Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.2. Phân lập các chủng vi khuẩn có khả năng sử dụng PAH
Làm giàu vi sinh vật
- Nguyên tắc:Tạo mơi trường thích hợp làm gia tăng số lượng vsv từ mẫu
thu thập ban đầu trên nguồn cơ chất quan tâm.
- Tiến hành:Hút 10 ml đối với mẫu nước và 3g đối với mẫu bùn vào bình
tam giác thể tích 250 ml có chứa 50 ml mơi trường muối khống Gost dịch, 0,1% vitamin, 50 ppm hỗn hợp PAH (naphthalene, fluorene, anthracene, pyrene) và 1 bình có bổ sung thêm 0,5% glucose. Ni lắc các bình ở 200 vịng/phút, ở 30oC, sau 7 ngày nuôi, chuyển 10% dịch làm giàu lần 1 sang bình ni cấy thứ 2 chứa các thành phần giống như ở lần làm giàu thứ nhất, q trình ni cấy làm giàu được tiến hành 3 lần.
Phân lập
- Tìm kiếm tập đồn vsv và phân lập một số chủng vi khuẩn có khả năng sử PAH
23
Nguyên tắc:
Thu được tập đồn vsv có khả năng phát triển trên mơi trường chứa PAH. Từ đó
tách rời các tế bào vsv dựa vào hình thái và màu sắc khuẩn lạc để thu các chủng thuần.
Tiến hành:
- Môi trường Gost sau khi khử trùng để nguội tới khoảng 50 - 60oC, tiến
hành đổ vào các đĩa petri (đã tiệt trùng) trong box cấy vô trùng. Mỗi đĩa đổ khoảng
20 ml môi trường.
- Sau khi thạch đông (đĩa khô), hút 0,1 ml dịch mẫu đã pha loãng tới hạn ở nồng độ 10-4, 10-6, 10-8 vào các đĩa thạch này, Gạt kiểm tra các mẫu sau khi làm giàu
lần 1, lần 2 và lần 3.
- Dùng que trang trải đều mẫu khắp bề mặt thạch, tiếp tục sử dụng que này
để trải đều khắp bề mặt thạch ở đĩa thứ 2, thứ 3.
- Các đĩa sau khi cấy gạt được bao gói cẩn thận và ni ở tủ ấm 30oC cho tới khi xuất hiện các khuẩn lạc riêng rẽ.
- Đánh dấu các khuẩn lạc khác nhau dựa vào hình thái và màu sắc khuẩn lạc.