ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1. Dụng cụ, trang thiết bị
- Tủ lạnh : 40C, -20 ºC ( SANYO)
- Pipet định mức và đầu côn các loại 1000µl, 200µl, 100µl, 20µl, 10µl, 2.5µl - Ống Eppendorf
- Găng tay, giấy thấm vô trùng - Tủ sấy, tủ ấm
- Khay đổ gel
- Bình thủy tinh, cốc đong - Cân điện tử
- Lò vi sóng
- Máy ly tâm để bàn Eppendorf (Đức): Centrifuge 5424R và Hitachi (Nhật). - Máy Votex
- Máy rung lắc nhiệt: Thermomixer 5437 và Thermomixer comfort cho ống 1,5ml và Mixmate cho ống 2ml.
- Máy điện di: Mupid (Nhật Bản)
- Máy soi gel và chụp ảnh tự động: EC3 Imaging system - Máy đọc huỳnh quang
- Máy đo OD: Nanodrop 1000 - Máy PCR: Eppendorf
- Máy chạy MLPA
2.3.2. Hóa chất
- Hóa chất tách chiết DNA:
+ Dung dịch Lysis buffer RBC gồm: 4,3g NH4 Cl + 0,5g KHCO3 + 0,03g EDTA + 500ml H2 0, pH 7,1-7,4
+ PBS 1X: 8g NaCl + 0,2g KCl + 2,68g Na2 HP04 .7H2 O + 0,24g KH2PO4 + 1000 ml H2O, pH 7,4
+ Lysis buffer HD ( phá bạch cầu): 1,5 ml Tris HCl 1M + 1ml EDTA 0.5M + 5ml SDS 10% + 42,5 ml H2 O. Tổng thể tích 50 ml
+ Proteinase K (10mg/ml)
+ Dung dịch Phenol : Chloroform : Isoamyl (25 : 24 :1) + Dung dịch Chloroform : Isoamyl (24 : 1)
+ Ethanol 100%, ethanol 70% bảo quản lạnh + Sodium acetate CH3COONa 3M (pH=5.2). + Dung dịch hòa tan DNA: đệm TE (Tris - EDTA) - Hóa chất cho PCR:
+ Thành phần của PCR Master Mix gồm: + 10 X Buffer
+ GoTag chứa: dNTPs, Taq polymerase, MgCl2 + Primers: mồi xuôi, mồi ngược
+ Nước cất 2 lần dH2O - Hóa chất chạy điện di:
+ Dung dịch đệm TBE (Tris Borate EDTA) 1X gồm: Tris base, boric acid và EDTA (pH 8.0). Khi sử dụng pha thành 10X
+ Agarose( dạng bột) + Ethidium
- Hóa chất chạy MLPA: bao gồm các thành phần sau:
• MLPA buffer( ống nắp vàng)
• Probemix ( ống nắp đen)
• Ligase-6 buffer A ( ống nắp không màu)
• Ligase-65 buffer B (ống nắp trắng)
• Ligase-65 ( ống nắp xanh lá cây)
• SALSA PCR- primers( ống nắp nâu)
• SALSA Enzym Dilution Buffer( ống nắp xanh da trời)
• SALSA Polimerase ( Ống nắp da cam)
• Taq polymerase
• dH20