Nhận xét: PGT có 2 nhóm carbonyl trong cấu trúc hóa học. Số sóng của nhóm
carbonyl trên phổ hồng ngoại thường nằm trong khoảng từ 1690 – 1725 cm-1. Số sóng của nhóm carbonyl có thể bị thay đổi tùy thuộc vào nhóm nguyên tử gắn với nhóm carbonyl, sức căng vịng, liên kết hydro, cộng hưởng Fermi...
Cụ thể, vùng 1701 cm-1 là nhóm carbonyl riêng rẽ, vùng 1663 cm-1 là nhóm carbonyl trong vịng, có liên hợp với nối đơi. Gelatin có các nhóm hydroxyl, amino có đỉnh tại số sóng 3547,09 cm-1 có thể tham gia tạo liên kết hydro với nhóm carbonyl.
Nhận thấy, với các mẫu phối hợp với tỉ lệ Gelatin tăng dần thì đỉnh của nhóm chức hydroxyl, amino của gelatin đều bị dịch chuyển tương ứng xuống còn 3286,06 ±4,85 cm-1, hình dạng pic tù hơn và đồng thời thì đỉnh carbonyl của PGT cũng bị dịch chuyển tương tự. Chứng tỏ đã có hình thành liên kết hydro giữa nhóm hydroxyl, amino của gelatin và nhóm carbonyl của PGT, từ đó gelatin giúp hạn chế q trình tái kết tinh của PGT. Tỉ lệ P:G=1:18 cho sự dịch chuyển số sóng là mạnh nhất. 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 % T Progesterone 1700.93 P:G=1:4.5 3280.92 1656.85 1696.00 P:G=1:9 3286.70 1654.67 1693.93 Wavenumber(cm-1) P:G=1:18 3290.56 1627.50 Gelatin 3547.09 1663.08 -OH, -NH2 -OH, -NH2 -OH, - -OH, -NH2 C=O C=O C=O C=O
39
Kết luận: Gelatin đã ức chế sự hình thành và lớn lên của tủa PGT trong mơi
trường tiêu hóa nhờ tạo liên kết hydro, qua đó giảm lượng PGT bị tái kết tinh, tăng lượng PGT trong pha keo, giảm kích thước, PDI giọt nhũ tương do bản thân gelatin cũng là chất ổn định nhũ tương. Sử dụng tỉ lệ P:G= 1:18 vì những lý do trên, với SNEDDS hàm lượng dược chất 25 mg, chọn tỉ lệ vỏ có lượng gelatin tương ứng 450 mg, tương đương với 1 g vỏ theo công thức trong bảng 3.5.
3.3.5. Nghiên cứu đánh giá giải phóng viên nang mềm chứa progesteron
Tiến hành thử giải phóng viên nang mềm chứa hệ F1, F3 và viên nang Utrogestan®
100 mg. Kết quả thử giải phóng viên nang mềm được thể hiện trên hình:
Hình 3.14. Kết quả thử giải phóng viên nang mềm chứa hệ F1, F3 và viên đối chiếu
Nhận xét: Kết quả thử giải phóng cho thấy viên nang mềm chứa hệ F1, F3, sau 5
phút vỏ viên bắt đầu rã và giải phóng hệ SNEDDS ra ngồi mơi trường tạo các hạt nano nhũ tương. Ở viên nang chứa hệ F1, %PGT hòa tan tăng dần và đạt tối đa 61,35% tại thời điểm 30 phút, tuy nhiên sau đó, PGT nhanh chóng bị q bão hịa và kết tinh trở lại dẫn tới giảm nồng độ, sau 120 phút chỉ còn 22,14% PGT. Trong khi viên nang chứa hệ F3, %PGT giải phóng tăng dần và đạt tối đa 59,14% sau 45 phút, sau đó giảm nhẹ về 55,14% sau 120 phút, chứng tỏ dược chất đạt nồng độ bão hòa phù hợp trong các hạt nano nhũ tương, ít tái kết tinh trở lại hơn hệ F1.
Đối với viên nang Utrogestan® 100 mg, mơi trường thử giải phóng cần có pepsin để phân cắt vỏ, giải phóng hỗn dịch chứa PGT ra ngồi, tuy nhiên vì lượng hỗn dịch đặc thân dầu, nhũ hóa kém, mơi trường có khả năng hịa tan PGT thấp, nên dược chất bị giữ trong hỗn dịch khơng giải phóng được ra ngồi, sau 120 phút chỉ đạt 1,77%.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 20 40 60 80 100 120 % PG T g iải phóng Thời gian (phút) Viên nang F1 (SNEDDS 100mg) Viên nang F3 (SNEDDS 25mg) Viên nang Utrogestan® 100mg
40
Kết luận: Viên nang mềm chứa hệ F3 cho kết quả thử giải phóng ổn định, hạn chế
dược chất kết tinh trở lại. Lựa chọn công thức F3 để đánh giá trên in vivo và đối chiếu với mẫu Utrogestan® và nguyên liệu.
3.4. Nghiên cứu đánh giá in vivo trên thỏ
Lựa chọn mẫu F3 (SNEDDS 25 mg) với tiềm năng ly giải in vitro: Tỉ lệ dược chất tồn tại trong pha keo lớn, nồng độ siêu bão hịa cao, từ đó dự đốn khả năng tăng hấp thu thuốc vào hệ bạch huyết, hạn chế chuyển hóa bước một qua gan, nâng cao sinh khả dụng. Tiến hành cho nghiên cứu đánh giá in vivo đường uống trên thỏ như mô tả trong mục 2.3.4 với liều như bảng sau:
Bảng 3.6. Mẫu nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng in vivo trên thỏ.
Tên mẫu Hàm lượng dược chất (mg) Liều cho uống (mg/kg)
F3 25 2,5
Utrogestan® 100 10
Nguyên liệu - 10
Kết quả định lượng nồng độ thuốc trong huyết tương thỏ thu được như sau:
Hình 3.15. Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc nồng độ PGT trong huyết tương thỏ theo thời gian của F3 so với mẫu đối chiếu Utrogestan® và mẫu nguyên liệu
Sử dụng phần mềm Phoenix 8 để tính tốn các thông số dược động học của hệ, kết quả trình bày ở bảng:
Bảng 3.7. Các thơng số dược động học trung bình của hệ F3 so với Utrogestan® và nguyên liệu 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 0 50 100 150 200 250 300 350 Nồ ng đ ộ P GT h uy ết tươn g (n g/m l) Thời gian (phút) F3 Utrogestan® 100mg Nguyên liệu PGT
41
Thông số F3 (25 mg) Utrogestan® 100 mg Nguyên liệu PGT
Liều cho thỏ (mg/kg) 2,5 10 10
Cmax (ng/ml) 711,04±267,13 407,74±322,15 10,40±1,46
Tmax (phút) 5±0 9±2,45 25±10
AUC0-∞ (ng.phút/ml) 9424,87±2666,32 17460,67±13464,36 2290,57±1166,77
Nhận xét: Từ bảng 3.8 và hình 3.16 cho thấy sử dụng công thức SNEDDS F3 với
liều bằng ¼ so với liều viên đối chiếu và nguyên liệu, kết quả thu được Cmax trung bình gấp 1,74 lần so với viên đối chiếu và 68,37 lần so với mẫu nguyên liệu, AUC0-∞ trung bình bằng 0,54 lần so với viên đối chiếu và gấp 4,11 lần so với mẫu nguyên liệu, Tmax trung bình của mẫu F3 là ngắn hơn so với viên đối chiếu và mẫu nguyên liệu.
Kết quả này tương đồng với kết quả ly giải lipid in vitro, mẫu F3 hấp thu nhanh hơn, Cmax và AUC cải thiện tốt hơn vì SNEDDS có tốc độ tiêu hóa nhanh hơn, khi vào hệ tiêu hóa thì acid oleic khơng cần ly giải mà nhanh chóng được nhũ hóa tạo micell, hấp thu nhanh qua con đường bạch huyết và tránh được chuyển hóa bước một qua gan. Utrogestan® là hỗn dịch dầu có thể được hấp thu theo cơ chế bạch huyết, nhưng cần phải thời gian lâu hơn để diễn ra q trình ly giải, giải phóng các acid béo và hình thành các hạt micell. Mẫu nguyên liệu có độ tan thấp, thấm kém [47] và khơng có cơ chế hấp thu vào bạch huyết nên bị chuyển hóa bước một qua gan mạnh, do đó AUC0-∞ và Cmax thấp hơn SNEDDS. Thêm vào đó, kết quả in vivo của Utrogestan® bị dao động cá thể lớn hơn cho thấy mẫu này bị phụ thuộc nhiều hơn vào enzym tiêu hóa của từng cá thể thỏ trong nghiên cứu.
Kết luận: Qua việc so sánh mẫu F3 (có tiềm năng vào mạch bạch huyết) và mẫu
nguyên liệu (hấp thu vào mạch máu) đã chứng minh được vai trò cải thiện sinh khả dụng của SNEDDS thông qua con đường bạch huyết. Đối chiếu với mẫu thị trường cho thấy ưu thế khi dùng SNEDDS so với hỗn dịch dầu: giải phóng và hấp thu nhanh hơn, SKD ít phụ thuộc vào enzym tiêu hóa của từng cá thể do đó giúp giảm dao động giữa các cá thể.
42
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN
Từ kết quả nghiên cứu của đề tài “Nghiên cứu bào chế và đánh giá viên nang mềm chứa hệ nano tự nhũ hóa progesteron”, có thể rút ra các kết luận sau:
Đề tài đã đạt được 3 mục tiêu đề ra:
Đã hồn thiện cơng thức bào chế hệ SNEDDS thơng qua đánh giá q trình ly giải lipid in vitro, kết quả cho thấy hàm lượng dược chất 25 mg trong SNEDDS cho hiệu suất ly giải lipid tối ưu, giảm quá trình hình thành tủa.
Đã bào chế thành công vỏ nang mềm gelatin bằng phương pháp nhúng khuôn như công thức trong bảng 4.1, đánh giá được sự ảnh hưởng của vỏ nang gelatin là có lợi cho q trình ly giải, chứng minh được gelatin có tác dụng ức chế tái kết tinh PGT bằng quá trình tạo liên kết hydro giữa hai chất này.
Bảng 4.1. Công thức viên nang mềm chứa hệ nano tự nhũ hóa progesteron
Đã tiến hành so sánh in vivo của hệ nano tự nhũ hóa chứa progesteron với viên đối chiếu và mẫu nguyên liệu, kết quả cho thấy công thức SNEDDS chứa progesteron 25 mg (F3) có thời gian để nồng độ thuốc đạt đỉnh là nhanh hơn, Cmax và AUC0-∞ cao hơn mẫu đối chiếu Utrogestan® 100 mg và nguyên liệu, hơn nữa, ít bị dao động cá thể hơn so với mẫu đối chiếu. Qua đó có thể thấy tiềm năng của hệ nano tự nhũ hóa trong việc cải thiện sinh khả dụng đường uống cho progesteron.
ĐỀ XUẤT
- Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện cơng thức bào chế hệ nano tự nhũ hóa progesteron.
- Tiến hành đánh giá sinh khả dụng của hệ trên quy mô lớn hơn và ảnh hưởng của thức ăn lipid tới SKD của thuốc.
Công thức dịch nhân Công thức vỏ nang
Thành phần Khối lượng (mg) Thành phần Khối lượng (mg)
Progesteron 25 Gelatin 450
Acid oleic 360 Glycerin 150
Tween 80 135 Methyl paraben 1,5
Ethanol 405 Propyl paraben 0,3
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt
1. Bộ Y Tế (2014), Hóa dược, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr.37.
2. Bộ Y Tế (2018), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội. 3. Bộ Y Tế (2006), Dược lý học, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr.316.
4. Đào Minh Hạnh (2020), Sơ bộ xây dựng tương quan in vitro – in vivo của hệ eutecti
– hydrogel chứa progesteron, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường đại học Dược Hà
Nội, Hà Nội.
5. Nguyễn Thị Ngọc Thơ (2018), Tiếp tục nghiên cứu đánh giá hydrogel chứa eutecti
progesteron, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường đại học Dược Hà Nội, Hà Nội.
6. Vũ Đình Tuấn (2019), Nghiên cứu bào chế và đánh giá viên nang mềm chứa silymarin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr.20-
38.
7. Vũ Thị Thanh Thủy (2021), Nghiên cứu bào chế hệ nano tự nhũ hóa chứa progesteron, Luận văn Thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội.
Tài liệu tiếng Anh
8. Ahn, H. P., J. H. (2016), "Liposomal delivery systems for intestinal lymphatic drug transport", Biomater Res, 20, pp.36.
9. Alvarez, F. J., and Valentine J. Stella. (1989), "The role of calcium ions and bile salts on the pancreatic lipase-catalyzed hydrolysis of triglyceride emulsions stabilized with lecithin.", Pharmaceutical research, 6(6), pp.449-457.
10. Armand, M., et al (1996), "Physicochemical characteristics of emulsions during fat digestion in human stomach and duodenum.", American Journal of Physiology- Gastrointestinal and Liver Physiology, 271(1), pp.G172-G183.
11. Baek, I.-h., et al (2015), "Design of a gelatin microparticle-containing self- microemulsifying formulation for enhanced oral bioavailability of dutasteride", Drug Design, Development and Therapy, 9, pp.3231.
12. Bakala-N’Goma, J.-C., et al (2015), "Toward the establishment of standardized in vitro tests for lipid-based formulations. 5. Lipolysis of representative formulations by gastric lipase.", Pharmaceutical Research, 32(4), pp.1279-1287.
13. Berthelsen, R., et al (2016), "Evaluating oral drug delivery systems: Digestion models", Analytical Techniques in the Pharmaceutical Sciences, pp.773-790.
14. Bosch, H., et al (1965), "On the positional specificity of phospholipase A from pancreas.", Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Lipids and Lipid Metabolism, 98(3), pp.657-659.
15. C, M. M. R. (2014), "Enzymes in the Dissolution Testing of Gelatin Capsules",
AAPS PharmSciTech, 15(6), pp.1410-1416.
16. Capolino, P., et al (2011), "In vitro gastrointestinal lipolysis: replacement of human digestive lipases by a combination of rabbit gastric and porcine pancreatic extracts.",
Food digestion, 2(1), pp.43-51.
17. Carriere, F., et al (1993), "Secretion and contribution to lipolysis of gastric and pancreatic lipases during a test meal in humans.", Gastroenterology, 105(3), pp.876- 888.
18. Carrín, M. E., and Amalia A (2010), "Peanut oil: Compositional data.", European
journal of lipid science and technology, 112(7), pp.697-707.
19. Christophersen PC, C. M., Holm R, Kristensen J, Jacobsen J, Abrahamsson B, Mullertz A (2014), "Fed and fasted state gastro-intestinal in vitro lipolysis: In vitro in vivo relations of a conventional tablet, a SNEDDS and a solidified SNEDDS", Eur J
Pharm Sci, 57, pp.232-239.
20. Cometti, B. (2015), "Pharmaceutical and clinical development of a novel progesterone formulation", Acta Obstet Gynecol Scand, 94 Suppl 161, pp.28-37.
21. Fernandez S, C. S., Ritter N, Mahler B, Demarne F, Carriere F, Jannin V (2009), "In vitro gastrointestinal lipolysis of four formulations of piroxicam and cinnarizine with the self emulsifying excipients Labrasol and Gelucire 44/14", Pharm Res, 26(8), pp.1901-1910.
22. Gupta, S. K., R. Omri, A. (2013), "Formulation strategies to improve the bioavailability of poorly absorbed drugs with special emphasis on self-emulsifying systems", ISRN Pharm, 2013, pp.848043.
23. Hofmann, A. F., and Karol J. Mysels (1992), "Bile acid solubility and precipitation in vitro and in vivo: the role of conjugation, pH, and Ca2+ ions.", Journal of lipid research, 33(5), pp.617-626.
24. Jannin, V. M., J. Marchaud, D. (2008), "Approaches for the development of solid and semi-solid lipid-based formulations", Adv Drug Deliv Rev, 60(6), pp.734.
25. Khan, A. W. K., S. Ansari, S. H. Sharma, R. K. Ali, J. (2015), "Self- nanoemulsifying drug delivery system (SNEDDS) of the poorly water-soluble grapefruit flavonoid Naringenin: design, characterization, in vitro and in vivo evaluation", Drug Deliv, 22(4), pp.552.
26. Khoo, S. M., et al (2001), "A conscious dog model for assessing the absorption, enterocyte‐based metabolism, and intestinal lymphatic transport of halofantrine",
Journal of pharmaceutical sciences, 90(10), pp.1599-1607.
27. Kohli, K. C., S. Dhar, D. Arora, S. Khar, R. K. (2010), "Self-emulsifying drug delivery systems: an approach to enhance oral bioavailability", Drug Discov Today,
15(21-22), pp.958-65.
28. Kostewicz ES, A. B., Brewster M, Brouwers J, Butler J, Carlert S, Dickinson PA,; Dressman J, H. R., Klein S, Mann J, McAllister M, Minekus M, Muenster U, Mullertz A,; Verwei M, V. M., Weitschies W, Augustijns P (2014), "In vitro models for the prediction of in vivo performance of oral dosage forms", Eur J Pharm Sci, 57, pp.342- 366.
29. Larsen AT, S. P., Mullertz A (2011), "In vitro lipolysis models as a tool for the characterization of oral lipid and surfactant based drug delivery systems", Int J Pharm, 471(1-2), pp.245-255.
30. Lindahl, A., et al (1997), "Characterization of fluids from the stomach and proximal jejunum in men and women.", Pharmaceutical research, 14(4).
31. Minekus M, M. P., Havenaar R, Huisintveld JHJ (1995), "A multicompartmental dynamic computer-controlled model simulating the stomach and small-intestine", Altern Lab Anim, 23(2), pp.197-209.
32. Nahoul, K.; Dehennin, L.; Jondet, M.; Roger, M. (1993), "Profiles of plasma estrogens, progesterone and their metabolites after oral or vaginal administration of estradiol or progesterone", Maturitas, 16(3), pp.185-202.
33. Nevin, P., David Koelsch, and C. M. Mansbach 2nd (1995), "Intestinal triacylglycerol storage pool size changes under differing physiological conditions.",
Journal of lipid research, 36(11), pp.2405-2412.
34. Newton, S. J. (2007), "The history of progesterone", International Journal of Pharmaceutical Compounding, 11(4), pp.274.
35. Noguchi, T. C., W. N. A. Stella, V. J. (1985), "The effect of drug lipophilicity and lipid vehicles on the lymphatic absorption of various testosterone esters", International
Journal of Pharmaceutics, 24(2), pp.173-184.
36. Pafumi Y, L. D., de la Porte PL, Juhel C, Storch J, Hamosh M, Armand M (2002), " Mechanisms of inhibition of triacylglycerol hydrolysis by human gastric lipase", J Biol
Chem, 277(31), pp.28070-28079.
37. Patton, J. S., and Martin C (1979), "Watching Fat Digestion: The formation of visible product phases by pancreatic lipase is described.", Science, 204(4389), pp.145- 148.
38. Porter, C. J., Natalie L. Trevaskis, and William N. Charman (2007), "Lipids and lipid-based formulations: optimizing the oral delivery of lipophilic drugs", Nat Rev Drug
Discov, 6(3), pp.231-248.
39. Pouton, C. W. (2006), "Formulation of poorly water-soluble drugs for oral administration: physicochemical and physiological issues and the lipid formulation classification system", Eur J Pharm Sci, 29(3-4), pp.278-287.
40. Pouton, C. W. (2000), "Lipid formulations for oral administration of drugs: non- emulsifying, self-emulsifying and 'self-microemulsifying' drug delivery systems", Eur
J Pharm Sci, 11 Suppl 2, pp.93.
41. Pouton, C. W. P., C. J. (2008), "Formulation of lipid-based delivery systems for oral administration: materials, methods and strategies", Adv Drug Deliv Rev, 60(6), pp.625- 637.
42. Rahman, M. A. H., A. Hussain, M. S. Mirza, M. A. Iqbal, Z. (2013), "Role of excipients in successful development of self-emulsifying/microemulsifying drug delivery system (SEDDS/SMEDDS)", Drug Dev Ind Pharm, 39(1), pp.1-19.
43. Renou, C., et al (2001), "Effects of lansoprazole on human gastric lipase secretion and intragastric lipolysis in healthy human volunteers.", Digestion 63(4), pp.207-213. 44. Sassene, P., et al. (2014), "Toward the establishment of standardized in vitro tests for lipid-based formulations, part 6: effects of varying pancreatin and calcium levels.",