- Mẫu Chè (khô): 280g lá Chè (khô) được ngâm chiết với 1000 ml etanol trong 24 giờ ở nhiệt độ thường, có sử dụng siêu âm, thu dịch chiết lần 1, ép bã rồi tiếp tục
3.2. Kết quả xác định cấu trúc hóa học của các chất tách đƣợc từ cao Chè
Mẫu cao Chè (khô) sau khi chiết trong CH2Cl2 được cặn chiết CH2Cl2, tiếp tục chiết trong EtOAc được cặn chiết EtOAc. Từ cặn chiết EtOAc bằng sắc ký lọc gel trên sephadex LH-20, sắc ký cột nhanh trên silicagel và sắc ký cột Diaion với các hệ dung môi thích hợp đã phân lập được ba chất ký hiệu lần lượt là CXN2, CXN3 và
CXN4.
3.2.1.Chất CXN2: Epigallocatechin (EGC, 3,3’,4',5’,5,7-hexahydroxyflavan)
Hình 3.5. Công thức cấu tạo của chất CXN2
(Epigallocatechin (EGC), CTPT C15H14O7 M + 306)
Kết hợp số liệu phổ 1
H-, DEPT, 13C-NMR 3.5, 3.6) và pic ion m/z
306,9 [M+H]+ ở phổ ESI-MS đã xác định được công thức phân tử CXN2 là C15H14O7.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 39
Từ dữ liệu p ESI-MS và p 1H-NMR cho phép dựđoán chấtlà một hợp chất flavonoit .
Hình 3.6.Phổ ESI-MS của chất CXN2
P 1H-NMR (bảng 3.5, hình 3.7) CXN2 có cặp doublet kép (dd)
ở H 2,53 (dd, J=16; 7,5 Hz, H-4ax) và 2,83 (dd, J=16; 5,5 Hz, H-4eq) doublet ở H 4,55 (J=7,5 Hz, H-2) và tín hiệu H 3,99 (H-3). Phía trường thấp có một tín hiệu singlet của hai proton H 6,43 ( C doublet (d) H 5,89 5,95 (mỗi tín hiệu 1H) có cùng hằng số tương tác (J = 2 Hz) cho 107,2, 2x =C-H), cho thấy hai proton này đối xứng với nhau. Như vậy vòng B bị thế ở C-1‟, và C-3‟, C-4‟, C-5‟.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 40
Hình 3.7.Phổ 1H-NMR của chất CXN2
Hình 3.8. Phổ 13
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 41
Bảng 3.5. Số liệu phổ 1H- NMR của chất CXN2 [500 MHz, CD3OD, H (ppm)]
Proton CNX2 Proton CNX2 H-2 4,55 d (7,5) H-8 5,89 d (2) H-3 3,99 ddd (13; 5,5; 2) H-2' 6,4 br s H-4 2,53 dd (16, 7,5) 2,83 dd (16; 5,5) H-3' - H-6 5,95 d (2) H-5' - H-8 5,89 d (2) H-6' 6,4 br s Bảng 3.6. Số liệu phổ1 3 C- NMR của chất CXN2 [125 MHz, CD3OD, C (ppm] C CXN2 C CXN2 2 82.8 10 100.7 3 68.7 1' 131.6 4 28.0 2' 107.2 5 157.7 3' 157.6 6 95.5 4' 146.8 7 157.6 5' 156.8 8 96.3 6' 107.2 9 157.8
Dữ liệu p 1H-NMR và DEPT hoàn toàn phù hợp với
khung flavan-3-ol bao qua 6
4 ở C131 158ppm; 6 (CH) 4
nhóm methin nhân thơm ở C95,5 - 107,2 - -
C68,7 - 82,8 (C-3 C28,0 (C-4). Cặp thấy
hai proton này ở vị trí meta với nhau - -8), như vậy vòng A phải có hai nhóm thế ở C-5 và C-7 hoặc C-6 và C-8. Các số liệu phổ NMR của chất CXN2 được chỉ ra
ở bảng 3.5 và bảng 3.6 , cấu trúc của chất CXN2
3,3‟,4',5‟,5,7-hexahydroxyflavan (epigallocatechin). Đây là một catechin chè xanh có hoạt tính chống oxi hóa rất tốt. Công thức cấu tạo của chất CXN2 được mô tả như hình 3.5.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 42