3 KT QU VÀ BÀN LUN
3.1 Kh oăsátăđi uk in trích lyt bt lá dâu tm tr ng và kho sát h ot tính kháng oxy
3.1.4 Kho sát q trình trích ly theo thi gian
Kh o sát q trình trích ly theo th i gian th hi năthơngăquaăhƠmăl ng DNJ, ho t tính c ch enzymeă ăậ glucosidase,ăhƠmăl ng phenolic t ng và ho t tính kháng oxy hóaăđ c kh o sát t i thí nghi m này. B tăláăđ c trích ly v i dung mơi ethanol 55%,ăcácăđi u ki n t iă uăđưăkh o sát: công su t siêu âm 150W/g, t l b t lá ậ dung môi 1:40g/mL, nhi tă đ trích ly 50oC và các kho ng th i giană thayă đ i 10 phút, 20 phút, 30 phút và 40 phút.
K t qu th c nghi m trên Hình 3.13 cho th y s thayăđ i c aăhƠmăl ng DNJ thu đ căd i các kho ng th i gian trích ly khác nhau. Th i gian trích ly càng dài, quá trình truy n kh i t dung môi vào nguyên li uăcƠngăt ngă[119]. Khiăt ngăth i gian t 10ăphútălênăβ0ăphút,ăhƠmăl ng DNJăthuăđ căt ngă1,13 l n, t 1,808 ± 0,064 mg DNJ/ g ch t khô nguyên li u lên 2,051 ± 0,085 mg DNJ/ g ch t khô nguyên li u. S giaăt ngăth i gian kéo dài hi năt ng vi tia trên b m t nguyên li u, giúp phá v t bào tri tăđ h n,ăhƠmăl ng ch t chi tăthuăđ căcaoăh n [97, 98]. Tuy nhiên, th i gian kéo dài lƠmăchoădungămôiăbayăh i,ăn ngăđ ch t chi t cao, h n ch quá trình truy n kh i [120], và s phân h y ch t chi t theo th i gian [121], làm gi m hi u qu q trình trích ly. T ngă ng, khi ti p t căt ngăth i gian t 20 phút lên 30 phút và 40ă phút,ă hƠmă l ngă DNJă thuă đ c gi m còn 1,838 ± 0,092 mg DNJ/g ch t khô nguyên li u và 1,657 ± 0,058 mg DNJ/ g ch t khô nguyên li u. Xuăh ngăt ngăt c ngăđ c quan sát th y b i Liu và cơng s (2011) khi trích ly DNJ t lá dâu t m [96].
50
Hình 3.13 Bi uăđ th hi n nhăh ng c a th iăgianătríchălyăđ năhƠmăl ng DNJ c a d ch trích lá dâu t m
a, b, c: Các ch cái khác nhau cho th y s khác bi t mang ý ngh a th ng kê (p< 0,05) Hình 3.14 cho th y s nhăh ng c a th i gian trích ly lên ho t tính c ch enzyme
ăậglucosidase c a d ch trích lá dâu t m. Khi th i gian trích ly t ngăt 10 phút lên 20 phút, giá tr IC50 gi m 1,33 l n, t 0,578 ± 0,017 mg/mL xu ng 0,434 ± 0,008 mg/mL,ăt ngă ng. Khi ti p t căt ngăth i gian trích ly lên 40 phút, giá tr IC50 t ngă lên 0,706 ± 0,007 mg/mL,ăđi uănƠyăđ ngăngh aăv i ho t tính c ch enzyme ăậ glucosidaseăđ t cao nh t th i gian trích ly 20 phút. Có th gi iăthíchăt ngăt bi n đ i c aăhƠmăl ng DNJ, th i gian trích ly càng dài, t bào b phá v càng nhi u do hi năt ng xâm th c khí, q trình khu ch tán di n ra càng d dàng, ho t ch t thu đ c càng nhi u [97, 98], ho t tính c ch càng m nh m . Tuy nhiên, th i gian trích ly quá dài, các ch t chi t b oxy hóa và phân h y theo th i gian , làm gi m ho t tính
c ch enzyme [121]. 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 10 20 30 40 H Ơm ăl ngăD N Jă( m gD N J/ gă ch t ăk hơ ) Th iăgianătríchălyă(phút) b c b a
51
Hình 3.14 Bi uăđ th hi n s nhăh ng c a th i gian trích ly trên ho t tính c ch enzymeă ăậglucosidase c a d ch trích lá dâu t m
a, b, c, d: Các ch cái khác nhau cho th y s khác bi t mang ý ngh a th ng kê (p< 0,05)
S nhăh ng c a th i gian trích ly lên hàm l ng phenolic t ngăthuăđ căđ c th hi n trên Hình 3.15.ăHƠmăl ng phenolic t ngătríchălyăđ căt ngăkhiăt ngăth i gian t 10ă đ n 20 phút, 30,981 ± 0,645 mgGAE/g ch t khô nguyên li u và 37,020 ± 0,176 mgGAE/g ch t khô nguyên li u, t ngă ng,ănh ngăgi m nh khi th i gian trích ly kéo dài. S tácăđ ng c a siêu âm làm v các t bào, t ngăc ng quá trình khu ch tán c a các polyphenols vào dung môi, nh đóăhƠmăl ng phenolic t ng thu đ căt ngăm nh β0ăphútăđ u. Tuy nhiên, th i gian tríchălyăsiêuăơmădƠiăh năd n đ n s phân h y c a các h p ch t polyphenols. S l ng vi bong bóng xâm th c t ngătrongăsu t th i gian trích ly, khi các vi bóng này b g n các b m t k t h p v i vi tia làm t năth ngăc ăch t, c th là polyphenols b phá h y [122]. Xuăh ng này c ngăđ c quan sát th y b i Irakli và c ng s (2018) khi trích ly polyphenol trong lá olive [123]. 20 phút là th i gian t iă uă đ c xác nh n khi trích ly siêu âm polyphenol trong bã h t cây gai d u, bã h t lanh và bã h t c i d u [124],ăc ngănh ă
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 10 20 30 40 IC 50 (m g/m L ) Th iăgianătríchălyă(phút) c d b a
52
trích ly siêu âm anthocyanin, phenolic và flavonoid trong v qu chôm chôm (Nephelium lappaceum L).
S thayăđ i th i gian trích ly nhăh ngăđ n ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP và DPPHăc ngăcóăxuăh ngăt ngăt s thayăđ iăhƠmăl ng phenolic t ng theo k t qu trên Hình 3.16. Ho t tính kháng oxy hóaătheoăFRAPăđ t c căđ i 20 phút v i giá tr 162,504 ± 3,200 µmol TE/g ch t khô b tălá,ăt ngăβ5,6β%ăsoăv i giá tr FRAP t i 10 phút. Bên c nhăđó,ă 20 phút, ho t tính kháng oxy hóaătheoăDPPHăđ t giá tr cao nh t 339,03 ± 8,264 µmol TE/g ch t khơ b tălá,ăt ngă14,19% so v i giá tr DPPH t i 10 phút. Qua kho ng th i gian trên, ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP và DPPH c a d chătríchăláăđ u gi m. Có th gi iăthíchăt ngăt nhăh ng c a th i gian trích lyăđ năhƠmăl ng DNJ và phenolic t ng, khi th i gian trích ly càng dài, s khu ch tán c a các c u t vƠoădungămơiăcƠngăt ng,ăhi u qu trích ly các h p ch t t tăh n,ă ho t tính kháng oxy hóaăcaoăh n.ăTuyănhiênăth i gian quá dài, s t n công c a các g c t do vào các h p ch t phenolic đ tr thành g c t do phenoxy, d năđ n s hydroxyl hóa, làm ho t tính kháng oxy hóa c a d ch trích gi măđiă[125].
Hình 3.15 Bi uăđ th hi n nhăh ng c a th iăgianătríchălyăđ năhƠmăl ng phenolic t ng c a d ch trích lá dâu t m
a, b, c: Các ch cái khác nhau cho th y s khác bi t mang ý ngh a th ng kê (p< 0,05) 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 10 20 30 40 H Ơm ăl ngăp he nol ic ătn gă (mg G AE /gă ch t ăk hô ) Th iăgianătríchălyă(phút) c c b a
53
Hình 3.16 Bi uă đ th hi n nhă h ng c a th iă giană tríchă lyă đ n ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP và DPPH c a d ch trích lá dâu t m
a, b, c, d, e, f, g
: Các ch cái khác nhau cho th y s khác bi t mang ý ngh a th ng kê (p< 0,05)
T các k t qu trên,ăβ0ăphútăđ c ch n là th i gian thích h p đ trích ly các ho t ch t trong b t lá dâu t m tr ng. Quy lu t nhăh ng c a th i gian trích ly t ngăt c ngăđ c m t s tác gi báo cáo khi trích ly siêu âm ho t ch t trong v trái chôm chôm (Nephelium lappaceum L) [117] và lá tía tơ [126].
K t lu n v đi u ki n thích h p thu nh n d ch trích c a lá dâu t m tr ng
Các k t qu nghiên c uătrênăđưăxácăđ nhăđ căđi u ki n thích h păđ trích ly thu nh n d ch trích lá dâu t m tr ngăchoăhƠmăl ng DNJ cao nh t. Các k t qu đ c th hi n trong B ng 3.1.
B ng 3.1 i u ki n thích h p đ trích ly DNJ c a lá dâu t m tr ng
Thông s năv i u ki n t i thích
Cơng su t siêu âm W/g 150
T l b t lá ậ dung mơi g/mL 1:40 Nhi tăđ trích ly oC 50 Th i gian trích ly phút 20 0 50 100 150 200 250 300 350 400 10 20 30 40 µm ăT E/ gă ch t ăk hơ Th iăgianătríchălyă(phút) FRAP DPPH c g b b a e d f
54
Các dchătríchăthuăđ c t đi u ki n t i thích đ căđemăđiăcơăđ c chân không t i 40oC cho t i khi dung dchăđ t 30% ch t khô. Cao chi t đ căxácăđ nhăhƠmăl ng DNJ, ho t tính c ch enzyme ă- glucosidase theo IC50, hƠmăl ng phenolic t ng và ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP và DPPH, k t qu thuăđ c th hi n trong B ng 3.2.
B ng 3.2 HƠmăl ng DNJ, ho t tính c ch enzymeă ăậglucosidase,ăhƠmăl ng phenolic t ng, ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP và DPPH, c a d ch trích lá phenolic t ng, ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP và DPPH, c a d ch trích lá dâu t m
Ch ătiêu Tr căcơăquay Sau cô quay
HƠmă l ngă DNJă TBă (mgă DNJ/gă ch tă
khơ) 2,303 ± 0,081
a 2,207 ± 0,073a
Ho tă tínhă că ch ă enzymeă ă -
glucosidase IC50 (µg/mL) c aăd chătrích 428,78 ± 10,51
a 436,07 ± 5,29a
Ho tă tínhă că ch ă enzymeă ă -
glucosidase IC50 (µg/mL) c aăacarbose - 209,04 ± 1,66 HƠmă l ngă phenolică t ngă (mgGAE/gă
ch tăkhô) 32,355 ± 0,297
b 33,739 ± 0,647a
Giáătr ăFRAPă(µmolăTE/găch tăkhơ) 172,314 ± 3,798a 167,026 ± 1,404b Giáătr ăDPPHă(µmolăTE/găch tăkhơ) 321,593 ± 10,388a 285,201 ± 15,544b a, b
: Các ch cái khác nhau trên cùng m t hàng cho th y s khác bi t mang ý ngh a
th ng kê (p< 0,05).
QătrìnhăcơăquayăkhơngălƠmăthayăđ iăhƠmăl ng DNJ trong d ch trích lá dâu t m theo s li u trong B ng 3.2. Nguyên nhân có th là do DNJ có nhi tăđ nóng ch y cao kho ng 195 ậ 196oC và nhi tăđ sôi 361,1 ± 42,0°C [127], nên t ngăđ i n đnh khi cô quay nhi tăđ 40oC. HƠmăl ngăDNJăthuăđ c trong d ch trích lá dâu t m nghiên c u này là 2,207 ± 0,073 mgăDNJ/găch tăkhô, t ngăt ăv iănghiênăc uă c aăHao vƠăc ngăs ă(2018) khiăkh oăsátăhƠmăl ngăDNJătrênăβ4ăm uăláădơuăt mă tr ngăt iămi năNamăTrungăQu c,ăgiáătr ăDNJăn mătrongăkho ngă0,401 ± 0,003 đ n
55
5,309 ± 0,036 mg/g ch t khô [128]. Ji và c ng s (β016)ăc ngăkh o sát trên 29 m u lá dâu t m tr ng các t nh khác nhau t i Trung Qu c và th i gian thu ho ch khác nhau cho th yăhƠmăl ng DNJ trong kho ng 0,20 đ n 3,88 mg/g [80]. Theo Lou và c ng s (2011), v trí lá trên cây, tính ch tăđ t tr ng, y u t khí h u và th i gian thu ho ch là nh ng y u t nhăh ngă đ n hƠmăl ng DNJ c a lá cây dâu t m tr ng (Morus alba) [129].
Ho t tính c ch enzyme ăậ glucosidase c aăláădơuăt măcóăgiáătr ăIC50 là 436,07 ± 5,29 µg/mL, cao g pă β,08ă l nă soă v iă IC50 c aă acarbose,ă cóă giáă tr ă209,04 ± 1,66 µg/mL,ăđ ngăngh aăho tătínhă căch ăenzymeăc aăd chătríchăth păh năacarboseăβ,08ă l n.ăAcarboseălƠăm tăch tăcóăho tătínhă căch ă ăậ glucosidase khá cao t ngăh păt ă Actinoplanes sp. SE50 nh vào ái l c cao c a g c acarviosine v i trung tâm ho t đ ng c a enzyme này [130]. Acarbose th hi n ho t tính c ch khơng ch trên - glucosidase mà còn trên cyclodextrin glucanotransferase và -amylase [130]. Yang và c ng s (β01β)ăđưăxácănh n giá tr IC50 ho t tính c ch enzyme -glucosidase c a d ch trích lá dâu t m tr ng n m trong kho ng 171 ậ 568 µg/mL,ăt yătheoădungă mơi trích ly,ătrongăđóăhi uăqu ăcaoănh tăkhiătríchălyăb ngăn - Butanol [31]. Liu và c ngăs ă(β015) khiăkh oăsátăho tătínhă căch ăenzymeăc aăcácăb ăph nătrênăcơyădơuă t mătr ng,ăgiáătr ăIC50ăn mătrongăkho ngă0,05ăậ 0,9 mg/mL [41]. Bênăc nhăđó,ăđi uă ki nămơiătr ngătr ngătr tăbaoăg mănhi tăđ ăvƠăchuăkìăquangăc ngă nhăh ngăđ nă ho tă tínhă că ch ă enzymeă -glucosidase c a lá dâu t m [131]. Tuy nhiên, Liu và c ngăs ă(β015) xácănh năr ngăkhơngăph iăb tăc ălúcănƠoăhƠmăl ngăDNJăcaoăthìă ho tătínhă căch ăenzymeă -glucosidase đ u cao [41].
HƠmăl ng phenolic t ng thuăđ cătr c và sau cơ quay khơng có s khác bi tăđángă k . Sutanto và c ng s (2015) c ngăxácănh n q trình cơ quay chân khơng nhi t đ d i 65oC không làm nhăh ngăđ n phenolic t ng trong d ch trích trái kh qua [132]. nghiên c uănƠy,ăhƠmăl ng phenolic trích ly t lá dâu t m tr ngăđ t 33,739 ± 0,647 mgGAE/găch tăkhô,ăn mătrongăkho ngăt ngăt ăv iănghiênăc uăc aăHao và c ngăs (2018),ăgiáătr ăphenolicăt ngătrong láădơuăt măt ă24,43 mg/g to 39,38 mg/g [128]. Quercetin, isoquercitrin, rutin, chlorogenic acid, kaempferide đ căxácăđ nhă cóăm tătrongăláădơuăt m, trongăđó,ăchlorogenic acidăcóăhƠmăl ngăcaoănh t,ăkho ngă
56
3,104 ậ 10,050 mg/găch tăkhô. Rutin và isoquercitrin là cácăh păch tăthu cănhómă flavonoidătrongăláădơuăt măvƠăisoquercitrinălƠăflavonoidăglycosideănhi uănh t, chi mă 0,537 ậ 4,498mg/găch tăkhô [133].ăHƠmăl ngăcácăh păch tăphenolicăkhácănhauăph ă thu căvƠoăv ătríăđ aălỦ, khí h u, gi ng cây,ăth iăgianăthuăho chăvƠăv ătríăláătrênăcơy [24, 25]. Theo Zou vƠăc ngăs ă(β01β)ăhƠmăl ngăphenolicătrênăláădơuăt măthuăho chă t iăcácăthángăkhácănhauătrongăn măβ01βăn mătrongăkho ngăβ8,7ă ậ 49 mg GAE/g ch tăkhơ,ătrongăđóăláăthuăho chătrong tháng 5 cóăhƠmăl ngăphenolicăt ngăcaoănh t, đ tă49ămgăGAE/găch tăkhơ [134].ă ngăth iănhómătácăgi ăc ngăch ngăminhăr ngă hƠmăl ngăphenolict ngăthayăđ iătheoăgi ngăcơy,ăn mătrongăkho ngăγ0,4ăậ 44,7 mg GAE/găch tăkhô.ă HƠmăl ng phenolic t ng c a d ch trích lá dâu t m trong nghiên c u nƠyăc ngăg n b ngăhƠmăl ng phenolic t ngăthuăđ c b ngăph ngăphápătríchă ly có h tr siêu âm trong d ch trích lá oliu (Olea europaea L.) là 37,44 mg GAE/g ch t khô [123].
Ho t tính kháng oxy hóa theo FRAP c a d ch trích gi m nh sau q trình cơ quay. Giá tr FRAPăthuăđ căđ t 167,026 ± 1,404 µmolăTE/găch tăkhơ.ăGiáătr này g năv iă giáătr ăFRAPc aăláădơuăt mtrongănghiênăc uăc a ZouăvƠăc ngăs ă(β01β)ăn mătrongă kho ngă112 ậ 158 µmolăTE/găch tăkhơ,ăph ăthu căvƠoăgi ngăcơyătr ngăvƠăth iăgiană thuăho chăláă[134].
Bên c nhăđó, giá tr DPPH sau cơ quay l i có s gi m nh 11,2% so v iătr c cô quay. M cădùăhƠmăl ng phenolic t ng h uănh ăkhôngăthayăđ i, tuy nhiên m t s ch t màu trong lá dâu t m, c th là chlorophyll, c ngăđóngăvaiătrịăkháng oxy hóa, gi m hƠmăl ng khi nhi tăđ x lí trên 35oC, có th d n t i gi m ho t tính kháng oxy hóa c a d ch trích [114]. Theo Boeing và c ng s (2014), giá tr DPPH c a d ch trích trái dâu t măđenălà 394,89 µmolăTE/găch tăkhơ [135]. Polumackanycz và c ng s xácăđ nhăđ c giá tr DPPH lá dâu t m tr ng kho ng 233,8 ậ 357,4 µmol TE/g ch tăkhơ v iăd chătrích h năh p methanolă:ăn că(80:20) [136]. Memon vƠăc ngăs ă (2019) c ngă xácănh năgiáătr ăDPPHăc aăláă dơuăt mătr ngă(Morus alba)ăđ t 65,99 µmol đ ngăl ng quercetin/100 g [137].
57
3.2 B sung cao trích vào bánh quy choăng iă năkiêng, kh o sát s nh h ng c a t l b sung dchătríchăđ n ch tăl ng c a s n ph m