Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.5. MEN TRONG CHOLESTEATOMA VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN
1.5.3 Hố mơ miễn dịch phát hiện men trong khối cholesteatoma
Phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch nhằm phát hiện các enzyme thủy phân protein chất căn bản ở bệnh cholesteatoma tai giữa là một phương pháp quan trọng giúp các nhà lâm sàng tai mũi họng hiểu được cơ chế hủy xương và đưa ra các giải pháp ngăn chặn các biến chứng của bệnh. Để xác định sự hiện diện của Collagenase trong mô, người ta sử dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch với kháng thể đơn dịng kháng Collagenase được làm từ chuột [73].
Hố mơ miễn dịch là kỹ thuật kết hợp của hai chuyên ngành miễn dịch và mơ học hay đó là việc ứng dụng các ngun lý và các kỹ thuật của miễn dịch học vào việc nghiên cứu tế bào và mơ. Kỹ thuật hố mơ miễn dịch được sử dụng không chỉ để xác định xem một mơ có biểu hiện (hay khơng biểu hiện) một kháng ngun riêng biệt, mà cịn xác định tình trạng kháng nguyên của các tế bào riêng biệt trong mơ đó và vị trí của các kháng ngun đó trong cấu trúc tế bào. Hố mơ miễn dịch giúp cho việc chẩn đoán phân biệt về bản chất và nguồn gốc của tế bào, bản chất, các chất hiện diện trong một mô thông qua sự hiện diện của một số kháng ngun đặc hiệu. Hố mơ miễn dịch cịn giúp cho việc xác định các dấu hiệu của thành phần tế bào ở mức sinh học phân tử, thơng qua đó người ta có thể tìm thấy mối liên quan giữa tình trạng của tế bào và mơ với các rối loạn về q trình phát triển như quá trình phát sinh, phát triển của mô ung thư, các tổn thương viêm, các bệnh lý tim mạch (các yếu tố phát triển bệnh, di căn…) hoặc các rối loạn khác như rối loạn chuyển hoá, rối loạn do viêm, nhiễm trùng gây ra. Phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch nhằm phát hiện các enzyme thủy phân protein chất căn bản ở bệnh cholesteatoma tai giữa là một phương pháp quan trọng giúp các nhà lâm sàng Tai mũi họng hiểu được cơ chế hủy xương và đưa ra các giải pháp ngăn chặn các biến chứng của bệnh.
Sơ đồ ngun lý nhuộm hóa mơ miễn dịch. Đánh giá kết quả: (Sử dụng chứng dương của nhà sản xuất).
+ Dương tính: Sự hiện diện của collagenase hoặc các MMP trong mô (chất căn bản) ở mơ đệm lớp biểu bì của nang cholesteatoma sẽ được hiển thị bằng màu vàng nâu.
+ Âm tính: Chất căn bản khơng bắt màu ngoài nhân tế bào của lớp biểu mơ vách nang bắt màu xanh tím của Hematoxylin.
Collagenase dương tính (màu nâu) trong mơ đệm biểu mơ vách nang
cholesteatoma x 100.
Collagenase âm tính (khơng có màu nâu) trong mơ đệm biểu mơ vách nang
Trong các phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch, phương pháp Avidin-Biotin-Complex (ABC) được dùng phổ biến nhất. Sử dụng phương pháp ABC, kháng thể thứ 2 phải được gắn với biotin. Hệ thống phóng đại và bắt màu gồm một enzyme và chất màu. Enzyme được sử dụng rộng rãi là peroxidase được chiết xuất từ rễ cây cải ngựa hoặc alkaline phosphatase (AP) chiết xuất từ vi khuẩn Ecoli. Enzyme này được gắn với KT thứ 2 (gắn trực tiếp hoặc bằng cầu nối hố học như gắn enzyme với kháng thể thơng qua cầu nối avidin và biotin). Chất hiển thị màu hay được sử dụng là hợp chất diaminobenzidin (DAB) vì nó tạo ra màu nâu khá bền vững. Nếu phản ứng dương tính, vùng có kháng nguyên sẽ bắt màu nâu. Căn cứ vào cường độ bắt màu này, người ta có thể biết sự hiện diện của kháng nguyên cần tìm (hay một chất nào đó cần tìm) là nhiều hay ít [73].