CH NGă3 .ăK T QU VÀ THO L UN
3.4.3 ánhăgiáăk hn ngăbámădínhătrênămơăhìnhăt bào rut Caco-2
Sauăkhiăđánhăgiáăkh n ngăt n t i c a ch ng VSV ti măn ngătrongăđi u ki n kh c nghi t c aăđ ng ru t, m t trong nh ngăđ c tính c n quan tâm là kh n ngăbámă dính vào ru t c a v t ch . Y u t này không ch giúp probiotic s ngălâuăh nătrongă đ ngătiêuăhóaăvàăt ngăc ng s t ngătácăc a vi khu n và v t ch , mà còn giúp probiotic chuăđ c đ cănhuăđ ng d dày [69]. c tính kh n ngăbámădínhăc a các ch ng VSV ti măn ng,ăt bào bi u mô ru tăng i Caco-2ăđ c s d ng làm mơ hình nghiên c u in vitro [58, 70].
K t qu đ c bi u th d i d ng giá tr trung bình c a ba thí nghi măđ c l pă±ăđ l ch chu n.
Kh n ngăbámădínhăvàoăt bào Caco-2 c a 5 ch ng ti măn ngăđ c th hi n
trong Hình 3.6. T l bám dính (%) thayăđ i theo các ch ng khác nhau, trongăđó,ă ch ng 23 và 27 th hi n kh n ngăbámădínhăv t tr iăh năh n so v i ch ng 3 ch ng cịn l i, v i ph nătr măbámădínhătrênăt bào l năl t là 96,9 ± 8,61% và 72,5 ± 6,55% sau 2 gi v i t bào Caco-2. Ch ng 12, 18 và 22 th hi n kh n ngăbámădínhăth p (d i 5%). So sánh v i nghiên c uătr căđâyăc a M. Li và c ng s n mă2020,ăcácă ch ng LAB c a nhóm th hi n kh n ngăbámădínhăt t trên Caco-2,ădaoăđ ng t 34,49 ±ă0,81%ăđ n 61,49 ± 4,23% sau 1 gi v i t bào. Tuy nhiên trên mơ hình t bào bi u mơ ru t heo IPEC-J2, kh n ngăbám c a các ch ngănàyăthayăđ i, m t s ch ng
gi m kh n ngăbámăsoăv i t bào Caco-2, trong khi ch ng E. faecium và L. salivarius phân l p t heo r ng l iăt ngăkh n ngăbámăđ n 70% trên t bào IPEC-J2 [70]. Trong khiăđó,ăL.ăHuangăvàăc ng s n mă2020ăbáoăcáoăr ng các ch ng Weissella cibaria MW01, MW02 và MW04 th hi n kh n ng bám dính kho ngă20%ăđ năh nă30%ătrênă t bào Caco-2 sau 2 gi . Nghiên c uăc ngăch ra ch ng Lactobacillus rhamnosus GG là ch ngăđ i ch ngăvìăđãăđ c ch ng minh là ch ng k t dính t t,ănh ngăkh n ngă bám dính trên t bào Caco-2 sau 2 gi x lí là kho ng h nă10%.ăNhómăc ngăth y r ng ch ng W. cibaria MW03 th hi n kh n ngăch uăđ ng t t v i d ch v nhân t o và mu i m t l i không th hi n kh n ngăbámădínhăt tă(d i 5%) [58]. i u này có th k t lu năr ngăkh n ngăk t dính c a các ch ngănàyălàăđ cătr ngăchoăt ng ch ng vi khu n.ă i u này có th là k t qu c a s tácăđ ng l n nhau, ph c t p gi a các phân t b m t vi khu n, ch ng h nănh ăproteinăvàăcácăh p ch tăđ c ti t ra [70]. Bên c nh đó,ăcác t bào bi u mơ ru t (intestinal epithelial cells ậIEC)ăluônăđ i m i và bi t hóa, d năđ n c u hình khác nhau trên các phân t b m t IEC cácăgiaiăđo n khác nhau, nhăh ngăđ n kh n ngăk t dính c a chúng [71], nh ăch ng W. cibaria MW01 nghiên c u trên bám dính t tăh năvàoăt bào Caco-2ăđãăbi t hóa so v i t bàoăch aă bi t hóa. M iăđây,ătrongănghiênăc u c a Yang Du và c ng s c cho th y, khi lo i b protein l p b m t ngoài cùng (l p S) c a Lactobacillus plantarum HC-2, kh n ngă bám dính c a ch ng vi khu n này trên t bàoă ungă th ă bi u mô tr că tràngă ng i HCT116 gi măđángăk (t 98,1% xu ng cịn 20,9%), t đóănhómănghiên c u đãăk t lu n r ng protein b m tăđóngăvaiătrịăquanătr ng trong vi c k t dính vi khu n v i t bào ru t [72]. có th đánhăgiáăc ăch bám dính c a vi khu n trên t bào c n ph i có nhi u nghiên c uăh n,ătuyănhiên, m t s tácăđ ng có l i c a probiotic khi bám dínhăđãăđ c ch ngăminhănh :ăchi m gi các v trí trên bi u mô ru t làm gi m kh n ngăbámădínhăc a vi khu n gây b nh [72];ăđi u ch nh h th ng mi n d ch [58, 70]; b o v tính tồn v n c a hàng rào IEC [58].
Nh ăv y, trong 5 ch ng vi khu n kh o sát, ch ng 23 và 27 th hi n kh n ngă bámă v t tr i trên mơ hình t bào Caco-2,ă đâyă làă m t trong nh ng y u t giúp probiotic t n t i lâuăh nătrongđ ng ru t v t ch .ăSauăkhiăđánhăgiáăkh n ngăbámă
dính, 5 ch ng này ti p t căđ căđánhăgiáăkh n ngă c ch bám dính c a E. coli trên mơ hình t bào Caco-2.
3.4.4.ă ánhăgiáăkh n ngă c ch s bám dính c a E. coli lên t bào ru t c a ch ng ti măn ng
B căđ u tiên c a nhi mătrùngăđ ng ru t là s bám dính c a vi khu n gây b nh lên b m t niêm m c ru t, quá trình này x y ra vì vi khu n có th bám dính lên các th th riêng bi t c a t bào [62]. N m ch ng vi khu n ti măn ngăđ căđánhăgiáă kh n ng c ch s bám dính c a E. coli (ATCC® 25922TM) trên mơ hình t bào Caco- 2 v i 3 nhóm nghi m th c, k t qu đ c trình bày trong Hình 3.7.
C nh tranh: đ ng th i probioitc và E. coli trong 2 gi ; Thay th : Caco-2ătr c v i E. coli trong 2 gi ,ăsauăđóă Caco-2 v i probiotic trong 2 gi ; c ch : x lí Caco-2 v i probiotic trong 2 gi tr c khi v i E. coli trong 2 gi ; i ch ng: Caco-2 v i E. coli khơng x lí probiotic. K t qu đ c bi u th d i d ng giá tr trung bình c a ba thí nghi măđ c l pă±ăđ l ch chu n (SD); v i * P<0.05, **P<0.01.
K t qu đánhăgiáăkh n ngă c ch s bám dính c a E. coli trên t bào Caco-2 c a các ch ng vi khu n ti măn ngăchoăth y có s khác bi t gi a ba nghi m th c, các ch ng khác nhau có kh n ngă c ch bám dính khác nhau.
C th , khi x líăđ ng th i E. coli v i probiotic trong 2 gi , ch có ch ng 12 và ch ng 27 ghi nh n có kh n ngă c ch s bám dính c a E. coli (53,16 ± 22,96%
Hình 3.7. K t qu đánhăgiáăkh n ngă c ch s bám dính c a E. coli trên t bào Caco-2 c a các ch ng ti măn ng.
vàă40,31ă±ă18,56%).ăTrongăkhiăđó,ăcácăch ng 18, 22 và 23 ghi nh n s c ch bám dínhăkhơngăđángăk so v i nghi m th c không x lí.
Trong th nghi m kh n ngăthayăth v trí bám dính c a E. coli trên l păđ nă t bào Caco-2, ch có ch ng 23 và 27 có kh n ngă c ch kho ng 50% E. coli, các ch ng còn l i th hi n s thayăđ i E. coli khôngăđángăk .
S có m t c a ch ngă18ăvàă23ătr c trên t bào bi u mô ru t Caco-2 th hi n kh n ngă c ch s bám dính c a E. coli t tăh năsoăv i các ch ng khác ( c ch kho ng 40% E. coli so v iăđ i ch ng).
Th nghi mănàyăc ngăchoăth y m t s đi m thú v , ch ngă18ăđ c ghi nh n kh n ngă c ch E. coli m nh nh t trong th nghi m khu chătánăđ aăth ch 2 l p v i KVKKăh nă20mm,ătuyănhiên,ă th nghi m này kh n ng c ch bám dính khi có m tăđ ng th i E. coli và ch ng 18 ho c ti n x lí E. coli đ u không ghi nh n kh n ngă gi m s l ng E. coli bám dính trên t bào Caco-2. Ch khi ch ngă18ăđ c tr c v i t bào, hi u qu c ch E. coli bám dính m iăđ c ghi nh n. Trongăkhiăđó,ăch ng 23 và 27 th hi n kh n ngăbámădínhăv t tr i trên t bào Caco-2 so v i các ch ng ti măn ngăkhác,ăcácăch ngănàyăc ngăchoăth y hi u qu c ch s bám dính c a E. coli trên t bào t tăh n c 3 nghi m th căđãăkh oăsát.ă i u này ch ng t trong kho ng th i gian kh o sát (2 gi ), có th probioticăch aăti t ra nhi u các ho t ch t có kh n ngă c ch E. coli (nh ăaxităh uăc ,ăbacteriocins,…)nh ăcácăth nghi mătr căđây trênăđ aăth ch (24 gi ), ph n nhi u ph thu c vào kh n ngăbámădính,ăc nh tranh v trí bám dính c a các ch ng vi khu n trên b m t l păđ năt bào.ăDoăđó,ăđ có th đánhă giáărõăh năcácătácăđ ng c a probiotic và vi khu n gây b nh bám dính trên t bào, c n có kho ng th i gian kh oăsátădàiăh n.ăBên c nhăđó,ăcácănghiênăc uăđãăch ra các ch ng l i khu năđi u ch nh s bám dính c a vi khu n gây b nh trong t bào bi u mơ có th ph thu c vào t ng ch ng [62]. Nghiên c u c a AR. Choi và c ng s cho th y, ch ng Weissella có kh n ngă c ch đángăk s bám dính c a E. coli O157: H7 ATCC 35150, S. enteritidis KCCM 12021 và S. typhimurium KCTC 1925 vào t bào HT-29 [62];ă trongă khiă đó,ă ch ng Weissella confusa đ c phân l p t s a lên men trong nghiên c uătr c c aăF.ăAyeniăvàoăn mă2011ăl iălàmăt ngăkh n ngăbámădínhăc a E. coli trên t bào HT-29 [73].
T k t qu đánhăgiáăkh n ngă c ch s bám dính c a E. coli này cho th y, kh n ngă c ch s bám dính c a m m b nhămangătínhăđ c tr ng theo t ng ch ng, vàătheoăcácăc ăch khác nhau. Nh ng k t qu này ng h gi thuy t r ng s k t h p c a các ch ng l i khu n này có th s có hi u qu caoăh nătrongăvi c c ch VSV gây b nh trong v t ch so v i vi c s d ng t ch ngăđ năl . Nghiên c u c a R. Campana và c ng s cho th y L. rhamnosus W71 gi măđ c 57,14% s bám dính c a S. enteritidis ATCC 13076, nh ngăkhiăk t h p các ch ng LAB v i nhau, hi u qu c ch S. enteritidis đãăt ngălênă82,47%.ăK t qu t ngăt khiăđánhăgiáăs c ch C. sakazakii ATCC 29544 bám dính trên t bào, s có m t c a nhóm LAB trong nghiên c uăđãă c ch C. sakazakii h nă82,86%,ăt tăh năsoăkhiăđánhăgiáăv i các ch ngăđ năl [74]. Tóm l i, các ch ng l i khu n có các tácăđ ngăkhácănhauăđ n s bám dính c a các vi khu n gây b nh trên bi u mơ ru t,ădoăđó,ăđ có th h ngăđ n ch ph m probiotic, c n ph iăđánhăgiáăvi c k t h p các ch ng probiotic v iănhauăđ đemăl i hi u qu t t nh t.