* Nguyên tắc: dựa trên phản ứng của các hợp chất polyphenol (trong mẫu) với thuốc thử Folin-Ciocalteau cho sản phẩm màu xanh lam. So màu trên máy quang phổ UV VIS 1000 ở bước s g λ = 760 nm, dùng chất chuẩn là gallic acid.
* Chuẩn bị:
- Cân 10mg m i loại cao và hòa loãng trong 1ml ethanol 96%
- Dung dịch Na2CO3: 200g Na2CO3 + 800ml H2O đu sôi, th ột vài tinh th Na2CO3, sau 24h đe lọc và dẫ ước cất tới 1000ml.
- Dung dịch gallic acid: 0,5g gallic acid + 10 ml C2H5OH + 90 ml H2O bảo quản lạnh. Như vậy dịch chuẩn gốc gallic acid có nồ g độ 5mg/ml.
* Tiến hành xây dựng đường chuẩn gallic acid.
- Chuẩn bị 6 b h định mức 100 l, sau đ cho vào i bình 0, 1, 2, 5, 10 và 20 ml gallic acid chuẩn, sau đ dẫ ước cất tới 100 ml sẽ thu được dung dịch gallic acid các nồ g độ 0; 50; 100; 250; 500; 1000 mg/l.
Tiế hà h đị h lượng gallic acid đ dự g đường chuẩn.
Cho vào m i cuvert 20 µl mẫu thử (dung dịch gallic chuẩn ở các nồng độ) + 1,58 ml H2O + 100 µl thuốc thử Folin-Ciocalteau sau 8 phút 30 giây cho thêm 300 µl Na2CO3. Đ h n hợp dung dịch phản ứng trong 2 giờ ở 200
c rồi x c định ở bước sóng 760 nm.
Đị h lượng phenol tổng số của mẫu nghiên cứu bằng cách lấy 10 µl mẫu thử (dịch chiết c c phâ đoạn của rễ củ cây Trạch tả) + 1,58 ml H2O + 100 µl thuốc thử Folin-Ciocalteau sau 8 phút 30 giây cho thêm 300 µl Na2CO3. Đ h n hợp dung dịch phản ứng trong 2 giờ ở 200
c rồi x c định ở bước sóng 760 nm.
Kết quả được tính bằ g đơ vị GAE (Gallic Acid Equivalent), vì phenol tổng số trong rễ củ cây Trạch tả bao gồm hầu hết các phenol khác và chỉ là lượng nhỏ gallic acid.