Chương 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. Phương tiện nghiên cứu
2.4.1. Dụng cụ, trang thiết bị
- Ống lấy máu chống đông EDTA. - Pipet, đầu côn các loại.
- Ống Eppendorf 1,5 ml và ống Facol.
- Máy Gene Amp PCR System 9700 (USA). - Tủ lạnh sâu: -30°C; -80°C (SANYO). - Máy điện di: Mupid (Nhật Bản).
- Máy soi gel và chụp ảnh tự động: Chemidoc EQ-Bio-Rad (USA). - Máy ly tâm lạnh Beckman và máy ly tâm đểbàn Eppendorf (Đức). - Lị vi sóng (Samsung).
- Máy đọc trình tự gen ABI Prism 3100 Genetic Analyzer (USA). - Tủấm.
2.4.2. Hố chất
* Hóa chất dùng để tách chiết DNA (Promega, Madison, WI, USA):
- Dung dịch Lysis buffer. - Dung dịch K.
- Dung dịch SDS 10%. - Proteinase K (10mg/mL).
- Dung dịch phenol: chloroform: isoamyl với tỷ lệ 25: 24: 1 - Dung dịch chloroform: isoamyl với tỷ lệ 24 : 1
- Ethanol 100% và ethanol 70%. - Sodium acetate 3M, pH=5,2.
- Dung dịch hòa tan DNA để bảo quản.
* Hoá chất để thực hiện kỹ thuật PCR (Invitrogen, Carlsbad, California, USA):
- 10x buffer
- Gold Taq chứa: 4 loại dNTP, Taq polymerase, MgCl2. Mồi xuôi và mồi ngược:
HV1-F: 5’- CTC CAC CAT TAG CAC CCA AAG C -3’ HV1-R: 5’- CCT GAA GTA GGA ACC AGA TG -3’ HV2-F: 5’- GGT CTA TCA CCC TAT TAA CCA C -3’ HV2-R: 5’- CTG TTA AAA GTG CAT ACC GCC A -3’
* Hoá chất đểđiện di sản phẩm PCR trên gel agarose
- Dung dịch đệm TBE (Tris Borate EDTA) 1X gồm: Tris base, boric acid và EDTA (pH 8,0)
- Agarose.
- Thang chuẩn DNA 100 bp (Marker 100bp). - Dung dịch ethidium bromide 10 mg/mL.