- Độ bắt màu phẩm nhuộm không đồng nhất giữa các tiêu bản do tiêu bản hiển vi dịch hoàn chuột đồng được thực hiện trên nhiều đối tượng chuột có độ tuổi khác nhau
2.2.8. Nhuộm Hematoxyline và Eosin:
Mẫu bắt màu tốt hay xấu phụ thuộc chủ yếu vào thời gian nhuộm, chất lượng thuốc nhuộm và thời gian chín của thuốc nhuộm.
Trong suốt quá trình nhuộm cần phải tiến hành liên tục, tránh mẫu khô cồn hay xylen (vì như thế sẽ làm đen mẫu)
Sau mỗi lọ ngâm, lame cần được lau khô bằng giấy thấm (tránh chạm vào mẫu) rồi mới ngâm tiếp qua dung dịch tiếp theo để tránh sự sai lệch nồng độ của các lọ ngâm mẫu.
Để đảm bảo cho tiêu bản bắt màu tương phản, rõ, phân biệt được cấu trúc mô chúng tôi đã tiến hành thử nghiệm như sau:
Vật liệu Thời gian Kết quả Hematoxylin (1:4) Eosin Y 10 phút 10 phút
Mẫu ăn màu Eosin nhưng màu Hematoxylin chưa rõ => Mẫu không tương phản.
Hematoxylin (1:4)
Eosin Y
10 phút 5 phút
Mẫu ăn màu Hematoxylin nhưng Eosin quá nhạt không tương phản được, không phân biệt rõ được các tế bào. Hematoxylin
(1:4) Eosin Y
15phút 15phút
Mẫu ăn màu Hematoxylin và Eosin nhưng vẫn không tương phản được, không phân biệt rõ được các tế bào. Hematoxylin
(1:4) Eosin Y
20 phút 20 phút
Mẫu ăn màu Hematoxylin và Eosin rõ, nhưng chưa tương phản giữa các tế bào. màu của Eosin hơi đỏ Hematoxylin
(1:4) Eosin Y
30 phút 15 phút
Mẫu ăn màu Hematoxylin tốt nhưng màu của Eosin Y quá đỏ nên không tương phản
Hematoxylin (1:4)
15 phút Mẫu ăn màu Hematoxylin và Eosin Y tốt, tương phản tốt giữa các tế bào, các lòng ống sinh tinh rỏ
Eosin Y 20 phút
Kết quả: Thời gian nhuộm mẫu thích hợp nhất được chọn là: + Nhuộm Hematoxylin 15 phút
+ Nhuộm Eosin 20 phút.
2.2.9. Khử nước:
Khử nước trong cồn có nồng độ tăng dần đến cồn tuyệt đối nhằm đảm bảo cho mẫu đã được khử nước hoàn toàn, tạo điều kiện tốt nhất cho mẫu tồn trữ được lâu sau khi đã gắn mẫu trong Baume Canada.
Trong giai đoạn này, dùng đầu kim mũi giáo quấn gòn tẩm cồn 900 để chùi sạch các vết thuốc nhuộm, các lớp Albumin dính bên ngoài mẫu ở trên lame.