- Đậu nành (Glycine soja)
2.3.3.3. Đánh giá tác dụng kích thích tăng sinh tế bào MCF-7 của các mẫu nghiên cứu
Sau khi đã xác định được nồng độ không gây độc tế bào MCF-7 của cao chiết EtOH 70% và hợp chất agnusid phân lập từ Mạn kinh tử, tiếp tục tiến hành đánh giá tác dụng kích thích tăng sinh tế bào MCF-7 của các mẫu thử này.
Cấy trải tế bào vào đĩa 96 giếng với mật độ 1,5 x 103 tế bào/giếng trong môi trường DMEM có bổ sung 10% FBS và 1% penicillin - streptomycin; nuôi cấy ở 37oC, 5% CO2/95% độ ẩm trong 24h. Sau 24h, loại bỏ mơi trường cũ, thay bằng 150µl mơi trường DMEM khơng có phenol + 5% huyết thanh thai bò đã được xử lý than hoạt vào mỗi giếng, đồng thời thêm các nồng độ khác nhau của mẫu nghiên cứu khơng gây độc tính trên tế bào MCF -7.
Chuẩn bị mẫu huyết thanh thai bò xử lý than hoạt để thí nghiệm:
- Ủ qua đêm ở 4oC huyết thanh được phủ than hoạt (nồng độ 0,25%) trong 0,25M sucrose/1,5mM MgCl2/10mM HEPES.
- Sau đó đem ly tâm 500 RCF trong 10 phút. Gạn phần nổi phía trên và thay bằng cùng 1 thể tích FBS.
- Trộn đều than với huyết thanh và ủ trong 2 x 45 phút ở 56oC.
Sau đó ni cấy tế bào trong 6 ngày. Thay môi trường nuôi cấy 3 ngày/lần và bổ sung các mẫu nghiên cứu. Sau 6 ngày, đánh giá tác dụng kích thích tăng sinh bằng thử nghiệm MTT như trình bày ở trên. Đo mật độ quang ở bước sóng 540 nm bằng máy đọc đĩa 96 giếng và sự tăng sinh tế bào được biểu thị dưới dạng giá trị hấp thụ.
Mỗi nồng độ được tiến hành thử nghiệm trên 2 giếng (lấy giá trị trung bình) và thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần.
Thông số đánh giá: Sự tăng sinh tế bào MCF-7 so với nhóm chứng khơng có mẫu nghiên cứu.