- ðể ñ ánh giá tính kháng virus PVY của các con lai soma và các dòng ”b ố mẹ” chúng tôi sử dụng hai cặp mồi ñặc hiệ u theo Czech J Gennet (2007).
N ội dung 3: ghiên cứu ñ ánh giá sự sinh trưởng, phát triển, năng suất và ph ẩm chất củ của các con lai soma khoai tây và cây ”bố mẹ” (trồng trong
2.3.2. Các phương pháp thí nghiệm ñồ ng ruộng
2.3.2.1. Phương pháp bố trí thí nghiệm chậu vại
Thí nghiệm ñược bố trí theo khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh RCB với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 9 cây ( mỗi dòng 27 cây).Các dòng cây lai soma và các dòng “bố mẹ” sau nuôi cấy in vitro 4 tuần, ñược chuyển ra trồng trong chậu (20x25cm). Chậu ñược ñặt trong nhà màn ñể theo dõi và ñánh giá các
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 28
cấu thành năng suất. Các chỉ tiêu theo dõi theo qui phạm khảo nghiệm giống khoai tây 10 TCN 310-98 như sau:
- Sức sinh trưởng của cây: Yếu, khỏe, trung bình tính theo ñiểm
- Chiều cao cuối cùng của cây (cm): ðo trực tiếp từ gốc ñến ñỉnh sinh trưởng.
- ðặc ñiểm củ: Hình dạng củ, ñộ sâu mắt ngủ, màu sắc vỏ củ, màu sắc ruột củ.
- Các yếu tố hình thành năng suất:
Khối lượng củ trung bình/ khóm (g): Tổng khối lượng củ/ Tổng số
lượng cây thu hoạch.
Số lượng củ trung bình/khóm: Tổng số lượng củ thu ñược/ Tổng số
lượng cây thu hoạch.
Khối lượng trung bình/củ: Tổng khối lượng củ/tổng số củ.
- Phân loại cấp củ sau thu hoạch bằng ñường kính: ðo bằng thước pannet, nhỏ = ф< 30mm, trung bình = 30< ф< 50mm, to = ф > 50mm, không
ñạt = củ khuyết tật, sâu bệnh.
2.3.2.2. Phương pháp ñánh giá tính kháng virus bằng lây nhiễm nhân tạo với virus PVY theo Dr Jorg Schubert – Viện Nghiên cứu chọn tạo giống cây trồng – ðức)
- Dùng bột carborundum (silicon carbide, Aldrich 357391) chà nhẹ lên lá non của các cây thuốc lá (Nicotiana tabacum).
- Nghiền khoảng 20mg nguyên liệu lá nhiễm bệnh ñông khô trong một cối chày sứ.
- Bổ sung khoảng 2 – 3ml dung dịch Na – phospate 50 mM (pH= 7.0) với một lượng nhỏ carborundum, ñồng nhất dung dịch.
- Dùng que bông sát nhẹ dịch chiết virus lên lá cây thuốc lá theo chiều từ cuống lá ñến ñỉnh lá.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 29
- Rửa sạch lá ñã lây nhiễm bằng cách phun nước sạch.
- Lây nhiễm mỗi dòng 5 cây, lây trên lá ñang phát triển tốt. Lây vào lúc chiều mát, thời gian lây nhanh (khoảng 15 phút) ñể ñảm bảo khả năng lây nhiễm virus.
- Sau khi lây nhiễm quan sát triệu chứng biểu hiện của từng dòng và tính tỷ lệ phần trăm số cây nhiễm /tổng số cây lây nhiễm.
2.3.2.3. Phương pháp xử lý kết quả thí nghiệm
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 30
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN