được xác định không mang gen bệnh, chiếm tỷ lệ 39%.
Bảng 3.1. Tỷ lệ người lành mang gen bệnh ở các bà mẹ và thành viên nữ
Mẹ người bệnh DMD Thành viên nữ khác
Tổng
n Tỷ lệ (%) n Tỷ lệ (%)
Mang gen 41 91,1 11 27,5 52
Không mang gen 4 8,9 29 72,5 33
Tổng 45 100 40 100 85 Người lành mang gen bệnh Người không mang gen bệnh 61% 39%
Nhận xét:
Trong 85 thành viên nữ có 45 bà mẹ có tiền sử sinh con mắc DMD và 40 người không sinh con mắc DMD hoặc chưa sinh con.
Trong 45 bà mẹ có con DMD, xác định được 41 người mang gen bệnh chiếm tỷ lệ 91,2% trong đó có 1 bà mẹ mang gen bệnh ở trạng thái khảm; 4 người không mang gen bệnh chiếm tỷ lệ 8,9%.
Trong 40 thành viên nữ khơng có tiền sử sinh con DMD có 11 người được chẩn đốn là người lành mang bệnh, chiếm tỷ lệ 27,5% và 29 người được chẩn đốn khơng mang gen bệnh, chiếm tỷ lệ 72,5%.
Bảng 3.2. Tỷ lệ người lành mang gen bệnh theo tiền sử gia đình
Gia đình có tiền sử bệnh rõ ràng
Gia đình khơng có tiền sử bệnh rõ ràng
n Tỷ lệ % n Tỷ lệ %
Mang gen bệnh 17 100 24 85,7
Không mang gen bệnh 0 0 4 14.3
Tổng 17 100 28 100
Nhận xét:
Trong 45 bà mẹ có tiền sử sinh con DMD, có 17 người có thuộc các phả hệ gia đình có tiền sử bệnh rõ ràng (phả hệ có ít nhất 2 người mắc DMD), 28 người thuộc các phả hệ gia đình có tiền sử bệnh khơng rõ ràng.
Trong các gia đình có tiền sử bệnh rõ ràng, 17/17 bà mẹ (100%) là người mang gen bệnh. Ở các gia đình có tiền sử bệnh khơng rõ ràng, xác định 24 người lành mang gen bệnh, chiếm tỷ lệ 85,7%; 4 người khơng mang gen bệnh, chiếm tỷ lệ 14,3%.
Hình 3.2. Tỷ lệ các dạng đột biến ở các thành viên nữ
Nhận xét:
Trong 31 dạng đột biến xác định được ở các thành viên nữ, có 20 dạng đột biến xoá đoạn, chiếm tỷ lệ 64,5%; 9 dạng đột biến điểm, chiếm tỷ lệ 29% và 2 dạng đột biến lặp đoạn, chiếm tỷ lệ 6,5%.
Bảng 3.3. Số lượng thành viên nữ được xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật MLPA và giải trình tự gen
Kỹ thuật Người bệnh Thành viên nữ
MLPA 25 66
Giải trình tự gen 10 19
Tổng 35 85
Nhận xét:
Trong 85 thành viên nữ, 66/85 thành viên nữ thuộc gia đình của 25 người bệnh DMD có đột biến xóa đoạn và lặp đoạn. Các thành viên nữ này được tiến hành phân tích tình trạng mang gen đột biến bằng kỹ thuật MLPA; 19/65 thành viên nữ thuộc gia đình của 10 người bệnh DMD có đột biến điểm sẽ được phân tích tình trạng mang gen đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen.
Đột biến xoá đoạn Đột biến lặp đoạn Đột biến điểm 64,5% 29% 6,5%
Bảng 3.4. Tỷ lệ phát hiện người lành mang gen bệnh
Mang gen bệnh Không mang gen bệnh
Tổng n Tỷ lệ (%) n Tỷ lệ (%) MLPA 40 76,9 26 78,8 66 Giải trình tự gen 12 23,1 7 21,2 19 Tổng 52 100 33 100 85 Nhận xét:
Trong 52 thành viên nữ mang gen bệnh, 40 người được xác định là người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật MLPA, chiếm tỷ lệ 76,9%; 12 người được xác định là người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật giải trình tự gen, chiếm tỷ lệ 23,1%.
Trong 33 thành viên nữ không mang gen bệnh, 26 người được xác định là không mang gen bệnh bằng kỹ thuật MLPA, chiếm tỷ lệ 78,8%; 7 người được xác định là không mang gen bệnh bằng kỹ thuật giải trình tự gen, chiếm tỷ lệ 21,2%.
3.1.1. Kết quả xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật MLPA
Kỹ thuật MLPA được áp dụng để xác định người lành mang gen đột biến dị hợp tử trên 66 thành viên nữ của 25 gia đình người bệnh DMD có đột biến xố đoạn và lặp đoạn gen. Tỷ lệ xác định người lành mang gen được mô tả ở bảng 3.5.
Bảng 3.5. Kết quả xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật MLPA
n Tỷ lệ (%)
Mang gen 40 60,6
Không mang gen 26 39,4
Tổng 66 100
Nhận xét:
Kết quả trên cho thấy đã xác định được 40 (60,6%) người có mang gen đột biến dị hợp tử (người lành mang gen bệnh) và 26 (39,4%) người không
Bảng 3.6. Các dạng đột biến được phát hiện trên người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật MLPA
STT Dạng đột
biến ở BN Exon Vị trí đột biến
Số thành viên nữ mang gen Số thành viên nữ không mang gen 1 Xoá đoạn 3-7 Vùng 5’ tận 1 0 2 Xoá đoạn 3-13 Vùng 5’ tận 3 1 3 Xoá đoạn 4-6 Vùng 5’ tận 1 0 4 Xoá đoạn 8-12 Vùng 5’ tận 1 0 5 Xoá đoạn 8-13 Vùng 5’ tận 1 3 6 Xoá đoạn 12-13 Vùng 5’ tận 10 3 7 Xoá đoạn 12-29 Vùng 5’ tận 1 0 8 Xoá đoạn 7-43 Vùng 5’ tận đến vùng trung tâm 1 0 9 Xoá đoạn 11-39 Vùng 5’ tận đến vùng trung tâm 5 6 10 Xoá đoạn 19-52 Vùng 5’ tận đến vùng trung tâm 1 0
11 Xoá đoạn 35-43 Vùng trung tâm 1 0
12 Xoá đoạn 44 Vùng trung tâm 1 0
13 Xoá đoạn 44 Vùng trung tâm 4 8
14 Xoá đoạn 44 Vùng trung tâm 1 0
15 Xoá đoạn 45-47 Vùng trung tâm 1 0 16 Xoá đoạn 48-50 Vùng trung tâm 1 0 17 Xoá đoạn 48-50 Vùng trung tâm 1 0 18 Xoá đoạn 48-50 Vùng trung tâm 1 0 19 Xoá đoạn 49-52 Vùng trung tâm 1 0
20 Xoá đoạn 51 Vùng trung tâm 1 0
21 Xoá đoạn 51-53 Vùng trung tâm 0 1 22 Xoá đoạn 45-51 Vùng trung tâm 0 3 23 Xoá đoạn 47-50 Vùng trung tâm 0 1 24 Lặp đoạn 14-43 Vùng 5’ tận đến
vùng trung tâm 1 0
25 Lặp đoạn 44 Vùng trung tâm 1 0
Nhận xét:
Có 22 dạng đột biến xoá đoạn và lặp đoạn xác định được ở 40 thành viên nữ là người lành mang gen bệnh. 20/22 dạng đột biến là xoá đoạn chiếm tỷ lệ 90,9%; 2/22 dạng đột biến là lặp đoạn chiếm tỷ lệ 9,1%. Các đột biến có thể là xố đoạn hoặc lặp đoạn một hay nhiều exon trên gen dystrophin tập trung ở vùng 5’ tận và vùng trung tâm. Có một số đột biến xố đoạn và lặp đoạn lớn kéo dài từ vùng 5’ tận đến vùng trung tâm gen dystrophin.
3.1.1.1. Phân tích phả hệ gia đình có tiền sử bệnh rõ ràng
* Kết quả xác định người lành mang gen bệnh ở gia đình người bệnh DMD có đột biến xố đoạn ở vùng 5’ tận
Gia đình người bệnh D.10 có 7 thành viên nam được chẩn đoán mắc bệnh DMD. Kết quả MLPA phát hiện thấy người bệnh có đột biến xoá đoạn exon 11-15 ở vùng 5’tận của gen dystrophin. Tiến hành lập phả hệ gia đình và xác định người lành mang gen bệnh cho các thành viên nữ trong gia đình (14 thành viên).