1. Thu mẫu
Để việc chẩn đoân bệnh được nhanh vă chính xâc, nín đến địa điểm thu mẫu sớm nhất khi có dấu hiện bệnh để thu mẫu gần chết. Hiện nay, những tóm tắt về câch thu mẫu tiíu chuẩn chủ yếu dựa văo lý thuyết hơn lă thực tế. Nín đến tận nơi để quan sât vă ghi nhận dấu hiệu bệnh một câch thực tế, hỏi cụ thể người ni về tình hình bệnh xảy ra, triệu chứng bệnh lý hay tỉ lệ chết. Việc tổng hợp những thông tin năy rất quan trọng nhằm lăm cơ cở cho việc chẩn đoân. Một hệ thống lưu trữ tập hợp những thông tin theo thứ tự của mẫu thu trong phịng thí nghiệm lă hết sức cần thiết. Mỗi trường hợp cần có phiếu xĩt nghiệm hoăn chỉnh theo biểu mẫu nhằm cung cấp những thơng tin liín quan giữa câc loại bệnh đang được nghiín cứu ngoăi hiện trường cũng như trong phịng thí nghiệm.
Bước đầu tiín khi thu mẫu để chẩn đôn bệnh lă quan sât tổng quât cả quần thể, sau đó kiểm tra từng câ thể (ít nhất lă 10 mẫu có dấu hiệu bệnh lý). Nín chọn câc mẫu gần chết, nhất lă những mẫu có dấu hiệu bệnh rõ răng. Mẫu gần chết lă mẫu tốt nhất để chẩn đôn bệnh vì thường những mẫu năy tiềm ẩn nhiều loại bệnh, nhất lă vi khuẩn, virus vă ký sinh trùng. Đối với mẫu chết, đặc biệt lă mẫu câ, thường hạn chế việc chẩn đôn bệnh một câch chính xâc vì khi câ chết câc loăi vi khuẩn khơng phải lă vi khuẩn gđy bệnh cũng phât triển nhanh trong câc nội quan hoặc trong nhớt câ gđy khó khăn cho việc phđn lập vi khuẩn gđy bệnh.
- Tìm hiểu điều kiện ao ương vă câc yếu tố lý học - Đo câc yếu tố môi trường (Oxy, nhiệt độ, pH, độ mặn)
- Quan sât mẫu tôm bệnh vă tôm khỏe
Ghi nhận thơng tin từ chỗ người ni tại mỗi điểm: nín thu thập thông tin về vụ nuôi
từ nhiều hộ ni để lăm cơ sở tổng hợp ngun nhđn xảy ra bệnh. Những thơng tin năy thường nói lín ảnh hưởng, chiều hướng bệnh vă những trở ngại của câc hộ nuôi khâc hoặc khu vực lđn cận, đặc biệt lă ao ni có cùng nguồn giống.
Câc thơng tin cần thu thập lă: - Vị trí của trại nuôi
- Chi tiết về nguồn nước cung cấp
- Kế hoạch nông hộ
- Chu kỳ sản xuất
- Công việc hằng ngăy
- Thức ăn
- Xử lý nước thải
- Bệnh vă những trở ngại khâc - Trở ngại hiện nay
- Lời khuyín
Thu mẫu tôm sắp chết: Số lượng mẫu tối thiểu cần thu lă khoảng 10 mẫu với dấu hiệu
bệnh lý rõ răng. Mẫu tơm sắp chết thường có mău tối, bơi lờ đờ vă nổi trín mặt nước. Một vấn đề quan trọng cần cđn nhắc khi thu mẫu lă trânh gđy sốc vật ni. Trong tình huống có tơm chết nhưng khơng có dấu hiệu bệnh lý thì cần dựa văo những thông tin từ người nuôi vă nhờ sự giúp đỡ của câc nhă nghiín cứu về môi trường hay về độc tố. Trong nhiều trường hợp, sự thănh cơng trong việc giải quyết tình trạng dịch bệnh ở một khu vực ni năo đó lă nhờ văo những thơng tin có sẵn vă những kinh nghiệm thực tế.
2. Chuyển mẫu đến phịng thí nghiệm
Phương phâp chuyển mẫu sống: Mẫu vật được chứa trong bao nylon (2 lớp)
với lượng nước khoảng 20-30 % thể tích bao vă có bơm oxy. Mỗi túi có thể chứa 5 câ thể (100g/câ thể) hoặc với kích cỡ mẫu vật nhỏ có thể chuyển nhiều hơn 5 câ thể vă vận chuyển đến phịng thí nghiệm trong vịng 12 - 24 giờ. Câ thể có kích thước lớn nín dùng dụng cụ vận chuyển có kích cỡ lớn hơn để trânh gđy sốc hoặc lăm xđy xât. Bín cạnh đó, câc mẫu vật sắp chết cũng có thể được chuyển bằng phương phâp trín.
Trường hợp khơng thể sử dụng bao nylon có bơm oxy thì nín giữ lạnh. Điều
quan trọng lă phải lăm lạnh mẫu nhanh nhất sau khi thu mẫu. Trong trường hợp thu
mẫu trong thời tiết nóng cần lăm lạnh mẫu ngay tại ao. Chuyển mẫu đến phịng thí
3. Bảo quản mẫu
Tùy theo yíu cầu phđn tích vă thời gian trữ mă ta có một số phương phâp cơ bản như sau:
• Lăm lạnh: Trữ mẫu trong ngăn lạnh hay trong thùng có chứa nước đâ nhằm
lăm ngưng sự phât triển của vi khuẩn vă câc tế băo khâc mă không gđy hiện tượng vỡ tế băo (tế băo mâu).
• Đơng lạnh: Đơng lạnh mẫu bằng tủ đông lạnh hay bằng nitơ lỏng. Phương phâp năy có nhược điểm lă lăm mất dấu hiệu bệnh lý ở mơ mẫu vật tuy nhiín đơng lạnh không lăm chết tế băo vi khuẩn vă virus. Cần thực hiện thao tâc đông lạnh nhanh để trânh nhiễm câc vi khuẩn khâc.
• Cố định mẫu bằng hóa chất: Thường dùng phương phâp năy cho câc nghiín
cứu về mơ học. Q trình cố định mẫu căng nhanh, câc mơ tế băo căng được giữ ngun. Câc mẫu vật có kích thước nhỏ sẽ ngấm hóa chất nhanh vă định
hình tốt. Những mẫu vật lớn cần được cắt nhỏ với độ dăy khoảng 3-4mm.
Hóa chất thường được sử dụng để cố định mẫu tôm lă dung dịch Davidson’s có cơng thức như sau:
95% ethyl alcohol 30ml
Formalin 20ml
Acid acetic 10ml
Nước cất 30ml
• Lăm khơ: lấy một giọt mâu để lín lame kính, lăm khơ vă gửi đến phịng thí nghiệm để phđn tích. Ví dụ: có thể để mẫu mâu trong khơng khí 1-2 ngăy cho khơ, nhúng văo methanol tuyệt đối trong 4 phút vă để khơ. Mẫu có thể được giữ rất lđu.