CHƢƠNG 2 : THỰC NGHIỆM
2.2. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.2.2. Cỏc phương phỏp phõn tớch đối chứng xỏc định hàm lượng
khỏng sinh trong thuốc
Phƣơng phỏp phõn tớch đối chứng theo dƣợc điển
Cỏc hoạt chất khỏng sinh đƣợc phõn t ch theo dƣợc điển bằng phƣơng phỏp HPLC
- Hàm lƣợng cỏc hoạt chất sulfaguanidin, penicilin, ampicilin, amoxicilin, cephalexin, cefaclor, cefadroxil, cefixim trong thuốc viờn và hàm lƣợng hoạt chất cefotaxim trong thuốc tiờm đƣợc xỏc định theo DĐVN4 [2].
- Hàm lƣợng hoạt chất sulfamethoxazol và trimethoprim trong thuốc viờn đƣợc xỏc định theo dƣợc điển Mỹ USP 34- NF 29 [113].
Phƣơng phỏp đối chứng LC/MS
Hàm lƣợng hoạt chất ceftriaxon trong thuốc bột pha tiờm đƣợc phõn t ch đối
chứng theo đƣờng chuẩn trờn hệ thống sắc ký lỏng khối phổ phõn giải cao LC-MS model LC-20A series, hóng Shimadzu, Nhật Bản.
- Cột tỏch :C18 (2,1 mm ID ì 50mm ì 1,9 àm)
- Pha động gồm: kờnh A là đệm CH3COONH4 12,50 mM, kờnh B: ACN với tỉ lệ thể tớch hai kờnh A và B là 30/70. Thể tớch mẫu bơm là 10àl, tốc độ pha động là 200 àl/phỳt.
- Dung dịch chuẩn:
+ Dung dịch chuẩn gốc 200ppm: Cõn chớnh xỏc 0,0050 g chất chuẩn trờn cõn phõn tớch của hoạt chất nghiờn cứu, hũa tan bằng MeOH trong bỡnh định mức 25 ml
và định mức đến vạch bằng dung mụi pha động CH3COONH4 12,50 mM. Dung
+ Dung dịch chuẩn làm việc: Lấy chớnh xỏc thể tớch hỗn hợp dung dịch
chuẩn gốc và dung mụi pha động CH3COONH4 12,50 mM cho vào ống 1 ml thu
đƣợc cỏc dung dịch chuẩn làm việc 20 ppm, 10 ppm và 5 ppm. Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,20μm.
Từ dung dịch chuẩn làm việc 10 ppm pha loóng tiếp về cỏc nồng độ 1 ppm, 0,5 ppm, 0,2 ppm và 0,1 ppm bằng cỏch lấy chớnh xỏc hỗn hợp dung dịch chuẩn 10
ppm và dung mụi pha động CH3COONH4 12,50 mM vào ống 1 ml. Lắc đều, lọc qua
màng lọc 0,20μm. Dung dịch chuẩn làm việc đƣợc bảo quản ở nhiệt độ từ 0-5ºC, trỏnh ỏnh sỏng trực tiếp.
- Chuẩn bị mẫu phõn tớch thực tế:
Cõn 10 lọ thuốc bột pha tiờm, tớnh khối lƣợng trung bỡnh lọ mỗi lọ. Nghiền thành bột mịn. Cõn chớnh xỏc 5mg một lƣợng bột thuốc vào bỡnh định mức 25ml, thờm một lƣợng methanol, lắc siờu õm hoà tan để nguội, thờm dung mụi pha động
CH3COONH4 0,0125M đến vạch, lắc đều. Hỳt chớnh xỏc 50 àL dịch lọc trờn vào
ống 1ml, thờm pha động vừa đủ đến 1ml. Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,20μm. Tiến hành chạy sắc ký lần lƣợt với dung dịch chuẩn và dung dịch mẫu phõn tớch.Tớnh hàm lƣợng hoạt chất dựa vào diện tớch pic trờn sắc ký đồ của dung dịch mẫu thực tế, dung dịch chuẩn.