CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.2. Đánh giá tác dụng sinh học
3.2.2. Đánh giá tác dụng hoạt hóa caspase-3
Tác dụng hoạt hóa caspase-3 của hợp chất Ve được thử nghiệm tại khoa Dược
trường Đại học Chungbuk, Cheongju, Hàn Quốc và được định lượng bằng bộ kit của Abcam theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
Cách tiến hành
Tế bào ung thư hạch bạch huyết ở người (U937, nồng độ 5 x 105/mL mỗi giếng) được cấy vào đĩa 6 giếng và cho phát triển trong vòng 24 giờ. Các tế bào được xử lí cùng các hoạt chất (nồng độ 50 mM) trong 24 giờ, sau đó thu lại. Các tế bào thu được được rửa 2 lần với PBS lạnh và xử lí với đệm li giải đi cùng với bộ kit trên. Chất li giải tế bào (100 µ/50 µL) được trộn cùng với 50 µL đệm phản ứng 2x và 5µL DEVD-p- NA theo sự hướng dẫn của nhà sản xuất. Hoạt tính được định lượng bằng phương pháp huỳnh quanh sau 1 giờ ủ.
20
2.3.2.3. Đánh giá ảnh hưởng lên chu kỳ tế bào
Ảnh hưởng lên chu kỳ tế bào được đánh giá với đại diện Ve trên dòng tế bào ung thư hạch bạch huyết ở người U937.
Cách tiến hành
Tế bào U937 (5x105/mL mỗi giếng) được nuôi cấy trong các đĩa 6 giếng và phát triển trong 24 giờ. Sau đó, tế bào được ủ với các chất (50 µM). Sau 24 giờ, tế bào được đem rửa bằng PBS băng, cố định bằng ethanol lạnh 75% và nhuộm bằng propidium iodid (PI) với sự có mặt của RNase ở nhiệt độ phòng trong 30 phút. Các tế bào đã nhuộm màu được phân tích hàm lượng ADN bằng máy đo tế bào dòng FACScalibur (BD Biosciences, San Jose, CA, USA).
Xử lí số liệu
Dữ liệu được xử lý bằng phần mềm Cell Quest Pro (BD Biosciences).
2.3.2.4. Đánh giá ảnh hưởng lên chu trình chết tự nhiên của tế bào
Dẫn chất Ve tiếp tục được đánh giá ảnh hưởng lên chu trình chết tự nhiên của tế bào với thuốc nhuộm kép Annexin V-FITC/PI.
Cách tiến hành
Tế bào ung thư hạch bạch huyết ở người U937 (5x105/mL mỗi giếng) được nuôi cấy trong các đĩa 6 giếng và phát triển trong 24 giờ. Các tế bào được ủ với các chất (50 µM) trong 24 giờ, và sau đó được thu hoạch. Các tế bào thu hoạch được rửa hai lần bằng PBS băng và ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 100 mL dung dịch đệm bám 1ì (binding buffer) cú cha 1 àL Annexin V-FITC v 12,5 mL PI. Sau khi ủ 15 phút, các tế bào được phân tích tỷ lệ phần trăm trải qua quá trình apoptosis bằng máy đo tế bào dịng FACScalibur (BD Biosciences).
Xử lí số liệu
21
CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. Hóa học
3.1.1. Tổng hợp hóa học
Các acylhydrazon mang khung quinazolin-4(3H)-on mục tiêu Va-f được tổng hợp thông qua 4 bước, như sơ đồ dưới đây:
Sơ đồ 3.1. Quy trình tởng hợp các hợp chất Va-f
3.1.1.1. Tổng hợp dẫn chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(4-
oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Va)
a. Tổng hợp nguyên liệu quinazolin-4(3H)-on (IIa)
Sơ đồ 3.2. Phản ứng tổng hợp hợp chất IIa
Tiến hành phản ứng:
Cân 274 mg acid 2-aminobenzoic (Ia) (~2 mmol) vào bình cầu đáy trịn dung tích 50 mL. Thêm 440 mg (~10 mmol) formamid vào bình, khuấy hỗn hợp phản ứng ở 120ºC trong 5-8 giờ. Phản ứng được theo dõi bằng sắc ký lớp mỏng (TLC).
Xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Kết thúc phản ứng, để nguội hỗn hợp và thêm 40 mL NaHCO3 lạnh vào bình, thấy có tủa tạo thành. Lọc, rửa tủa 3 lần với nước cất, mỗi lần 20 mL. Sấy khô tủa ở 60ºC trong khoảng 24 giờ thu được 274,4 mg quinazolin-4(3H)-on (IIa).
22
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu nâu trắng Hiệu suất: 94,0%
Rf = 0,43 (DCM/MeOH = 90/1)
b. Tổng hợp nguyên liệu ethyl 2-(4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIIa)
Sơ đồ 3.3. Phản ứng tổng hợp hợp chất IIIa
Tiến hành phản ứng:
Hòa tan 146 mg quinazolin-4(3H)-on (IIa) (~1 mmol) trong 10 mL aceton vào bình cầu đáy trịn dung tích 50 mL. Thêm K2CO3 (206,9 mg, 1,5 mmol) và khuấy hỗn hợp ở 80ºC trong 30 phút, sau đó thêm KI (16,6 mg, 0,1 mmol) vào. Sau khi khuấy thêm 15 phút, nhỏ ethyl cloroacetat (0,13 mL, 1,2 mmol) trong 1mL aceton vào, khuấy ở 60ºC trong 3 giờ.
Xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Kết thúc phản ứng, cất quay loại aceton ở áp suất thấp thu được hỗn hợp rắn. Tiến hành chiết 3 lần (3 x 50 mL DCM) với nước, thu phần dịch DCM. Cô quay dưới áp suất thấp loại bỏ DCM thu được dịch lỏng màu vàng. Sấy dịch ở 60°C trong 24 giờ thu được 211,1 mg IIIa.
Kết quả:
Cảm quan: Chất lỏng màu nâu nhạt Hiệu suất: 91,1%
Rf = 0,67 (DCM/MeOH = 90/1)
c. Tổng hợp nguyên liệu 2-(4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (IVa)
Sơ đồ 3.4. Phản ứng tổng hợp hợp chất IVa
Tiến hành phản ứng:
Pha loãng 116 mg ethyl 2-(7-methyl-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIIa) (~0,5 mmol) trong 10 mL ethanol vào bình cầu đáy trịn dung tích 50 mL. Thêm hydrazin monohydrat (~0,12 mL, 2,5 mmol) và khuấy hỗn hợp ở nhiệt độ phòng đến khi xuất hiện tủa trắng. Phản ứng kết thúc sau khoảng 30 phút.
23
Xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Lọc và rửa tủa 3 lần bằng ethanol lạnh. Sấy tủa trong điều kiện chân không thu được 100,3 mg hợp chất IVa. Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 91,9% Rf = 0,32 (DCM/MeOH = 9/1) d. Tổng hợp hợp chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(4-oxoquinazolin- 3(4H)-yl)acetohydrazid (Va) Sơ đồ 3.5. Phản ứng tổng hợp hợp chất Va Tiến hành phản ứng:
Phân tán 100,3 mg 2-(4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (IVa) (~0,46
mmol) trong 20 mL ethanol. Thêm 2 giọt acid acetic đặc, 149 mg 3-allyl-2- hydroxybenzaldehyd (~ 0,92 mmol) vào hỗn hợp phản ứng và đun hồi lưu trong khoảng 30 phút cho đến khi phản ứng kết thúc.
Xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Lọc và rửa tủa 3 lần bằng ethanol lạnh. Sấy khô tủa trong điều kiện chân không, tinh chế bằng cách kết tinh lại trong ethanol hoặc sử dụng sắc ký cột (hệ dung môi DCM/MeOH = 9/1) thu được 146,5 mg.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 88,1%
t°nc = 173,6-174,8°C
24
3.1.1.2. Tổng hợp dẫn chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(6-methyl-4-
oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vb)
Sơ đồ 3.6. Quy trình tởng hợp hợp chất Vb
a. Tổng hợp nguyên liệu 6-methylquinazolin-4(3H)-on (IIb)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIa với 302 mg (~2 mmol) hợp chất Ib thu được 284,8 mg hợp chất IIb.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu nâu trắng Hiệu suất: 89,1%
Rf = 0,44 (DCM/MeOH = 90/1)
b. Tổng hợp nguyên liệu ethyl 2-(6-methyl-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIIb)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIIa với 160 mg (~1 mmol) hợp chất IIb thu được 228,8 mg hợp chất IIIb.
Kết quả:
Cảm quan: Chất lỏng màu nâu nhạt Hiệu suất: 92,9%
Rf = 0,69 (DCM/MeOH = 90/1)
c. Tổng hợp nguyên liệu 2-(6-methyl-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (IVb)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IVa với 123 mg (~0,5 mmol) hợp chất IIIb thu được 106,7 mg hợp chất IVb.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 92,0%
25
d. Tổng hợp hợp chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(6-methyl-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vb)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp hợp chất Va với 106,7 mg hợp chất IVb thu được 152,2 mg hợp chất Vb. Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 87,9% t°nc = 183,7-184,9°C Rf = 0,59 (DCM/MeOH = 14/1) 3.1.1.3. Tổng hợp dẫn chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(7-methyl-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vc)
Sơ đồ 3.7. Quy trình tởng hợp hợp chất Vc
a. Tổng hợp nguyên liệu 7-methylquinazolin-4(3H)-on (IIc)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIa với 302 mg (~ 2 mmol) hợp chất Ic thu được 296,4 mg hợp chất IIc.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu nâu trắng Hiệu suất: 91,1%
Rf = 0,44 (DCM/MeOH = 90/1)
b. Tổng hợp nguyên liệu ethyl 2-(7-methyl-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIIc)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIIa với 160 mg (~1 mmol) hợp chất IIc thu được 216,5 mg hợp chất IIIc.
Kết quả:
Cảm quan: Chất lỏng màu nâu nhạt Hiệu suất: 87,9%
26
c. Tổng hợp nguyên liệu 2-(7-methyl-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (IVc)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IVa với 123 mg (~0,5 mmol) hợp chất IIIc thu được 103,2 mg hợp chất IVc.
Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 89,1% Rf = 0,31 (DCM/MeOH = 9/1) d. Tổng hợp hợp chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(7-methyl-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vc) Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu Va với 103,2 mg hợp chất IVc thu được 152,3 mg hợp chất Vc. Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 90,9% t°nc = 186,8-188,2°C Rf = 0,59 (DCM/MeOH = 14/1) 3.1.1.4. Tổng hợp dẫn chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(7-methoxy-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vd)
Sơ đồ 3.8. Quy trình tởng hợp hợp chất Vd
a. Tổng hợp nguyên liệu 7-methoxyquinazolin-4(3H)-on (IId)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIa với 334 mg (~2 mmol) hợp chất Id thu được 302,7 mg hợp chất IId.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu nâu trắng Hiệu suất: 86,1%
27
b. Tổng hợp nguyên liệu ethyl 2-(7-methoxy-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIId)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIIa với 176 mg (~1 mmol) hợp chất IId thu được 235,8 mg hợp chất IIId.
Kết quả:
Cảm quan: Chất lỏng màu nâu nhạt Hiệu suất: 89,9%
Rf = 0,65 (DCM/MeOH = 90/1)
c. Tổng hợp nguyên liệu 2-(7-methoxy-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (IVd)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IVa với 131 mg (~0,5 mmol) hợp chất IIId thu được 110,4 mg hợp chất IVd.
Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 89,1% Rf = 0,29 (DCM/MeOH = 9/1) d. Tổng hợp hợp chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(7-methyl-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vd) Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp hợp chất Va với 110,4 mg hợp chất IVd thu được 150,1 mg hợp chất Vd. Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 86,0% t°nc = 190,9-192,4°C Rf = 0,54 (DCM/MeOH = 14/1)
28
3.1.1.5. Tổng hợp dẫn chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(6,7-dimethoxy-
4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Ve)
Sơ đồ 3.9. Quy trình tởng hợp hợp chất Ve
a. Tổng hợp nguyên liệu 6,7-dimethoxyquinazolin-4(3H)-on (IIe)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIa với 394 mg (~2 mmol) hợp chất Ie thu được 350,2 mg hợp chất IIe.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu nâu trắng Hiệu suất: 85,1%
Rf = 0,40 (DCM/MeOH = 90/1)
b. Tổng hợp nguyên liệu ethyl 2-(6,7-dimethoxy-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIIe)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIIa với 206 mg (~1 mmol) hợp chất IIe thu được 271,6 mg hợp chất IIIe.
Kết quả:
Cảm quan: Chất lỏng màu nâu nhạt Hiệu suất: 92,9%
Rf = 0,64 (DCM/MeOH = 90/1)
c. Tổng hợp nguyên liệu 2-(6,7-dimethoxy-4-oxoquinazolin-3(4H)- yl)acetohydrazid (IVe)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IVa với 146 mg (~0,5 mmol)
hợp chất IIIe thu được 122,3 mg hợp chất IVe.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 88,0%
29
d. Tổng hợp hợp chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(6,7-dimethoxy-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Ve)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp hợp chất Va với 122,3 mg hợp chất IVe thu được 150,4 mg hợp chất Ve. Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 81,1% t°nc = 201,6-202,8°C Rf = 0,52 (DCM/MeOH = 14/1) 3.1.1.6. Tổng hợp dẫn chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(7-bromo-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vf)
Sơ đồ 3.10. Quy trình tởng hợp hợp chất Vf
a. Tổng hợp nguyên liệu 7-bromoquinazolin-4(3H)-on (IIf)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIa với 432 mg (~2 mmol) hợp chất If thu được 400,5 mg hợp chất IIf.
Kết quả:
Cảm quan: Chất rắn màu nâu trắng Hiệu suất: 89,1%
Rf = 0,45 (DCM/MeOH = 90/1)
b. Tổng hợp nguyên liệu ethyl 2-(7-bromo-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetat (IIIf)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IIIa với 225 mg (~1 mmol) hợp chất IIf thu được 283,1 mg hợp chất IIIf.
Kết quả:
Cảm quan: Chất lỏng màu nâu nhạt Hiệu suất: 90,9%
30
c. Tổng hợp nguyên liệu 2-(7-bromo-4-oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (IVf)
Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp nguyên liệu IVa với 155,5 mg (~0,5 mmol) hợp chất IIIf thu được 130,7 mg hợp chất IVf.
Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 88,1% Rf = 0,29 (DCM/MeOH = 9/1) d. Tổng hợp hợp chất (E)-N’-(3-Allyl-2-hydroxy)benzyliden-2-(7-bromo-4- oxoquinazolin-3(4H)-yl)acetohydrazid (Vf) Tiến hành phản ứng & xử lí hỗn hợp sản phẩm:
Quy trình tương tự đối với tổng hợp hợp chất Va với 130,7 mg hợp chất IVf thu được 174,6 mg hợp chất Vf. Kết quả: Cảm quan: Chất rắn màu trắng Hiệu suất: 89,9% t°nc = 219,7-221,1°C Rf = 0,65 (DCM/MeOH = 14/1)
Bảng 3.1. Hiệu suất tồn phần của q trình tởng hợp các dẫn chất Va-f
Hợp chất R Hiệu suất toàn phần (%)
Va H 69,2 Vb 6-CH3 66,9 Vc 7-CH3 65,0 Vd 7-OCH3 58,8 Ve 6,7-(OCH3)2 58,0 Vf 7-Br 64,1
3.1.2. Kiểm tra độ tinh khiết
Các hợp chất tổng hợp được được thử tinh khiết bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC) và phương pháp đo nhiệt độ nóng chảy. Kết quả hệ số Rf và nhiệt độ nóng chảy được trình bày trong bảng 3.2:
- Sắc kí lớp mỏng:
Sắc kí lớp mỏng được tiến hành trên bản nhơm tráng sẵn của Merck, sử dụng hệ dung môi DCM : MeOH với 3 tỷ lệ khác nhau là 9:1 để kiểm tra liệu còn dư hydrazid
IV, tỷ lệ 14:1 và tỷ lệ 90:1 để kiểm tra liệu còn dư benzaldehyd, tiến hành quan sát
31
thu được trịn, gọn, rõ, khơng có vết phụ. Kết quả hệ số lưu giữ Rf của các hợp chất
Va-f trong hệ dung môi DCM : MeOH = 14:1 được lấy làm đại diện (Bảng 3.2).
- Đo nhiệt độ nóng chảy:
Các dẫn chất được tổng hợp đều có trạng thái rắn sau khi tinh chế, vậy nên được xác định nhiệt độ nóng chảy bằng máy đo độ nóng chảy nhiệt điện. Thơng số đo được cho thấy nhiệt độ nóng chảy của các hợp chất này khá ổn định, chỉ chênh lệch trong khoảng hẹp, dao động từ 1°C đến 2°C.
Bảng 3.2. Kết quả kiểm tra độ tinh khiết của các hợp chất tổng hợp được
3.1.3. Xác định cấu trúc
Các phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất Va-f được sử dụng bao gồm
phổ hồng ngoại (IR), phổ khối (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) và carbon (13C-NMR). Kết quả cụ thể được trình bày trong phần phân tích phổ và phần phụ lục.
3.1.3.1. Kết quả phân tích phở hồng ngoại (IR)
Kết quả phân tích phổ hồng ngoại của các dẫn chất Va-f được dẫn ra trong bảng 3.3:
Hợp chất R Sắc kí lớp mỏng
(DCM : MeOH = 14:1) Nhiệt độ nóng chảy (°C)
Va H 0,55 173,6-174,8 Vb 6-CH3 0,59 183,7-184,9 Vc 7-CH3 0,59 186,8-188,2 Vd 7-OCH3 0,54 190,9-192,4 Ve 6,7-(OCH3)2 0,52 201,6-202,8 Vf 7-Br 0,65 219,7-221,1
32
Bảng 3.3. Kết quả phân tích phở hồng ngoại (IR) các hợp chất tởng hợp được
Dẫn chất Số sóng 𝒗̅ νO-H νN-H νC-H νC=O vC=N vC=C Va 3192 3354 3080, 2972, 2918 1694 1663 1603 Vb 3184 3071, 2967, 2914, 2862 1667 1609 Vc 3065, 2974, 2924, 2835 1703 1659 1616 Vd 3289 3078, 3001, 2945, 2835 1688 1667 1603 Ve 3292 3082, 2957, 2899, 2837 1690 1647 1603 Vf 3200 3078, 2978, 2907, 2862 1692 1668 1601
3.1.3.2. Kết quả phân tích phở khối lượng (MS)
Kết quả phân tích phổ khối lượng của các dẫn chất Va-f được dẫn ra trong bảng 3.4:
Bảng 3.4. Kết quả phân tích phở khối lượng (MS) các hợp chất tổng hợp được
Ghi chú: ◊: HR-MS [M-H]-, $: HR-MS [M+H]+, *: HR-MS {[M+H]+, 79Br}, **: HR-MS {[M+H]+, 81Br}.
Hợp chất R CTPT Khối lượng phân tử m/z
Va H C20H18N4O3 362,1379 361,1302◊ Vb 6-CH3 C21H20N4O3 376,1535 377,1607$ Vc 7-CH3 C21H20N4O3 376,1535 377,1607$ Vd 7-OCH3 C21H20N4O4 392,1485 393,1556 $ Ve 6,7-(OCH3)2 C22H22N4O5 422,1590 423,1663$ Vf 7-Br C20H17BrN4O3 440,0484; 442,0464 441,0560*; 443,0539**
33
3.1.3.3. Kết quả phân tích phở cợng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR)
Kết quả phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton của các dẫn chất Va-f được