Ánhăgiáătínhănh yc m vi kháng sinh ca ch ng ti măn ng

Một phần của tài liệu Phân lập, tuyển chọn các chủng probiotic từ heo rừng có khả năng ức chế escherichia coli và salmonella typhimurium và đánh giá đáp ứng sinh miễn dịch của chúng trên mô hình tế bào caco 2 (Trang 62 - 69)

CH NGă3 .ăK T QU VÀ THO L UN

3.4.5 ánhăgiáătínhănh yc m vi kháng sinh ca ch ng ti măn ng

Vi căđánhăgiáătínhănh y c m v i kháng sinh là m t trong nh ng tiêu chí chính đ đánhăgiáăcácăch ng probiotic ti măn ng.ăCácăch ng vi khu năđ căđánhăgiáăb ng ph ngăphápăkhu chătánăđ aăgi y kháng sinh, k t qu thuăđ c B ng 3.4.

B ng 3.4. Tính nh y c m v i kháng sinh c a các ch ng ti măn ng Kháng sinh Hàm l ng (g) Các ch ng vi khu n 12 18 22 23 27 AMP 10 S S S S S CZ 30 R R R R R IPM 10 R S S S S Ci 5 R R R R R GE 10 S S S S S CT 10 I S S I S

Chú thích: AMP: ampicillin; CZ: cefazolin; IPM: imipenem; Ci: ciprofloxacin; GE: gentamicin; CT: cefotaxime, R: kháng kháng sinh; I: kháng trung gian; S: nh y c m.

Các ch ng VSV đ căcoiălàăprobioticăkhơngăđ căđóngăvaiătrịălàă ch a gen kháng thu căkhángăsinh,ăđi uănàyăđ c lo ng i r ng gen kháng thu c có th chuy n sang các vi khu n gây b nhăđ ng ru t [75]. K t qu kh o sát cho th y t t c 05 ch ng trong nghiên c uă nàyă đ th hi n nh y c m v i ampicillin, gentamicin và cefotaxime. Bên c nhăđó,ă nhóm kháng sinh imipenem, các ch ngăđ u th hi n m c nh y c m m nh, tr ch ng 12 kháng v i imipenem. Trongăkhiăđó,ăt t c 05 ch ng đ u kháng v i ciprofloxacin ( c ch t ng h p axit nucleic) và cefazolin ( c ch t ng h p thành t bào). K t qu cóătínhăt ngăđ ng v i các nghiên c uătr căđây,ăcácă ch ngăLABăđãăđ c báo cáo là nh y c m v i ampicillin [76]. Bên c nhăđó,ăkh n ngă kháng ciprofloxacin t nhiên c a các ch ng vi khu nălacticăc ngăđ c tìm th y trong các nghiên c uătr c [68]. Hi n nay, v năđ các ch ng probiotic có kh n ngăkhángă khángăsinhăcóăđ c coi là an tồn hay khơng v năcịnăđangăđ c tranh lu n. Các báo cáoătr căđâyăchoăr ng b n ch t kháng kháng sinh n i t i c a men vi sinh LAB cho th y ng d ng c a chúng cho c m căđíchăđi u tr và phịng ng aătrongăđi u tr và ki m soát nhi mătrùngăđ ng ru t,ăđ c bi tăkhiăchúngăđ c s d ngăđ ng th i cùng v i kháng sinh [77]. Các l i khu n có kh n ngăkhángăn i sinh có th ph c h i nhanh chóng h vi khu năđ ng ru tăsauăkhiăđi u tr b ng kháng sinh [78]. Tuy nhiên, ch ph m sinh h c ph iăanătồnăchoăconăng iăvàăkhơngăđ c có các gen kháng kháng sinh có th chuy n giao [62].ăDoăđó,ăc n có các nghiên c uăsâuăh nănh măđánhăgiáă s hi n di n c a các gen kháng kháng sinh và kh n ngăchuy n gen kháng tr c khi đ aăra các ngăviênăprobioticăđ đi u ki năđ phát tri n các s n ph m probiotic.

3.5.ă nh danh các ch ng ti măn ng

Các ch ng ti măn ngăsauăkhiăđ căđánhăgiáăcácăy u t kháng VSV ch th và cácăđ c tính c a probiotics đ căđnh danh b ng ph ngăpháp gi i trình t vùng 16S rRNA v i c p m iă đ c hi uă LPW57ă (5’-AGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)ă vàă LPW205ă(5’-CTTGTTACGACTTCACCC-3’) [57]. Trình t vùngă16SărRNAăđ c đ i chi u v i ngân hàng gen NCBI b ng ph n m măBLASTănucleotideăđ ch n k t qu choăđ t ngăđ ng cao nh t. K t qu BLAST nucleotide vùng 16S rRNAăđ c

B ng 3.5. K t qu đnh danh các ch ng ti măn ngăb ngăph ngăphápăgi i trình t vùng 16S rRNA Kí hi u ch ng Tên ch ng t ngăđ ng 12 Leuconostoc mesenteroides 99,71% 18 Weissella confusa 99,86% 22 Weissella confusa 98,89% 23 Weissella confusa 98,66% 27 Pediococcus pentosaceus 99,3%

K t qu đnh danh cho th y trong 05 ch ng ti mă n ng,ă cóă 01 ch ng Leuconostoc mesenteroides (phân l p t phân heo nhà), 03 ch ng Weissella confusa (phân l p t ru t và phân heo r ng), 01 ch ng Pediococcus pentosaceus phân l p t ru t heo nhà, các ch ngănàyăđ u thu c nhóm vi khu n lactic [68]. Trong nghiên c u c a Z. Benmechernene và c ng s , hai ch ng Leuconostoc mesenteroides B7 và Z8 phân l p t s a l căđàăchoăth y kh n ngă c ch m nh s phát tri n c a Listeria spp, Staphylococcus aureus và các ch ngănàyămangăđ c tính c aăprobioticănh ăt l s ng cao pH th p (2; 3 và 4) v i 0,5%, 1% và 2% mu i m t; ch ng L. mesenteroides B7 đ c xác đnh có kh n ngă sinhă bacteriocină làă leucocină B [79]. Ch ng L. mesenteroides SJRP55ăđ c phân l p t phô mát mozzarella th hi n kh n ngăkh liên h p mu i m t, chuăđ căđi u ki n kh c nghi t c aăđ ng tiêu hóa; kh n ngă bám dính t t,…ă[80]. K đ n, ch ng vi khu n Pediococcus pentosaceus làăđ iăt ng đãăđ c ch ng minh là ch ng probiotic ti măn ng,ăv i các ng d ng trong công nghi p th c ph mănh trong quá trình s n xu t kim chi và bánh mì, nem chua vì kh n ngălênămenăvàăsinhăraăcácăch t kháng khu n và n m m c t nhiên c a chúng. V i kh n ngăs n xu tăglucansucraseăhàmăl ng cao, P. pentosaceus đãăđ c ng d ng trong quá trình s n xu t s a vì chúng góp ph n t oănênăh ngăv cho các s n ph m s a [81]. Trongăl nhăv c nông nghi păvàăch nănuôi,ăP. pentosaceus đãăc i thi n các đ c tính và kh n ngăsinhătr ng c aăđ ng v t, có th k đ nănh ăP. pentosaceus B49 phân l p t s a non c aăng i có th làm gi m táo bón b ng cách c i thi nănhuăđ ng ru t,ăt ngăkh n ngăh p th n căvàăđi n gi i,ăthúcăđ y quá trình d n truy n th n kinh

vàăthúcăđ y các l i khu n s n xu t các axit béo chu i ng n [82]. Vi c k t h p v i ba lo i LAB khác, P. pentosaceus LUHS183 tham gia vào q trình axit hóa th că n,ă d năđ n c i thi năđángăk các ch s huy t h c, phân b VSV đ ng ru tăvàăt ngă tr ng c a l n con [83]. So v i các ch ng LAB khác, Weissella là m t chi m i và đ c t p trung nghiên c u vào nh ngăn măg năđây,ăv i nh ngăđ c tính c a l i khu n đãă đ c ch ngă minhă nh ă kh n ngă s n xu t bacteriocins, exopolysaccharides, diacetyl, H2O2,... có kh n ngăkhángăkhu n [84], kh n ng chuăđi u ki n axit và mu i m t c aăđ ng ru t [58], kh n ngăbámădínhăvàăt ngăsinhăt tătrongăđ ng ru t [58, 85]. W. confusa phân l p t ru tăcáăđ c tìm th y có kh n ngăs n sinh ra folate, ch t này đóngăvaiătrịăquanătr ng trong vi c sao chép, s a ch a DNA và methy hóa, folate c ngăcóăth ho tăđ ngănh ăch t ch ng oxy hóa [86]. Bên c nh nh ng l i ích c a chúng, Weissella confusa v năđangăđ c cân nh c s d ng r ng rãi vì m t s lo ng i v r i ro ti m n c aăchúngănh ăkh n ngătanămáu,ăkh n ngălanătruy n gen kháng khángăsinh,…ă[87]. Tuy nhiên, n mă2011,ă m t s loài Weissella, bao g m c W. confusa đãăđ c thêm vào danh sách các VSV đ c phép lên men trong th c ph m c aăLiênăđoànăs a Qu c t (International Dairy Federation ậ IDF) [87]. y ban v các tác nhân sinh h c c aă c (The German Committee for Biological Agents)ăđãă x p W. confusa vào nhóm khơng có kh n ngăgâyăb nhăchoăconăng i [87]. Tóm l i, W. confusa v n là m tăđ iăt ng probiotic đ y ti măn ng,ăbênăc nhăđó,ăc n ph i thi t l p h s ăđánhăgiáăđ an toàn c aăchúngăđ có th ng d ng r ng rãi trongăt ngălai.

3.6.ă ánhăgiáăm căđ đápă ng mi n d ch c a t bào ru t Caco-2 đ i v i ch ng VSV ti măn ng

Trong nhóm 05 ch ng VSV ti măn ngăđãăđ c kh o sát, ch ng 23 (Weissella confusa) phân l p t ru t heo r ng lai và ch ng 27 (Pediococcus pentosaceus) phân l p t ru tăheoănhàăđãăghiănh n có kh n ngă c ch c hai ch ng vi khu n ch th E. coli (18,33 ± 2,67mm và 15,67 ± 2,00mm) và S. typhimurium (l năl t là 3,33 ± 0,67mm và 3,33 ± 0,67mm),ăđ ng th i th hi năcácăđ cătínhăprobioticăv t tr iănh ă kh n ngăch uăđi u ki n axit và mu i m tătrongăđi u ki n kh o sát; kh n ngăbámă dínhăv t tr i trên t bào bi u mô ru tă(97%ăvàă72%),ăcaoăh năh n so v i các ch ng còn l i, kh n ngăbámădínhătrênăCaco-2 t tăc ngăgiúpăhaiăch ng này c ch s bám

dính c a E. coli c 3 nghi m th c c nh tranh, thay th và c ch .ăDoăđó,ăch ng 23 vàă27ăđ c l a ch n là đ iăt ng ti măn ngănh tăđ th nghi m kh n ngăđi u ch nh đápă ng mi n d ch c a t bào.

Vi sinh v t gây b nh khi xâm nh păvàoăc ăth v t ch theoăconăđ ng tiêu hóa có th bám vào b m t niêm m c ru tăđ gi i phóng các ch tăgâyăđ c, gây tiêu ch y, viêm nhi măđ ng ru t [70]. LPS là thành ph n chính c a thành t bào c a vi khu n Gram âm. LPS là các phân t l ng tính có thành ph n k n c (bao g m lipid A) và ph nă aăđ c (g mălõiăcarbohydrateăvàăpolysaccharide)ăvàăđ c gi i phóng kh i thành t bào vi khu n b ng cách phân h y ho c qua quá trình ly gi i c a vi khu n [88]. N ngăđ LPS cao nh tăđ c ghi nh n là trong lòng ru t,ăn iăc ătrúăc a các vi khu năđ ng ru t.ăThôngăth ng, LPS trong lịng ru t khơng thâm nh păquaăđ c l p bi u mô ru t;ătuyănhiên,ăkhiăc ăth b r i lo n tính th m ru t, hàng rào bi u mơ ru t b l ng và khi m khuy t, lúc này LPS có th th m qua và kích thích ph n ng viêm ru t [88]. LPS s kích thích t bào s n xu t quá m c các cytokine ti năviêmănh ă IL-6, IL-8, TNF-,… t đóăkích thích t bào, gây ra ph n ng viêm quá m c có th d n d n các tri u ch ngănh ,ăviêmăru t ho i t , nhi m trùng huy t…[62, 88].

mơ hình nghiên c u in vitro, t bào bi u mô ru t Caco-2 đ cănuôiătrênăđ aă 24 gi ng v i m tăđ t bào là 2x105 t bào/ gi ng, sau 24 gi , t bào đ c x lí v i các ch ng probiotic v i m tăđ đ u vào 106 CFU/mL vàăđ c kích thích v i LPS (1g/mL)ăđ kích thích q trình viêm trong t bào Caco-2. Sau 24 gi kích thích LPS,ătácăđ ngăđápă ng mi n d ch c a các ch ng probiotic trên t bào bi u mô ru t đ căđánhăgiáăthôngăquaăm căđ bi u hi n các cytokines ti n viêmănh ăIL-6, IL-8, TNF- b ngăph ngăphápăđ nhăl ng mRNA trong t bào. K t qu nhăh ng c a hai ch ng probiotic này đ c th hi n Hình 3.8.

Các t bào Caco-2ăđ c x lí v i LPS cho th y m căđ phiên mã IL-6 và TNF-

t ngăđángăk so v iănhómăđ i ch ng khơng x lí LPS. Ch ng 23 và 27 cho th y

khơng kích thích q trình viêm c a t bào Caco-2, vì m căđ phiên mã c a các cytokine ti năviêmăkhôngăt ngăsoăv iăđ i ch ng. Khi t bào Caco-2ăđ c x lí b ng LPSăđ ng th i v i ch ng 23 và 27, m c mRNA c a IL-6 và TNF- đãăgi m đángăk

so v i th nghi m ch x lí v i LPS. Ch ng 23 và 27 cho th y m căđ phiên mã c a IL-6 gi m l năl t là 21,54% và 55,25% so v iăđ i ch ng LPS. M căđ phiên mã c a mRNA TNF- gi m 78,77% và 88,40% khi có m t ch ng 23 và 27, so v i khi t bào Caco-2 x líăLPSăđ năl . i u này cho th y r ng, hai ch ng này có kh n ngăđi u hịa mi n dchăđ i v i s bi u hi n c a các cytokine ti n viêm. Ch ng 27 cho th y kh n ngăgi m m căđ bi u hi n cytokine gây viêm t tăh năsoăv i ch ng 23.

Hình 3.8. nhăh ng c a ch ng 23 (Weissella confusa) và ch ng 27 (Pediococcus pentosaceus) trên bi u hi n gen c a các cytokine ti n viêm

K t qu đ c bi u th d i d ng giá tr trung bình c a hai thí nghi măđ c l pă±ăđ l ch chu n, v i ** P < 0.01; *** P < 0.001 và **** P < 0.0001 so v i nhóm ch x lí v i LPS.

K t qu c a nghiên c uăc ngăt ngăt v i k t qu c a các nghiên c uătr c đây. Cácăbáoăcáoătr căđâyăchoăr ng ch ph m probiotic có th t ngătácătr c ti p v i các các t bào bi u mơ ru t,ăgiúpăđi u ch nh tình tr ng viêm do LPS gây ra [89]. Các ch ng Weissella confusa đ c phân l p t bánh g o lên men và phân su tr s ă sinh trong nghiên c u c a S. Singh và c ng s n mă2018ăchoăth y chúng có kh n ngă c ch s ti t nitric oxide và IL-6 do LPSăgâyăraătrênăđ i th c bào chu t RAW 264.7; đ ng th i m căđ ti t IL-8 c a t bào Caco-2 b kích thích b i LPS gi m đángăk khi có m t các ch ng W. confusa này [89]. Trong nghiên c u c a L. Huang và c ng s , ch ng W. confusa MW01 làm gi m s bi u hi n mRNAvà gi m m c đ ti t IL-6, IL- 8 và TNF- ătrongăt bào Caco-2ăđ c kích viêm b i LPS [58]. Vì v y, tác d ngăđi u ch nhăđápă ng mi n d ch c a vi khu năđ i v i t bào bi u mơ có th đóngăvaiătrịătíchă

c c trong vi c h n ch các ph n ng viêm trong q trình viêm ru t mãn tính, giúp c i thi n các đi u ki n sinh lí c a ru t [58].

Nh ăv y, mơ hình nghiên c u in vitro, ch ng 23 (Weissella confusa) và ch ng 27 (Pediococcus pentosaceus) đãăth hi n kh n ngăđi uăhòaăđápă ng mi n d ch trong t bào m căđ phiên mã thông qua s gi m bi u hi n c a mRNA IL-6 và TNF-a trong t bào Caco-2 b kích thích b i LPS. Ngồi ra, c n có các nghiên c u ti p theo nh măđánhăgiáăkh n ngăđi u hòa m căđ d ch mã ho căđánhăgiáătrênămơă hình in vivo đ th yăđ cătácăđ ng c aăchúngăđ i v i v t ch ng.

CH NGă4.ăK T LU N VÀ KI N NGH 4.1. K t lu n

Một phần của tài liệu Phân lập, tuyển chọn các chủng probiotic từ heo rừng có khả năng ức chế escherichia coli và salmonella typhimurium và đánh giá đáp ứng sinh miễn dịch của chúng trên mô hình tế bào caco 2 (Trang 62 - 69)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(87 trang)