4.1. Trở ngại và biện pháp khắc phục khi đúc block (khối mẫu)
BIẾN CỐ NGUYÊN NHÂN SỬA CHỮA
Khối block dễ vỡ, có nhiều hạt, nhiều đốm trắng
Parafin xấu, bẩn Thay parafin mới, nguyên chất.
Mẫu khó cắt hay khi cắt thì cả khối bị vỡ thành từng mảnh vụn
Parafin quá cứng, đúc khuôn không cẩn thận, vùi trong parafin quá lâu với nhiệt độ cao
Thay Parafin cho mềm hơn, giảm thời gian vùi trong parafin xuống với nhiệt độ thích hợp
Mẫu tách rời khỏi khối Parafin, mẫu có thể bị lúc lắc trong khối Parafin
Parafin quá nguội khi đúc, Parafin ngấm không đều bên trong khối mẫu
Đúc lại, tăng thời gian ngâm mẫu trong Parafin ở nhiệt độ thích hợp, lắc mẫu thường xuyên khi ngâm. Sau vài tuần, khối
mẫu đúc bị cong lại
Khử nước chưa tốt Làm lại từ khâu khử nước: tăng thời gian khử nước Luận văn tốt nghiệp 28
và rạn nứt, khó cắt, tổ chức mô bị xước xơ.
bằng cách ngâm mẫu trong cồn tuyệt đối.
4.2. Trở ngại và biện pháp khắc phục khi cắt mẫu:
BIẾN CỐ NGUYÊN NHÂN SỬA CHỮA
Mẫu bị cong về một bên
- Hai cạnh trên và dưới của khối mẫu hình thang không song song. - Lưỡi dao một bên không sắc bén (có thể là bên uốn cong đã bị cắt rồi) - Một trong 2 cạnh bị nóng hơn cạnh kia. - Gọt mẫu lại - Thử cắt ở một vị trí khác trên dao
- Làm cho cả khối mẫu lạnh. Tránh xa các đèn, lửa (đèn cồn)
Các lát cắt lúc dày lúc mỏng hay lát mỏng bị nhăn lại
- Các đinh ốc cố định chưa được xiết chặt.
- Dao không sắc hoặc bị mẻ.
- Xiết chặt các đinh ốc - Thay dao hoặc thử một vị trí khác trên dao.
Mẫu tách rời khỏi khối Parafin khi cắt lát
- Nhiệt độ tẩm Parafin quá cao, mẫu bị cứng, giòn
- Chưa rút hết nước trong mẫu - Mẫu chưa ngấm đều Parafin
- Giảm nhiệt độ tẩm Parafin xuống, tăng thời gian tẩm
- Khử nước lại từ cồn 900, cồn tuyệt đối.
- Tăng thời gian tẩm parafin
Parafin bị chẻ làm đôi ở chỗ có mẫu
- Dao bị mẻ hoặc bị bẩn - Thay dao khác hoặc thử một vị trí khác trên dao
Mặt cắt bị xước.
- Lưỡi lam có chỗ bị mẻ hoặc lưỡi lam không còn bén.
- Khối mẫu có chỗ quá cứng hoặc có những hạt bụi cát
- Thử một vị trí khác trên lưỡi lam hoặc thay lưỡi lam khác
- Đúc khuôn lại bằng Parafin nguyên chất
Lát cắt bị co rúm, nhăn nheo không thành băng - Lát cắt quá mỏng, - Nhiệt độ phòng cao - Cắt dày hơn - Để máy cắt gần nguồn lạnh
- Độ nghiêng của bàn để dao chưa hợp lý - Điều chỉnh lại độ nghiêng bàn để dao Lát cắt không thành băng mà rời ra và bị cuốn lại - Cắt quá dày
- Parafin quá cứng hay nhiệt độ phòng quá thấp
- Cắt mỏng hơn
- Thay Parafin khác mềm hơn hoặc tăng nhiệt độ phòng (có thể cắt vào buổi trưa)
Lát cắt dính hết vào dao
- Parafin quá mềm
- Nhiệt độ phòng quá cao
- Đúc lại với Parafin cứng hơn - Để máy cắt gần nguồn lạnh (có thể cắt vào buối sớm hoặc tối) Cát mảnh cắt bị các vật kim khí hút, khó thao tác - Các mảnh cắt bị tích điện - Làm ấm bằng cách làm ấm quanh nơi cắt. Hoặc ngừng cắt một thời gian
4.3. Trở ngại và biện pháp khắc phục khi tải mẫu lên lame:
BIẾN CỐ NGUYÊN NHÂN SỬA CHỮA
Mẫu bị nhăn sau khi sấy dán
Lát cắt bị nhăn và khi tải mẫu lên lame nước tải không đủ ấm
Dùng nước ấm để tải mẫu lên lame
Mẫu không dính vào lame
- Albumin không tốt, biến tính - Albumin quá loãng
- Thời gian để mẫu tải dưới đèn tròn 75w chưa đủ
- Thay Albumin
- Pha Albumin đậm đặc hơn
- Tăng thời gian lên cho mẫu dính chặt hơn
- Lát cắt bị gấp nếp - Lát cắt bị vặn, thao tác tải mẫu không cẩn thận
- Cận thận lúc tải mẫu, sao cho mẫu tải đều trên giọt nước ấm
- Tiêu bản không trong, có những hạt nhỏ
- Lame chưa được rửa kỹ trước khi tải mẫu lên
- Chất lượng lame không tốt
- Rửa kỹ lame
- Thay lame mới tốt hơn
4.4. Trở ngại và biện pháp khắc phục khi nhuộm mẫu:
BIẾN CỐ NGUYÊN NHÂN SỬA CHỮA
Mẫu sậm màu Eosin Y
- Thời gian nhộm Eosin Y quá lâu
- Nồng độ Eosin Y cao
- Giảm thời gian nhuộm xuống
- Pha loãng Eosin Y Mẫu không bắt
màu Hematoxyline Thời gian nhuộm quá ít
Tăng thời gian nhuộm Hematoxylin lên.
Mẫu không phân biệt rõ được các vùng trong tinh hoàn
Thời gian nhuộm H&E chưa cân đối
Điều chỉnh thời gian nhuộm Hematoxyline và Eosin cho cân đối
Tiêu bản bị nhiễm bẩn
Thuốc nhuộm bị cặn hoặc các lọ cồn, xylen bị cặn
Lọc thuốc nhuộm, thay các lọ hoá chất.