III. Hoỏ tớnh của mỏu
7. Cholesterol trong mỏu
Cholesterol trong mỏu, trong cỏc tổ chức cơ, thần kinh, nhất là trong nóo.
Cholesterol tự do, Cholesterit ( este) trong thức ăn, qua tiờu hoỏ ở ruột non, trong cỏc giọt mỡ hấp thu vào mỏu. Nguồn nội sinh ủược tổng hợp chủ yếu trong cỏc tế bào nền của gan từ cỏc axetyl CoA. Ngoài gan, Cholesterol cũn ủược tổng hợp ở một số tổ chức khỏc.
Gan cú vai trũ to lớn trong việc ủiều chỉnh nồng ủộ Cholesterol trong mỏu.
ở gan, xảy ra quỏ trỡnh este hoỏ Cholesterol tạo thành Cholesterit (Cholesterol este). Là nguồn Cholesterit chủ yếu của huyết tương. Khi tế bào gan bị tổn thương, Cholesterit huyết tương giảm, và do ủú, tỷ lệ: phan toan l Cholestero t Cholesteri giảm. Tỷ lệ ủú càng giảm
Bệnh càng trầm trọng. Thường gặp trong cỏc bệnh viờm gan nhiễm trựng, nhiễm ủộc nặng, xơ gan, hoàng ủản kộo dài……
Riờng Cholesterit ngoại sinh trong cỏc giọt mỡ ủến gan thỡ lại thuỷ phõn nhờ men Cholesterol esteraza ở gan. Sau khi thuỷ phõn lại lại este hoỏ ủể tham gia vào lipoprotein huyết tương.
Gan ủúng vai trũ ủặc bịờt quan trọng trong cỏc trường hợp sau:
- Tạo ra 7 – dehydrocholesterol (tiền vitamin D3) ủưa ủến da, dưới tỏc dụng của tia cực tớm sẽ biến thành Vitamin D3 ( cholecanxiferol).
- Oxy hoỏ Cholesterol tạo thành cỏc axit mật bài tiết ra ruột và sẽ tỏi hấp thu. Cholesterol bài tiết theo cỏc axit mật ủến ruột, trộn với cỏc Cholesterol trong thức ăn.
- Một phần Cholesterol trong ruột khụng tỏi hấp thu hết sẽ theo phõn, cú thể bị oxy bởi vi khuẩn ủường ruột thành coprostanol. Trong phõn luụn cú ớt Cholesterol và coprostanol.
* ðịnh lượng Cholesterol tổng số bằng thuốc thử Feric chlorua
Nguyờn tắc: Nước mỏu ủó loại protein trong dung dịch nhờ axit Feric chlorua, cú Cholesterol hoà tan trong ủú. Cholesterol trong nước mỏu cú tỏc dụng với axit sulfuric ủặc. Và Fe +++ sẽ thành một dẫn xuất màu ủỏ tớm ổn ủịnh. Cũng xử lý như vậy với dung dịch Cholesterol chuẩn rồi suy ra nồng ủộ Cholesterol trong huyết thanh.
Thuốc thử:
1. Axit axetic ủặc (A.R)
2. Dung dịch Feric chlorua gốc: Cõn 840 mg Feric chlorua ( FeCl3.6 H2O) cho vào bỡnh
100ml. Thờm axit axetic ủặc vào, ngoỏy cho tan rồi cho tiếp ủến 100ml.
3. Dung dịch Feric chlorua dựng: Trộn một phần dung dịch Feric chlorua gốc rồi cho
thờm 9 phần axit axetic ủặc (pha khi dựng).
4. Dung dịch Feric chlorua trắng: Lấy 8,5 ml dung dịch Feric chlorua gốc rồi cho thờm
axit axetic ủặc ủến 100ml.
5. Dung dịch muối Natri chlorua 0,85%.
6. Dung dịch Cholesterol chuẩn gốc (1ml cú 1mg). Cõn 100 mg Cholesterol ( A.R.) cho
vào bỡnh ủịnh mức 100 ml, dựng axit axetic ủặc hoà tan và pha ủến khấc 100.
7. Dung dịch Cholesterol chuẩn dựng (1ml cú 0,1 mg). Lấy 10 ml Cholesterol chuẩn gốc
cho vào bỡnh 100ml, thờm 98,5 ml dung dịch Feric chlorua gốc, rồi thờm axit axetic ủặc ủến 100 ml ( pha khi dựng).
8. Axit sulfuric ủặc ( A.R).
Thao tỏc:Thao tỏc:
Cho vào ống li tõm 0,05 ml huyết thanh (hoặc huyết tương).
Thờm 4 ml dung dịch Feric chlorua dựng; vừa cho vừa lắc, ngoỏy cho ủều và ủể yờn 10 phỳt. Ly tõm 2 phỳt. Lấy 3ml nước trong ở trờn cho vào ống nghiệm miệng rộng làm ống thử (khụng ủịnh lượng).
ở một ống nghiệm khỏc, cho vào 0,05ml nước muối sinh lý, 1ml dung dịch cholesterol chuẩn (1ml cú 0,1 mg) và 3ml dung dịch Feric chlorua trắng. Hỳt lấy 3ml ủể cho vào ống chuẩn.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Giỏo trỡnh Giỏo trỡnh Chẩn ủoỏn bệnh thỳ …………………….134 Cỏc ống, ml
Cỏc bước
ống trắng ống chuẩn ống thử Nước mỏu (4)
Dung dịch cholesterol chuẩn ủó pha (5) Dung dịch Feric chlorua trắng
Axit Sulfuric 0 - 3,0 2,0 0 3,0 0 2,0 3,0 0 0 2,0
Lắc kỹ ngay. ðưa so màu kớnh lọc màu lục hoặc λ = 500 àm Tớnh: mg% cholesterol =
chuan thu E
E x 200
ðịnh lượng cholesterit (cholesterol este)
Nước mỏu ủó loại protit nhờ hỗn hợp cồn axeton, cho digitonin vào sẽ kết hợp với hydroxyl của cholesterol tự do ủể hỡnh thành phức chất cholesterol digitonin ổn ủịnh lắng xuống ủỏy và ủược tỏch ra.
Sau khi rửa sạch phức chất kế tủa sẽ cho tỏc dụng vưúi feric chlorua và óit sulfuric ủể hiện màu. tớnh lượng cholesterol tự do. Lượng cholesterol tổng số trừ lượng cholesterol tự do bằng lượng cholesterit.
Thuốc thử:
1. Cồn axeton: cồn etylic và axeton lượng bằng nhau.
2. Digitonin 1%: 1g digitonin pha với cồn etylic 50% ủến 100ml. 3. Cỏcthuốc thử khỏc giống phần ủịnh lượng cholesterol tổng số.
Thao tỏc:
1. Cho 0,1ml huyết thanh vào ống ly tõm cú khắc ủộ.
2. Thờm vào 5ml cồn axeton lắc ủều, bịt kớn miệng ống, ủể im 30 phỳt. 3. Cho thờm cồn axeton ủể toàn dung dịch ủủ 5ml, lắc ủều rồi ly tõm 5 phỳt
4. Lờy 2,5 ml ở phớa trờn rồi cho vào ống ly tõm khỏc, rồi ủun cỏch thuỷ bốc hơi cũn 0,5ml. ðang lỳc ống cũn núng cho 0,25ml digitonin 1%. Lắc ủều và ủể yờn 20 phỳt.
5. Ly tõm 5 phỳt, ủổ ủI phần nưopức trong ở trờn. Lại thờm 4ml axeton ủể rửa cặn ủỏy kết tủa rồi lại ly tõm 5 phỳt. Bỏ ủI phần nước trong ở trờn và ủể ngược ống cho chảy hết nước. Dựng ống này làm ống xột nghiệm cholesterol tự do.
6. ở một ống khỏc làm xột nghiệm cholesterol tổng số. Cỏc bước tiếp như sau:
Cỏc ống, ml Cỏc bước
ống cholesterol tổng số ống cholesterol tự do Huyết thanh
Dung dịch Feric chlorua dựng Dung dịch Feric chlorua trắng
0,05 4,00 0 0 0 0,4
Dựng que thuỷ tinh trộn ủều, ủể yờn 10 phỳt rồi ly tõm 2 phỳt. Lấy phần nước trong rồi theo thứ tự mỗi ống Nước trong ở trờn Axit sulfuric ủặc 3,0 2,0 3,0 2,0 https://sites.google.com/site/lophocphanvnuak60/ 141
Trộn ủều ngay, sau 5-10 phỳt so màu. ống chuẩn, ống trắng,kớnh lọc màu,cụng thức tớnh giống như ủịnh lượng cholesterol tổng số. Số tỡm ủược là lượng cholesterol tự do và lượng cholesterol tổng số.
ðịnh lượng cholesterol theo Incơ
Nguyờn tắc là cholesterol trong huyết thanh kết hợp với axit axetic ủặc, anhydric axetic và axit sulfuric ủặc cho phức hợp màu xanh lỏ cõy. Màu phức hợp ủậm nhạt tỷ lệ thuận với lượng cholesterol trong mỏu. Cũng xử lý như vậy với một dung dịch cholesterol biết trước nồng ủộ ủể từ ủú, qua so màu bằng quang kế, suy ra lượng cholesterol trong mỏu;
a. Axit axetic ủặc – 1 phần; b. Anhydric axetic – 5 phần; c. Axit sulfuric – 1 phần;
Trộn 3 thứ trờn với nhau theo thứ tự trộn hai thứ ủầu (a) và (b) trước, ủể lạnh 4o C, rồi cho từ từ axit sulfuric vào. Hỗn hợp này luụn ủể trong tủ lạnh, lỳc dựng mới lấy ra.
Dung dịch cholesterol chuẩn gốc: 100mg Cholesterol và chloroform vừa ủỳng 100ml. Lấy 10 ml dung dịch gốc trờn cho vào bỡnh ủịnh mức, rồi thờm chloroforrm ủến 100ml. 1ml dung dịch này cú 0,1mg cholesterol.
Làm ủồ mẫu:
Lấy 5 ống nghiệm khụ, sạch và cho cỏc chất như sau
Cỏc ống nghiệm Cỏc chất
1 2 3 4 5
Số ml Cholesterol chuẩn (0,1 mg) Số ml Cholesterol thực tế
Số lượng Cholesterol trong 100 ml huyết thanh (mg %) 0,5 0,05 50 1 0,10 100 1,5 0,15 150 2 0,20 200 2,5 0,25 250
Cho cả 5 ống vào bỡnh ủun cỏch thuỷ cho bốc hơi hết. Chỳ ý, chlorform rất dễ chỏy, vỡ vậy lỳc ủun phải hết sức cẩn thận. Thờm vào mỗi ống 2,1 ml thuốc thử, lắc ủều, ủun cỏch thủy ở 300 C trong 20 phỳt và so màu ngay sau ủú. Vẽ ủồ thị.
Xột nghịờm
Dựng 2 ống nghiệm khụ, sạch và cho vào cỏc chất sau:
ống xột nghịờm ống trắng
Huyết thanh tươi 0,1ml 0
Thuốc thử 2,0 2,1
Trộn ủều. ðem cỏch thuỷ 300 C trong 20 phỳt và so màu ngay sau ủú bằng quang kế, cúng 0,5 cm; kớnh lọc màu ủỏ.
Tớnh hàm lượng Cholesterol theo ủồ mẫu.
ý nghĩa chẩn ủoỏn
Cholesterol tăng giảm theo tuổi, theo chế ủộ ăn uống, tăng khi cú thai.
- Cholesterol toàn phần tăng: hoàng ủản do tắc mật, hư thận, xơ cứng ủộng mạch, huyết ỏp cao.
- Cholesterol toàn phần giảm: Xơ gan nặng, viờm gan nhiễm trựng; Một số bệnh truyền nhiễm nặng và kộo dài; u nang giỏp trạng, suy thượng thận.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Giỏo trỡnh Giỏo trỡnh Chẩn ủoỏn bệnh thỳ …………………….136
- Cholesterit giảm: Viờm gan, nhiễm trựng, xơ gan. Viờm gan món tớnh, hồng ủản do
sỏi.
ðể phõn biệt hồng ủản do gan hay những nguyờn nhõn ngoài gan cú thể tham khảo sự biến ủổi sau:
Tắc ống mật:
+ Cholesterol toàn phần tăng, + Hệ số: phõ`n toàn l Cholestero t Cholesteri bỡnh thường. Bệnh ở gan:
+ Cholesterol toàn phần giảm hoặc bỡnh thường + Hệ số phõ`n toàn l Cholestero t Cholesteri giảm