Máy s y phun B t s y phun t d ch trích sau khi trích ly Hình 1. 2 Máy s y phun và b t s y phun t d ch trích ly
PH L Că2:ăCỄCăPH NGăPHỄPăPHÂNăTệCH A. Xácăđ nhăhƠmăl ng flavonoid t ng s
Nguyên t c c a ph ng pháp nƠy lƠ nhơm clorua khơng ch có th t o ph c b n v i axit v i flavon và flavonol, có nhóm cacbonyl C-4 và nhóm hydroxyl C-3 ho c C5, mà còn t o ph c không b n v i axit v i các nhóm catechol hydroxyl trong vịng A ho c vịng B c a flavonoid (Huang, et al., 2018).
S đ ph n ng gi a flavonoid và nhôm clorua, t o thành ph c h p flavonoid-Al3 + b n v ng (Amorim, et al., 2008)
Phơnătíchăđ nhăl ng
T ng hƠm l ng flavonoid (TFC) đ c xác đ nh b ng ph ng pháp so màu
đ c mô t b i Hung và Morita (2008) v i m t chút thay đ i. M t th tích (0,5 ml) c a m i d ch chi t đ c tr n v i 1,5 ml etanol 95%, 0,1 ml kali axetat 1M và 0,1 ml dung dch nhơm clorua 10%. Sau đó, th tích đ c thêm đ n 5 ml b ng n c c t. Các ng đ c tr n k b ng máy tr n xoáy và nhi t đ phịng trong bóng t i
trong γ0 phút. h p th c a các dung d ch đ c đo b ng máy quang ph b c sóng 415. K t qu đ c bi u th b ng miligam rutin đ ng l ng trên gam m u (RE mg / g m u db).
ng chu n
ng chu n đ c chu n b b ng cách s d ng dung dch rutin vƠ đ c bi u th b ng microgram rutin t ng đ ng (RE) trên m i ml (µg RE / ml). Dung d ch
Rutin đ c pha loưng thƠnh β0, 40, 80, 100, 150 vƠ β00 g / ml đ t o thƠnh đ ng chu n.
Chu n b các dung d ch chu n rutin có n ng đ (µg / ml): 20; 40; 60; 80; 100, 150, 200 t dung d ch chu n 100 µg / ml.
Rutin stock solution concentration (µg/ml)
Volume of stock rutin solution (ml) Volume of Ethanol (ml) 20 2 8 40 4 6 60 6 4 80 8 2 100 10 0
Cho 0,5 ml dung d ch rutin vào ng nghi m Thêm 0,1 ml dung d ch AlCl3 10%, l c đ u. Thêm 0,1 dung d ch CH3COOK 1M, l c đ u. Thêm 1,5 ml dung d ch Ethanol 95%
Thêm β,8 ml n c c t và l c đ u.
yên ng nghi m nhi t đ phòng trong 30 phút, tránh ánh sáng.
o đ h p th b c sóng 415 nm.
Phân tích m u
Pha lỗng m u theo t l thích h p đ đ h p th n m trong đ ng chu n
Các b c ti p theo t ng t nh xơy d ng đ ng chu n, nh ng thay dung
d ch chu n axit gallic b ng m u chi t đư pha loưng.
M u tr ng đ c th c hi n theo cách t ng t nh ng thay dch chi t đư pha
lỗng b ng dung mơi chi t.
K t qu
HƠm l ng TFC trong 1 gam m u tr ng l ng khơ đ c tính nh sau:
TFC = (mgRE/gDW)
A: HƠm l ng Rutin đ c xác đ nh t đ ng chu n (µg / ml) V: t ng th tích d ch chi t (ml)
n: h s pha loưng
m: sample weight (g) W: moisture content (%)
S li u xây d ngăđ ng chu n Rutin
concentration (µg/ml)
0 20 40 60 80 100 150 200
th đ ng chu n c a Rutin đo b c sóng 415 nm
B. Xácăđ nh ho t tính ch ng oxy hóa theo DPPH
Nguyên t c
Ho t tính kháng oxy hóa c a m u dch trích theo ph ng pháp DPPH đ c
xác đnh d a trên ph n ng c a các ch t ch ng oxy hóa có s n trong m u th v i g c DPPH (hay còn g i là s d p t t các g c DPPH) [76]. DPPH là m t g c t do ch a nito, n đ nh, có mƠu tím. h p thu c c đ i c a DPPH trong ethanol ho c
methanol đ c ghi nh n t i b c sóng 517nm ho c 515nm. Khi cho ch t kháng oxy hóa vào dung d ch ch a DPPH, các ch t kháng oxy hóa s kh g c DPPH thành DPPH có màu vàng nh t, do đó lƠm gi m đ h p thu c a DPPH.
C ng đ màu c a thu c th DPPH t l ngh ch v i n ng đ các ch t ch ng oxy hóa và th i gian ph n ng, đ c đo b ng máy quang ph so màu. Trong nghiên c u nƠy, đ h p thu ban đ u c a dung d ch DPPH trong dung môi methanol là 1,1 ± 0,02, th i gian cho ph n ng lƠ 60 phút, đo đ h p thu t i b c sóng 517nm. Trolox
đ c s d ng làm ch t chu n cho ph n ng này. Ho t tính kháng oxy hóa theo
Cách th c hi n Hóa ch t:
- Dung d ch DPPH 6.10-5 M trong methanol: cân 0.0118g DPPH và hịa tan b ng dung mơi methanol (dùng que khu y t , khu y kho ng 20
phút cho DPPH tan hoƠn toƠn) vƠ cho vƠo bình đ nh m c 500 ml. B o qu n tránh ánh sáng và s d ng trong ngày. Ki m tra l i đ h p thu c a DPPH tr c m i l n đo, hi u ch nh sao cho giá tr này n m trong kho ng 1.1 ± 0.02.
- Dung dch Trolox 1000 M: cơn 0.0β5g trolox vƠ đ nh m c lên 100 ml b ng ethanol 99.5 %.
D ng đ ng chu n
Pha loãng dung d ch chu n Trolox n ng đ 1000 M thƠnh các dung d ch n ng đ β00; 400; 600; 800; 1000 M
N ngăđ dung dich troloxă( M) Th tích dung d ch g c trolox (ml) Th tíchăn c c t (ml) 200 2 8 400 4 6 600 6 4 800 8 2 1000 10 0
- Cho 0.1 ml các dung d ch troox có n ng đ β00, 400, 600, 800, 1000 M vƠo ng nghi m.
- Cho 3.9 ml dung dch DPPH đư pha trên vào m i ng nghi m. - L c đ u, nhi t đ phịng trong bóng t i 60 phút.
- o đ h p thu b c sóng 517 nm.
- D ng đ ng chu n c a n ng đ Trolox ( g/ml) theo đ h p thu.
Phân tích m u
Pha lỗng m u theo t l thích h p sao cho đ h p thu n m trong đ ng chu n. - Các b c ti p theo th c hi n t ng t nh cách xơy d ng đ ng chu n nh ng
thay dung d ch chu n Trolox b ng m u d ch trích pha lỗng.
- M u tr ng đ c th c hi n t ng t nh ng thay m u d ch trích đư pha loưng b ng dung mơi trích ly.
K t qu :
Ho t tính DPPH có trong 1 gram ngun li u khơ đ c tính nh sau:
Ho t tính =
Trong đó:
A: hƠm l ng Trolox xác đnh t đ ng chu n ( M)
V: t ng th tích d ch chi t (ml) n: h s pha loãng
m: kh i l ng m u (g)
PH L C 3: K T QU X LÝ S LI U
B ng 3. 2 B ng k t qu so sánh nh h ng c a nhi t đ ch n đ n hàm l ng ạlavonoids đ c trích ly
Nghi măth că(oC) HƠmăl ngăTFCă(mg RE/g ch tăkhôănguyênăli u)
70 21,64a±1,87
80 23,29a±2,72
90 27,53b±1,81
100 22,79a±1,14
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác nhau
có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 3 B ng k t qu so sánh nh h ng c a nhi t đ ch n đ n ho t tính ch ng
oxy hóa theo DPPH
Nghi măth c HƠmăl ngăDPPH (µmol TE/g ch tăkhơăngunăli u)
70 589,08a±8,53
80 647,95b±11,18
90 679,91c±4,11
100 654,42b±6,14
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác nhau có
B ng 3. 4 B ng k t qu so sánh nh h ng c a th i gian ch n đ n hàm l ng ạlavonoids đ c trích ly
Nghi măth c HƠmăl ngăTFCă(mg RE/g ch tăkhôănguyênăli u)
15 17,93a±1,43 30 24,22b±1,41 45 28,24d±1,51 60 27,08cd±1,79 75 24,66bc±1,34 90 22,63b±0,75
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác
nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 5 B ng k t qu so sánh nh h ng c a th i gian ch n đ n ho t tính ch ng
oxy hóa theo DPPH
Nghi măth c HƠmăl ngăDPPHă(µmolăTE/g ch tăkhơăngunăli u)
15 534,78a±14,12
30 650,72b±12,70
45 675,91c±13,40
60 682,52c±9,76
90 635,07b±12,06
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác nhau
có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 6 B ng k t qu so sánh nh h ng c a n ng đ dung môi đ n hàm l ng ạlavonoids đ c trích ly
N ngăđ ă(%) TFC (mg RE/g ch tăkhôănguyênăli u)
40 24,11a±1,24
50 28,09b±1,54
60 35,17c±1,32
70 27,74b±1,74
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì
khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 7 B ng k t qu so sánh nh h ng c a n ng đ dung môi đ n ho t tính ch ng oxy hóa theo DPPả
N ngăđ ă%(v/v) DPPH (µmol TE/g ch tăkhơăngunăli u)
40 607,74b±22,72
50 679,92c±16,56
70 561,82a±15,17
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t
thì khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 8 B ng k t qu so sánh nh h ng c a nhi t đ trích ly đ n hàm l ng ạavonoids đ c trích ly
Nhi tăđ ă(oC) TFC (mg RE/g ch tăkhôănguyênăli u)
40 34,19a±1,96
50 36,58a±1,84
60 37,20a±1,58
70 44,23c±1,49
80 40,61b±1,59
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t
thì khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 9 B ng k t qu so sánh nh h ng c a nhi t đ trích ly đ n ho t tính ch ng
oxy hóa theo DPPH
Nhi tăđ ă(oC) DPPH (µmol TE/g ch tăkhơăngunăli u)
40 748,89a±1,96
60 786,14ab±1,58
70 885,99c±1,49
80 816,65b±1,59
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì
khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 10 B ng k t qu so sánh nh h ng c a th i gian trích ly đ n hàm l ng ạavonoids đ c trích ly
Th iăgiană(phút) TFC (mg RE/g ch tăkhôănguyênăli u)
0 26,32a±2,10 10 38,96b±1,49 20 39,96bc±2,49 30 43,59cd±2,28 40 44,26d±3,35 50 45,75de±2,74 60 51,86f±2,64 70 50,52f±1,51 80 49,52ef±1,54
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì
B ng 3. 11 B ng k t qu so sánh nh h ng c a th i gian trích ly đ n ho t tính ch ng oxy hóa theo DPPả
Th iăgian DPPH (µmol TE/g ch tăkhôănguyênăli u)
0 671,53a±15,10 10 827,69b±5,55 20 832,03bc±3,87 30 868,23d±9,63 40 874,90d±10,46 50 881,94d±11,87 60 920,85e±10,54 70 910,52e±11,88 80 848,06c±11,65
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 12 B ng k t qu so sánh nh h ng c a t l nguyên li u/dung môi đ n hàm l ng ạavonoids đ c trích ly
T l TFC (mg RE/g ch t khô nguyên li u)
1:6 47,50a±2,75
1:8 64,00e±1,65
1:9 53,92bc±1,38
1:10 58,13d±1,38
1:11 55,75cd±1,10
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 13 B ng k t qu so sánh nh h ng c a t l nguyên li u/dung mơi đ n ho t tính ch ng oxy hóa theo DPPả
T ăl DPPH (µmol TE/g ch tăkhơăngunăli u)
1:6 989,95a±6,84 1:7 1012,54b±4,39 1:8 1033,69d±6,73 1:9 1027,17cd±3,35 1:10 1022,78c±3,35 1:11 1024,24c±4,56
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 14 B ng k t qu so sánh nh h ng c a pả đ n hàm l ng ạavonoids đ c trích ly
pH TFC (mg RE/găch tăkhơngunăli u)
4 45,08a±2,15 4,5 47,17b±1,78 5 62,83c±1,87 5,6 63,45cd±1,36 6 62,85d±1,84 6,5 62,00d±1,72
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì
khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 3. 15 B ng k t qu so sánh nh h ng c a pả đ n ho t tính ch ng oxy hóa
theo DPPH
pH DPPH (µmol TE/g ch tăkhôănguyênăli u)
4 921,10a±3,35
4,5 982,88b±5,81
5 1029,36e±4,57
5,6 1025,24e±5,51
6,5 1000,83c±3,35
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t thì
khác nhau có ý ngh a v m t th ng kê (P < 0,05)
B ng 4. 8 nh h ng c a th i gian b o qu n đ n kh n ng kháng oxy hóa c a d ch
n c gi i khát sau khi đ c b sung b t s y phun t d ch trích ly lá v i
Ngày DPPH (µmol TE/g ch t khơ nguyên li u)
0 86,5c ± 8,95 3 86,2ab ± 11,14 6 86,43ab ± 11,25 9 86,7ab ± 10,14 12 86,0ab ± 5,13 15 85,5ab ± 10,22 18 85,6ab ± 10,22 21 85,4ab ± 10,22 24 84,9ab ± 12,56 27 84,9ab ± 12,67 30 84,4a ± 16,09
Các giá tr đi kèm v i các ch cái khác nhau trong các c t
PH N LÝ L CH TRÍCH NGANG
H và tên: NGUY N CHÍ THÀNH N i sinh: Tây Ninh
a ch : Huy n Hòa Thành, Thành ph Tây Ninh, T nh Tây Ninh.
Quá trình đƠo t o:
Th i gian Tr ngăđƠoăt o Chuyên ngành o t o
2012-2016 Tr ng i h c Nông Lâm TP HCM Cơng ngh th c ph m Chính quy 2019 ậđ n nay Tr ng i h c Bách Khoa TP HCM Công ngh th c ph m ( ang theo h c)