1. Công nghệ cấy truyền phôi
1.3. Quy trình cơng nghệ cấy truyền phôi
1.3.1. Chọn thú cho phôi
Nái cho phôi được chọn lọc từ các đàn hạt nhân. Các thú được chọn phải bảo đảm các tiêu chuẩn như :
- Có nguồn gốc rõ ràng, có đặc trưng của phẩm giống. - Năng suất cao.
- Khả năng sinh sản và các bệnh sản khoa.
1.3.2. Chọn thú nhận phôi
Nái nhận phơi có ảnh hưởng lớn đến việc tiếp nhận và ni con tuy khơng có vai trị trong kiểu gen đời sau nhưng phải đạt các yêu cầu sau :
62
- Sinh trưởng, phát triển bình thường. - Sinh lý sinh sản bình thường.
1.3.3. Gây siêu bài nỗn ở thú cho phơi
Gây siêu bài noãn ở thú cho phơi là q trình kích thích để trong một lần động dục có nhiều trứng phát triển, chín và rụng. Mục tiêu của việc này là thu được nhiều trứng chín rụng tạo thành hợp tử và kết quả là thu được nhiều phơi có chất lượng cao.
Để gây siêu bài noãn, người ta thường sử dụng các hormone như FSH, PMS, HMG Pergonal…các hormone này có thể dùng riêng biệt hay kết hợp với HCG hay PGF2.
1.3.4. Gây động dục đồng pha ở thú nhận phơi
Mục đích là tạo cho thú nhận phơi ở trong tình trạng động dục đồng pha với thú cho phôi (nếu sử dụng phôi tươi) hay phù hợp với tuổi phôi (nếu cấy phôi đông lạnh).
Để gây động dục đồng pha, có thể sử dụng các hormone như: PMS, PGF2, Progestrone.
1.3.5. Thu hoạch phôi
Sau khi phối giống một thời gian, phôi sẽ được lấy ra khỏi thú mẹ: Thu hoạch phơi. Có hai phương pháp thu hoạch phơi: Phẫu thuật và không phẫu thuật. Với phương pháp không phẫu thuật, người ta thu nhận phôi nhờ dụng cụ đặc biệt bơm dung dịch dội rửa lấy phơi (ở bị dùng dung dịch muối Phosphate - Phosphate beffered saline - PBS) vào ống dẫn trứng hay sừng tử cung, phôi sẽ được trôi theo và dẫn ra ngoài để được thu nhận. Dung dịch rửa có lẫn phơi khi dẫn ra ngồi có thể để lắng đọng 20 - 30 phút hoặc đưa ngay vào đĩa petri soi tìm phơi.
1.3.6. Đánh giá và phân loại phơi
Việc tìm và đánh giá phân loại phơi được tiến hành dưới kính hiển vi có độ phóng đại > 24 lần. Phơi được đánh giá phân loại theo các tiêu chuẩn như sau :
- Hình thái, kích thước.
- Mức độ tế bào : Sự phân bố, sắp xếp của tế bào, nguyên sinh chất. - Màu sắc phôi.
Phôi được coi là tốt nếu có kích thước đảm bảo, có dạng cầu đều, nguyên vẹn, các tế bào xếp đều, liên kết chặt chẽ, có độ sáng đều giữa các phần.
63
Nguyên tắc của việc cấy truyền phôi là phôi được lấy ra ở vị trí nào thì sẽ được cấy trả vào đúng vị trí đó nhờ súng cấy phơi. Thú nhận phôi sau khi được cấy một thời gian, tùy thuộc từng loài, sẽ được khám thai để đánh giá kết quả. Đối với bò là 3 tháng.
Tỉ lệ đậu thai ở bị sau khi cấy truyền phơi ở các nước phát triển là 60 - 70% đối với phôi tươi và 55 - 65% đối với phơi đơng lạnh. Ở VN tỉ lệ đạt được có thấp hơn : 30 - 40% với phôi tươi, 38 - 44% với phơi đơng lạnh.
Lợi ích của siêu bài nỗn và cấy truyền phơi trong công tác giống gia súc: - Phổ biến và nhân nhanh các giống có năng suất cao, có các đặc tính q hiếm ra sản xuất.
- Nâng cao cường độ chọn lọc, đẩy mạnh hiệu quả của công tác giống trên cơ sở tăng nhanh tiến bộ di truyền hàng năm.
- Hạn chế tối thiểu số lượng gia súc làm giống từ đó giảm các chi phí sản xuất.
- Dễ dàng, thuận lợi trong việc xuất, nhập vận chuyển trao đổi giống giữa các nước, các vùng.
- Giữ gìn, bảo tồn các vật liệu di truyền (phương pháp Exsitu).
- Hạn chế một số dịch bệnh và nâng cao khả năng chống chịu bệnh, khả năng thích nghi của con vật ở môi trường mới do phần lớn dịch bệnh ở gia súc không lây lan qua phôi.
- Thúc đẩy sự nghiên cứu và phát triển các ngành khoa học có liên quan : phơi sinh học, sinh lý, hóa sinh, miễn dịch, sinh học phân tử, y học…