Vitamin D3 (25-OH) được sử dụng để đánh giá tình trạng vitamin D trong huyết thanh. Vitamin D3 (25-OH) là chất chuyển hóa lưu hành chính của vitamin D có thời gian bán hủy là 15 ngày, nó phản ánh sản xuất vitamin D trong da cũng như các hình thức bổ xung khác từ chế độ dinh dưỡng. Nồng độ vitamin D3 (25-OH) này phản ánh cả vitamin D3 (25-OH) và vitamin D2 (25- OH). Hơn 95% vitamin D3 (25-OH) trong huyết thanh là của vitamin D3 (25- OH). Tuy nhiên nó không phản ánh vitamin D lưu trữ trong các mô cơ thể [19]. 1,25(OH)2D thường không được sử dụng để xác định tình trạng vitamin D vì nó có thời gian bán hủy ngắn khoảng 15 giờ và được quy định chặt chẽ bởi hormone tuyến cận giáp, canxi và phosphate sao cho nó không bị giảm cho đến khi tình trạng thiếu vitamin D được cải thiện.
Nồng độ vitamin D3 (25-OH) trong huyết thanh phụ thuộc nhiều yếu tố như chủng tộc, địa dư, điều kiện kinh tế xã hội… và các phương pháp định lượng khác nhau. Cho nên trên thế giới vẫn chưa có định nghĩa chuẩn về nồng độ tối ưu của vitamin D3 (25-OH) huyết thanh.
Phân loại của Holick 2007: Nồng độ 25 OH D [28]. ≤ 20 ng/ ml: thiếu nặng.
21÷29 ng/ ml: thiếu nhẹ. ≥ 30 ng/ml: tối ưu.
> 150 ng/ml: có thể ngộ độc.
Hiện nay trên thế giới có một số phương pháp được sử dụng để xác định nồng độ vitamin D3 (25-OH) trong huyết thanh.
- Phương pháp miễn dịch phóng xạ.
- Sắc ký lỏng cao áp.
Phương pháp sắc ký lỏng cao áp chính xác nhất nhưng tốn kém, phương pháp miễn dịch phóng xạ độc hại. Do vậy phương pháp miễn dịch điện hoá phát quang được sử dụng phổ biến nhất.